多糖的分子量与分子量分布测定法
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| 药品名称 | 多糖的分子量与分子量分布测定法 |
| 类别 | 原料药 |
| 全文 | 多糖的分子量与分子量分布是用高效液相色谱法(中国药典1995年版二部附录ⅤD)测定。 1.对仪器的一般要求所用仪器为高效液相色谱仪。 色谱柱为测多糖专用凝胶柱，根据所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱。 检测器为示差折光检测器单用，有时亦可与紫外检测器联用。 2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分析状态下的分配系数(Kd)应达到规定的要求。 (1)n=5.54(t<[R]>/W<[h/2]>)<2> (2)K<[d]>=t<[R]>-t0/tT-t0 式中 W<[h/2]>为半峰宽；t<[R]>为供试品峰的保留时间，用于测柱效时，指葡萄糖峰的保留时间；t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间；tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。 3.测定法 (1)系统校正 根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品(常用的为葡聚糖dextran)，分别用流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液，分别注入25μl标准品溶液，记录示差色谱图。 由GPC专用软件绘制标准曲线。 线性回归方程为：logM<[w]>＝a+bRT式中 M<[w]>为标样的已知重均分子量；RT为标样的保留时间。 (2)样品测量 注入25μl供试品溶液，记录示差色谱图，分子量计算如下： Mn＝ΣRI<[i]>/Σ(RI<[i]>/M<[i]>Mw＝Σ(RI<[i]>M<[i]>)/ΣRI<[i]>D＝Mw/Mn 式中 Mn为数均分子量；RIi为样品i级分的物质量，即示差色谱图的峰高；Mi为样品i级分的分子量，即示差色谱图I时间点代入标准曲线获得的分子量。 4.结果处理采用GPC专用软件，可获得样品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片断数据)和各种平均分子量。 根据供试品需要选择各项测定结果。 |