生物制品化学规定规程
本规程载人的化学检定项目，如采用其他方法测定，其结果与本规程所列应无显著差异。如遇制品质量存在疑问时，其最后判定应以本规程所列方法测定结果为准。
标准液的配制与标定方法参看最新版《中国药典》。
PH值测定(电位法)
1 仪器校准(定位)用标准缓冲溶液
应使用分析纯标准缓冲物质配制。
1.1 0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液
称取于115±5℃干燥2～3小时的邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)10.12±0.01g，溶于蒸馏水，并稀释至1000ml。
1.20.025mol/L磷酸氢二钠和0.025mol/L磷酸二氢钾混合溶液
分别称取在115±5℃干燥2～3小时的磷酸氢二钠(Na2HPO4)3.53±0.01g和磷酸二氢钾(KH2PO4)3.39±0.01g，溶于预先煮沸过15～30分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。
1.30.01mol/L硼砂溶液
称取硼砂(Na2B4O7·10H2O)3.80±0.01g(注意：不能烘!)，溶于预先煮沸过15～30分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。
标准缓冲溶液于0～50℃的标准pH值
|
温度(℃) |
0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾 |
0.025mol/L混合磷酸盐 |
0.01mol/L硼砂 |
|
0 |
4.01 |
6.98 |
9.46 |
|
5 |
4.00 |
6.95 |
9.39 |
|
10 |
4.00 |
6.92 |
9.33 |
|
15 |
4.00 |
6.90 |
9.28 |
|
20 |
4.00 |
6.88 |
9.23 |
|
25 |
4.00 |
6.86 |
9.18 |
|
30 |
4.01 |
6.85 |
9.14 |
|
35 |
4.02 |
6.84 |
9.10 |
|
40 |
4.03 |
6.84 |
9.07 |
|
45 |
4.04 |
6.83 |
9.04 |
|
50 |
4.06 |
6.83 |
9.02 |
2 操作
使用玻璃电极酸度计测定，操作方法按仪器说明书进行。用两种标准缓冲溶液校正或核对，相差不得超过0.05。
固体总量测定
甲、105℃干烤法
1 操作
精确量取一定体积样品于干燥至恒重的扁称量瓶中，置105℃烤箱中烘至恒重。
2 计算
烘干后样品重量
样品固体总量%(g/ml)= ──────────×100
样品ml数
乙、50℃干烤法
1 操作
精确量取1mlA群脑膜炎球菌多糖菌苗半成品原液于已干燥至恒重的称量瓶(2×2.5cm)中，置50℃干燥箱中，干燥至恒重。
2 计算
同105℃干烤法。
半微量定氮法
1 试剂
1.1 硫酸
化学纯，比重1.84。
1.2 消化剂
硫酸铜(CuSO4·5H2O)1份与硫酸钾(K2SO4)10份共同研细混匀即成。
1.3 12.5mol/L氢氧化钠液
取氢氧化钠500g，加蒸馏水至1000ml，摇匀。
1.4 2%硼酸吸收液
硼酸20g加蒸馏水使溶解成1000ml，加混合指标剂10ml，摇匀。
1.5 混合指示剂
0.2%(g/ml)溴甲酚绿酒精溶液5份与0.1%(g/ml)甲基红酒精溶液2份混合配成。
1.6 标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸溶液。
2 操作
2.1 消化
准确量取一定体积样品(含氮量在1～2mg左右)于凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，浓硫酸1.0ml进行消化，至澄明蓝绿色，继续消化约60分钟，同时做空白。
2.2 蒸馏与滴定
取10ml硼酸吸收液于100ml三角瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的样品移入凯氏蒸馏器内，用蒸馏水洗定氮瓶3～4次，洗液亦移入蒸馏器内，再加5ml 12.5mol/L氢氧化钠溶液，然后进行蒸馏，待接收液总体积约35～50ml, 将冷凝管末端取出液面，让蒸汽冲洗约1分钟，再用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，接收液用标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸进行滴定，至溶液显著变色。
3 计算
(样品滴定数 – 空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14
样品总氮含量(mg/ml)────────────────────────
样品ml数
附注
1.蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟。
2.蒸汽发生瓶内应加数滴硫酸及甲基红指示剂至呈明显红色。
蛋白质含量测定
甲、钨酸沉淀法
1 试剂
1.110%钨酸钠溶液
取钨酸钠10g，加蒸馏水使溶解成100ml。
1.2 0.33mol/L硫酸溶液
量取化学纯硫酸1.86ml，缓缓注入适量的蒸馏水中，待冷加水稀释至100ml。
1.3 0.145mol/L氯化钠溶液
取氯化钠9g，加蒸馏水使溶解成1000ml。
2 操作
2.1 钨酸除蛋白质
精确量取样品2ml加蒸馏水14ml，加10%钨酸钠2ml，0.33mol/L硫酸2ml，摇匀，静置30分钟过滤。
2.2 精确量取样品1ml，用0.145mol/L氯化钠溶液准确稀释至每ml含氮量1mg左右。
2.3 精确量取稀释液1ml及除蛋白质滤液5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。
3 计算
样品总氮含量(mg/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×稀释倍数
样品非蛋白氮含量(mg/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×12
样品蛋白质含量 (g/ml)=(总氮-非蛋白氮)×6.25×1/10
附注
1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大样品稀释倍数，10%钨酸钠及0.33mol/L硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持1%。
2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。
乙、三氯醋酸沉淀法
1 2%三氯醋酸溶液
取三氯醋酸12g，加蒸馏水溶解至100ml。
2 操作
精确量取一定体积的样品(含蛋白质6～12mg左右，于10ml尖底离心管中，加等体积的12%三氯醋酸混匀，放置半小时后3000r/min离心30分钟，倾净上清，沉淀用蒸馏水约3ml(分数次)洗入凯氏烧瓶，按半数量定氮法测定氮含量。
3 计算
(样品滴定数 – 空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14
样品蛋白质含量(mg/ml)──────────────────────×6.25
样品ml数
丙、微量法(Lowry法)
1.试剂
1.1 4%碳酸钠溶液
取4g碳酸钠，加蒸馏水溶解成100ml。
1.2 0.2mol/L氢氧化钠溶液
取0.8g氢氧化钠加蒸馏水，溶解成100ml。
1.3 0.04mol/L硫酸铜溶液
取1gCuSO4·5H2O加蒸馏水溶解成100ml。
1.42%酒石酸钾(或0.1mol/L酒石酸钠)
取2g酒石酸钾(或酒石酸钠)，加蒸馏水溶解成100ml。
1.5 碱性铜液
临用前取试剂1.1和1.2各25ml，试剂1.3和1.3各0.5ml混匀配制而成。
1.6 酚试剂
称取100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25g钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)，置1500ml烧瓶中，加入700ml蒸馏水，50ml 85%磷酸及100ml浓盐酸，上联回流管(使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞)微沸加流10小时，取下回流管，加入150g硫酸锂，50ml蒸馏水，几滴溴液，煮沸约15分钟，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。
酚试剂贮备液经标准氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当1mol/L盐酸浓度，即为酚试剂。
1.7 标准蛋白质溶液
取牛血清白蛋白标准品(由检定所统一标定发给)，准确稀释至1mg/ml(含0.02%NaN3)，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5ml于25ml容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度，为标准蛋白质溶液(100μg/ml)。
2 操作
2.1 样品
精确量取一定体积样品(含蛋白质50μg左右)于试管中，加5ml碱性铜液，混匀，于室温放置10分钟，快速加入0.5ml酚试剂，摇匀，于室温放置30分钟，用650nm波长或红色滤光片比色(呈色后，如发现混浊，经3000r/min离心15分钟后再比色)。
2.2 标准曲线
精确量取标准蛋白质溶液(100μg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于试管中，加蒸馏水补至1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。
3 计算
从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之ml数A；
A×0.01%
样品蛋白质含量(g/ml)= ────────
样品ml数
附注
检测A群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取1ml(含抗原3～10mg)。
硫酸铵含量测定
1 试剂
1.1 1mol/L氢氧化钠液
取化学纯氢氧化钠20g，加蒸馏水溶解成500ml。
2 操作
2.1 除蛋白质
方法同蛋白质含量测定。
2.2 蒸馏
精确量取除蛋白质滤液10ml于凯氏蒸馏器内，加1mol/L氢氧化钠1ml，加少量蒸馏水，按半微量定氮法进行蒸馏、滴定。
3 计算
样品硫酸铵含量%(g/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×4.715×1/10
氯化钠含量测定
1 试剂
1.1 0.1mol/L硝酸银溶液
取硝酸银17g，加蒸馏水溶解成 1000ml。
1.2 标准0.05mol/L硫氰酸铵溶液
1.3 5.5mol/L硝酸
1.4 8% 硫酸铁铵指示液
取8g硫酸铁铵，加蒸馏水溶解成 100ml。
1.5 饱和高锰酸钾
取高锰酸钾6.5g，加蒸馏水溶解成 100ml。
2 操作
2.1 精确吸取样品1ml，准确加入 0.1mol/L 硝酸银溶液5ml ，混匀(蛋白质含量高者加2ml饱和高锰酸钾)，加 10ml硝酸 (5.5mol/L) ，直接加热消化至溶液澄清为止。待冷，加蒸馏水50ml, 8%硫酸铁铵指示液1ml,用标准 0.05mol/L硫氰酸铵溶液滴定至溶液呈淡棕红色，振摇匀仍不退色，即为终点。
2.2 空白试验
准确量陬0.1 mol/L硝酸银溶液 5ml，加硝酸 (5.5 mol/L)10ml，可不消化，其余操作同样品。
3 计算
样品氯化钠含量%(g/ml)＝(空白滴定数-样品滴定数)×硫氰酸铵 mol/L×5.845
钠离子含量测定(火焰光度法)
1 试剂
标准钠溶液：精确称取于110℃干燥至恒重的 NaCl2.9227g,用双蒸水溶解并稀释至 1000ml, 为500mmol/L标准钠溶液。
2 操作
2.1 样品
精确量取样品0.5ml于 50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计， 589nm波长(或黄色滤光片)测其透光度。
2.2 标准曲线
精确量取标准钠溶液0.9、1.1、1.3、1.5、1.7ml 于50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钠含量分别为0.9、1.1、1.3、1.5、1.7mmol/L，其余操作同样品。
3 计算
由标准曲线上查出稀释后样品钠含量为A mmol/L 。
样品钠含量(mmol/L)=A×100
钾离子含量测定(火焰光度法
1 试剂
标准钾溶液：精确称取于110℃干燥至恒重的 KCl 0.3728g，用双蒸水溶解并稀释至 500ml ，为10mmol/L标准钾溶液。
2 操作
2.1 样品
精确量取样品2ml 于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计 769nm波长(或红色滤光片)测其透光度。
2.2 标准曲线
精确量取标准钾溶液0.15、0.30、0.45、0.60、0.75ml 于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钾含量分别为 0.03、0.06、0.09、0.12、0.15mmol/L，其余操作同样品。
3 计算
由标准曲线上查出稀释后样品钾含量为Ammol/L 。
样品钾含量(mmol/L)=A×25
枸橼酸离子含量测定
1 试剂
1.1 标准枸橼酸钠浓溶液
精确称取枸橼酸钠(Na3C6H标准5O7·2H2O)0.5882g,加蒸馏水溶解，并准确稀释至 100ml ，为20 mmol/L 枸橼酸钠液。
1.2 标准枸橼酸钠溶液
精密量取标准枸橼酸钠浓溶液5ml，用5%三氯醋酸准确稀释至50ml，为2mmol/L枸橼酸钠标准液。
1.310%三氯醋酸：称取三氯醋酸10g，用蒸馏水稀释至 100ml。
1.45%三氯醋酸：称取三氯醋酸5g，用蒸馏水稀释至 100ml。
1.5 砒啶(A·R)。
1.6 醋酸酐(A·R)。
2 操作
2.1 样品
精确量取0.5ml样品，加 4.5ml 蒸馏水，加5ml10%三氯醋酸，混匀，置60℃水浴 5分钟，离心去沉淀。精确量取 1ml上清液于 25ml玻塞试管中，加 1.3ml吡啶，混匀，加 5.7ml 醋酸酐，立即混匀并置于31℃水浴，准确培育 35分钟后，于 425nm波长下测 OD值，同时做空白试验：取 1ml 5%三氯醋酸代替1ml去蛋白后样品上清液，其余操作同样品。
2.2 标准曲线
精确量取标准枸橼酸钠溶液0.0、0.25、0.50、0.75、1.0ml, 分别加5%三氯醋酸1.0、0.75、0.5、0.25、0.0ml (其相应的枸橼酸钠离子含量为0、0.5、1.0、1.5、2.0mmol/L )，其余操作从加1.3ml吡啶开始同样品。可得一标准曲线。
3 计算
由标准曲线查得样品稀释液相当标准枸橼酸离子Ammol/L。
样品枸橼酸离子含量 (mmol/L)=A×20
亚硫酸氢钠含量测定
1 试剂
1.1 0.1mmol/L碘液
1.2 标准 0.1mmol/L硫代硫酸钠液
1.3 0.5%淀粉指示剂
取可溶性淀粉0.5g，加蒸馏水 5ml搅匀后，缓缓倾入 100ml沸蒸馏水中，随加随搅拌，煮沸，至适成稀薄的半透明液，放置使沉淀，倾取上层清液(配制时可加适当的防腐剂)。
1.4 6mol/L盐酸
2 操作
精确量取脑炎疫苗5 ~ 10ml 或一定体积亚硫酸氢钠液(含亚硫酸氢钠2.5mg左右)于碘瓶中，精确加入 0.1mol/L碘液 20ml，放置 5分钟，沿瓶壁加 6 mol/L盐酸 2ml，摇匀，用标准 0.1 mol/L硫代硫酸钠液滴定至溶液呈浅黄色，加 0.5% 淀粉指示剂约0.5ml，滴定至蓝色消失，同时做空白。
(空白滴定数-样品滴定数) ×硫代硫酸钠mol/L×5.203
样品亚硫酸氢钠含量%(g/ml)=─────────────────────
样品ml数
附注
如测定样品为亚硫酸氢钠液，只需根据其浓度和取样量，在测定时适当增加0.1mol/L碘液的用量即可。
氢氧化铝(或磷酸铝)含量测定
甲、滴定法
1 试剂
1.1 0.05 mol/L EDTA标准液。
1.2 标准 0.025 mol/L锌液。
取标准0.05 mol/L锌液稀释。
1.3 Ph4.5醋酸铵缓冲液
称取醋酸铵 77.1g，溶于适量的蒸馏水中，加冰醋酸 58ml, 稀释至1000ml。
1.40.1%二甲酚橙指示剂。
1.5 0.95 mol/L 磷酸
量取磷酸6ml，稀释至 100ml。
2 操作
精确量取吸附精制类毒素适量(含铝1～10mg)，置 250ml三角瓶中，加 0.95 mol/L 磷酸1.5ml，使完全溶解。必要时于水浴加温(难于溶解时尚可适当增加磷酸量)。加 0.05 mol/L EDTA10ml, Ph4.5 醋酸铵缓冲液10ml，于沸水浴中加热 10 分钟，冷至室温加0.1%二甲酚橙 1ml，用 0.025 mol/L锌标准液进行滴定，当溶液由亮黄转变为橙色，即为终点。同时做空白试验。
3 计算
(空白滴定数-样品滴定数) ×标准锌液mol/L×78.01
样品氢氧化铝含量(mg/ml)=───────────────────────
样品ml数
(空白滴定数-样品滴定数) ×标准锌液mol/L×121.95
样品磷酸铝含量(mg/ml)= ────────────────────────
样品ml数
(空白滴定数-样品滴定数) ×标准锌液mol/L×26.98
样品铝含量(mg/ml)= ────────────────────────
样品ml数
乙、比色法
1 试剂
1.1 0.95mol/L磷酸
取磷酸 6ml ，稀释至100ml。
1.2 1.5mol/L盐酸
1.31.2mol/L盐酸
1.4 0.2%铝试剂溶液
1.51.3mol/L醋酸铵溶液
1.6 标准铝溶液
精确称取钾明矾[KAl(SO4)2·12H2O]0.3518g, 加1.5mol/L HCl 8ml ，加蒸馏水到1000ml，为含铝20μg/ml的标准液。
2 操作
2.1 样品
精密量取吸附制品 1ml (含铝0.5～1mg)于 50ml 容量瓶中，加0.95mol/L 磷酸1.5ml,使完全溶解(必要时于水浴加温)，用水稀释至刻度。
取稀释样品1ml于 25ml带塞刻度试管中，加 1.2mol/L 盐酸1ml, 加水15ml,0.2% 铝试剂1ml，摇匀，加 1.3mol/L醋酸铵溶液 5ml,加水至 25ml, 摇匀，放置15 分钟，用530nm波长比色。
2.2 标准曲线
取标准铝溶液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25ml于25ml带塞刻度试管中，铝含量分别为 0、5、10、15、20、25μg，其余操作同样品管。绘制标准曲线。
3 计算
由标准曲线查出铝含量为Aμg。
Al(OH)3(mg/ml)=A×2.8918×50/1000
Al(PO4)(mg/ml)=A×4.52×50/1000
附注
边缘制品以滴定法为准。
游离甲醛测定
1 试剂
1.1 复红亚硫酸试剂
1.1.1 取碱性复红4.5g 于3000ml三角瓶中加蒸馏水 1500ml,振摇或加温使复红全部溶解，待冷后，加10g 亚硫酸钠，摇匀，静置5～10分钟，再加入 40ml 3mol/L硫酸，摇匀，以橡皮塞塞紧瓶口，放置过夜，如有颜色，加骨炭5～10g迅速摇匀，以布氏漏斗快速抽滤。
1.1.2 试剂之SO2含量可控制在28～48mmol/L(SO2含量过多可通空气驱除之，过少可通入SO2)。
SO2含量测定：吸取复红亚硫酸试剂10ml于三角瓶内。加蒸馏水20ml，0.5%淀粉指示剂5ml，用0.1mol/L碘液滴定至呈浅蓝色。
计算：SO2mmol/L=50×碘液ml数×碘液mmol/L
1.2 混合酸
量取蒸馏水783ml于烧杯内，缓缓注入42ml盐酸，175ml硫酸，混匀。
1.3 标准甲醛溶液
为0.005%(g/ml)甲醛溶液。
精确量取已标定的甲醛溶液Vml，于500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，临用时10倍稀释。
500×0.05
V= ─────────────
标定甲醛溶液含量%(g/ml)
2 操作
2.1 样品
精确量取样品1ml，用蒸馏水稀释至甲醛含量在0.003%(g/ml)左右。取稀释液2ml于50ml比色管中加蒸馏水到5ml，加10ml复红试剂，10ml混合酸，摇匀，在25℃放置3小时，用590nm波长比色。
2.2 标准曲线
精确量取0.005%(g/ml)标准甲醛溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分别置于50ml比色管中，加蒸馏水至总体积为5ml，其余操作同样品。可得一标准曲线。
3 计算
从标准曲线查出样品相当标准甲醛溶液之ml数A。
样品游离甲醛含量%(g/ml)=A×0.005×稀释倍数
附注
1.标准液和样品与复红试剂的显色时间，有时不一致，测定时，显色慢者应酌情早加复红试剂。
2.样品中如含有酚红，标准管中应予以校正。
3.可做限度测定。
苯酚含量测定
1 试剂
1.1 0.02mol/L溴液
取0.56g溴酸钾，加3g溴化钾，加蒸馏水溶解成1000ml。
1.2 25%碘化钾溶液
取碘化钾25g，加蒸馏水溶解成100ml。
, 百拇医药
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