晚期妊娠引产产妇血浆及脐血中的米非司酮浓度测定
作者：罗劲松 赵志刚 高婉丽 李隆敏
单位：北京天坛医院 北京100050
关键词：米非司酮；妊娠晚期；HPLC；胎盘屏障
中国医院药学杂志980103 摘要 采用高效液相色谱法(HPLC)测定产妇血浆及脐血中米非司酮血药浓度。结果显示:对照组(正常产妇)妊娠晚期体内含有内源性米非司酮类似物,产程进入活跃期后无明显变化;服药组(口服米非司酮150mg)产程活跃期静脉血中米非司酮浓度1.1μg.ml-1,此结果与宫颈成熟度、产程长短等临床指征的变化相对应,说明米非司酮的抗孕酮作用与其浓度相关,并存在明显的个体差异。服药组产妇脐血米非司酮浓度明显高于对照组,表明米非司酮可以透过胎盘屏障,进入脐血,透过量与母体产程活跃期时的血中药物浓度成正比。
, http://www.100md.com HPLC assay for mifepristone level in plasma and umbilical cord blood of parturient
Luo Jingsong,Zhao Zhigang,Gao Wanli,et al (Beijing Tiantan Hospital,Beijing 100050)
Mifepristone compatible with misoprostol was used for inducing labor in late pregnancy.The mifepristone concentration in plasma and umbilical cord blood was measured by HPLC.The conclusion indicated:there was endogenous mifepristone in the control group (normal parturient),and no change in activation period.In venous blood of the experimental group (who took mifepristone 150 miligram),the mifepristone concentration was 1.1μg.ml-1.This result corresponds to clinical signs such as Bishop score increasings,uterine neck softings,labor shortings and so on.This means antiprogestin effect of mifepristone is related to its concentration,and there exists individual differences.The mifepristone concentration in umbilical cord blood in the experimental group is obviously higher than in the control group.This includes mifepristone which can transport through the placental barrier,and the mass of transportation has a direct ratio with the drug concentration in the activation period.
, 百拇医药
Key words mifepristone,late pregnant induce,HPLC,placental barrier
米非司酮(Mifepristone,简称RU486)配伍米索前列醇终止早孕已在全世界范围内广泛应用。但有关晚期妊娠引产的报道[1-3]较少。我们建立了以HPLC方法测定产妇静脉血以及脐血中的米非司酮浓度,着重分析其在产妇体内代谢及分布情况,为米非司酮配伍米索前列醇在晚期妊娠引产方面的应用提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 药品与试剂 米非司酮对照品(北京第三制药厂,含量99.7%,批号950617);米非司酮片(北京第三制药厂,每片50mg);米索前列醇片(美国Searle公司,每片200mg);甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);正己烷、二氯甲烷(分析纯)重蒸后使用。
, http://www.100md.com
1.2 仪器和色谱条件 Waters 510 HPLC;Waters 484 UV检测器;色谱柱:46mm×250mm,10μm ODS/YWG;流动相:甲醇∶乙腈∶水(42∶28∶30),pH 4.7;流速1.0ml.min-1;检测波长302nm;进样量25μl。
1.3 血浆和脐血中米非司酮浓度的测定 取血浆样品1ml,加入正己烷∶二氯甲烷(7∶4)的处理液5ml,振荡,离心。吸取上清液,下层重复处理。合并上清液,于60℃挥干,残渣加100μl甲醇,溶解后进样25μl。
1.4 米非司酮标准曲线 准确称取米非司酮对照品,用甲醇稀释精确配制成浓度为100,200,500,1000ng.ml-1的标准溶液,进样25μl,以峰面积Y为纵坐标,浓度X为横坐标作标准曲线,得线性回归方程(1)为Y=-80+30.05X,r=0.9999。
, 百拇医药
经血浆处理后的米非司酮标准曲线:取空白血浆1ml,精密加入100,200,500,1000ng.ml-1标准溶液100μl,处理同样品,得线性回归方程(2)为Y=-401+17.24X,r=0.9919。色谱图见图1,两标准曲线见图2。
图 1 色谱图
A 空白血浆;B 空白血浆+米非司酮
图 2 米非司酮标准曲线及经血浆处理后的米非司酮标准曲线
× 米非司酮 △ 血浆中米非司酮
1.5 米非司酮回收试验和精密度试验 吸取空白血浆1ml,精密加入一定量的标准溶液,处理同样品。处理后每个浓度分别在日内、日间重复进样6次,根据线性回归方程(2)计算其相对回收率以及日内、日间相对标准差(RSD),结果见表1。
, 百拇医药
表 1 米非司酮血浆相对回收率和精密度 理论浓度
(ng.ml-1)
实测浓度
(ng.ml-1)
相对回收率
(%)
日内误差
RSD(%)
日间误差
RSD(%)
, 百拇医药
100
103.9±7.8
102.5
3.6
4.4
250
245.8±9.3
98.0
2.5
2.5
400
389.7±12.6
97.4
, 百拇医药
3.7
4.7
600
563.5±10.3
94.1
4.0
5.1
800
788.2±10.2
97.6
2.7
4.8
±s
, 百拇医药
97.9±3.0
3.3±0.7
4.3±1.0
1.6 试验对象和用药方法 40名健康初产妇,既往体健,平均年龄25.3岁,妊娠38～41周,经体检肝、肾和心脏功能正常。单胎头位,有引产指征。采用随机分组分为服药组和对照组。服药组服用米非司酮50mg.d-1,qd,连服3d,第4天加米索前列醇片。观察宫缩发动情况。于服用米非司酮前、产程活跃期(宫口开大3cm以上)抽取产妇静脉血及脐血各3ml,置于肝素管中,分离血浆后置-30℃冰箱中待测。对照组不给予非米司酮,抽取产程活跃期产妇静脉血及脐血,同样处理。2 结果
2.1 服药组、对照组产妇情况资料 从年龄、孕次、体重及孕周等方面比较,无差异,可比性良好。
, 百拇医药 2.2 米非司酮血药浓度 对照组20例中有2例未得到活跃期产妇静脉血,故完整病例数为18例。活跃期产妇静脉血中药物浓度为112±51ng.ml-1,脐血中为35±20ng.ml-1,两者之间差异无显著性(P>0.05)。服药组20例中有3例未得到脐血,故完整病例数为17例。服药前静脉血中米非司酮浓度为106±44ng.ml-1,服药后产程活跃期药物浓度1116±343ng.ml-1,脐血中为436±161ng.ml-1,与对照组相比差异具显著性(P<0.05)。以不同阶段为横坐标,浓度为纵坐标作图,见图3。
图 3 对照组及服药组米非司酮血药浓度分布图……对照组,——服药组
2.3 服药组与对照组在引产前后观察宫颈变化情况,宫颈成熟程度,产程情况,统计结果见表2。
, 百拇医药
表 2 引产前后临床指征变化参数表 组别
宫颈成熟效果
产程
(h)
引 产 效 果
有效(%)
无效(%)
有效(%)
无效(%)
服药组
100
0*1
, 百拇医药
8.8±2.9*2
92.1
7.9*1
对照组
80
20
10.3±4.1
76.7
23.3
与对照组相比 *1 P<0.05,*2 P>0.05
3 结论
3.1 本实验对米非司酮的血浆处理方法进行了一些改进。有国内、国外文献报道采用干冰-丙酮浴冷冻的方法提取血中的米非司酮及其代谢产物[4.5],此方法操作较复杂,且有一定的危险性。我们选用以正己烷∶二氯甲烷的混合液作为蛋白沉淀剂及米非司酮的提取液,且提取物包括米非司酮及其代谢产物,由此得到的总浓度更趋于合理。
, 百拇医药
3.2 对照组结果显示,未服药产妇在分娩过程中体内含有少量的内源性米非司酮,但其浓度在产程活跃期前后无明显变化,说明内源性米非司酮不是发动宫缩的主要原因。
3.3 服药组产程活跃期静脉血中米非司酮浓度高于对照组同期水平,差异具显著性,此结果与服药组引产前后临床指征变化显著,引产成功率高相一致。说明米非司酮在晚期妊娠引产过程中具有明确的促进作用。
3.4 服药组脐血中米非司酮浓度明显高于对照组,说明米非司酮在代谢过程中可以透过胎盘屏障,此结论与文献报道相一致[6.7]。本实验数据还显示透过量与母体产程活跃期时的米非司酮浓度比例为2.55∶1,相关系数0.71(P<0.01)。脐血中较高浓度的非米司酮是否对婴儿有影响,有待进一步观察研究。
参考文献
1 Garfield R E.Effects of the antiprogesterone RU486 on perterm birth in the rat.Am J Obstet Gynecol,1987,157:1281
, 百拇医药
2 Lelaidier C.Induction of labour with mifepristone.Br J Obstet Gynecol,1990,97:406
3 Lelaidier C.Mifepristone and therapeutic late pregnancy termination.Br J Obstet Gynecol,1994,101:501
4 张国庆,叶智厚,石永恩等.高效液相色谱分析人血中RU486及其代谢产物.生殖与避孕,1991,11(1):26
5 石永恩,叶智厚,贺昌海等.孕妇及非孕妇口服不同剂量RU486后的药物动力学研究.生殖与避孕,1992,12(1):8
6 Hill N C W,Selinger M,Feroguson J,et al.The placental transfer of mifepristone during the second trimester and its influence upon maternal and fetal steriod concentration.Br J Obstet Gynecol,1990,97:406
7 Frydman R,Claus G,Joseph E,et al.Transplacental passage of mifepristone.Lancet ii,1019
(1997年2月19日收稿), http://www.100md.com
单位：北京天坛医院 北京100050
关键词：米非司酮；妊娠晚期；HPLC；胎盘屏障
中国医院药学杂志980103 摘要 采用高效液相色谱法(HPLC)测定产妇血浆及脐血中米非司酮血药浓度。结果显示:对照组(正常产妇)妊娠晚期体内含有内源性米非司酮类似物,产程进入活跃期后无明显变化;服药组(口服米非司酮150mg)产程活跃期静脉血中米非司酮浓度1.1μg.ml-1,此结果与宫颈成熟度、产程长短等临床指征的变化相对应,说明米非司酮的抗孕酮作用与其浓度相关,并存在明显的个体差异。服药组产妇脐血米非司酮浓度明显高于对照组,表明米非司酮可以透过胎盘屏障,进入脐血,透过量与母体产程活跃期时的血中药物浓度成正比。
, http://www.100md.com HPLC assay for mifepristone level in plasma and umbilical cord blood of parturient
Luo Jingsong,Zhao Zhigang,Gao Wanli,et al (Beijing Tiantan Hospital,Beijing 100050)
Mifepristone compatible with misoprostol was used for inducing labor in late pregnancy.The mifepristone concentration in plasma and umbilical cord blood was measured by HPLC.The conclusion indicated:there was endogenous mifepristone in the control group (normal parturient),and no change in activation period.In venous blood of the experimental group (who took mifepristone 150 miligram),the mifepristone concentration was 1.1μg.ml-1.This result corresponds to clinical signs such as Bishop score increasings,uterine neck softings,labor shortings and so on.This means antiprogestin effect of mifepristone is related to its concentration,and there exists individual differences.The mifepristone concentration in umbilical cord blood in the experimental group is obviously higher than in the control group.This includes mifepristone which can transport through the placental barrier,and the mass of transportation has a direct ratio with the drug concentration in the activation period.
, 百拇医药
Key words mifepristone,late pregnant induce,HPLC,placental barrier
米非司酮(Mifepristone,简称RU486)配伍米索前列醇终止早孕已在全世界范围内广泛应用。但有关晚期妊娠引产的报道[1-3]较少。我们建立了以HPLC方法测定产妇静脉血以及脐血中的米非司酮浓度,着重分析其在产妇体内代谢及分布情况,为米非司酮配伍米索前列醇在晚期妊娠引产方面的应用提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 药品与试剂 米非司酮对照品(北京第三制药厂,含量99.7%,批号950617);米非司酮片(北京第三制药厂,每片50mg);米索前列醇片(美国Searle公司,每片200mg);甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);正己烷、二氯甲烷(分析纯)重蒸后使用。
, http://www.100md.com
1.2 仪器和色谱条件 Waters 510 HPLC;Waters 484 UV检测器;色谱柱:46mm×250mm,10μm ODS/YWG;流动相:甲醇∶乙腈∶水(42∶28∶30),pH 4.7;流速1.0ml.min-1;检测波长302nm;进样量25μl。
1.3 血浆和脐血中米非司酮浓度的测定 取血浆样品1ml,加入正己烷∶二氯甲烷(7∶4)的处理液5ml,振荡,离心。吸取上清液,下层重复处理。合并上清液,于60℃挥干,残渣加100μl甲醇,溶解后进样25μl。
1.4 米非司酮标准曲线 准确称取米非司酮对照品,用甲醇稀释精确配制成浓度为100,200,500,1000ng.ml-1的标准溶液,进样25μl,以峰面积Y为纵坐标,浓度X为横坐标作标准曲线,得线性回归方程(1)为Y=-80+30.05X,r=0.9999。
, 百拇医药
经血浆处理后的米非司酮标准曲线:取空白血浆1ml,精密加入100,200,500,1000ng.ml-1标准溶液100μl,处理同样品,得线性回归方程(2)为Y=-401+17.24X,r=0.9919。色谱图见图1,两标准曲线见图2。
图 1 色谱图
A 空白血浆;B 空白血浆+米非司酮
图 2 米非司酮标准曲线及经血浆处理后的米非司酮标准曲线
× 米非司酮 △ 血浆中米非司酮
1.5 米非司酮回收试验和精密度试验 吸取空白血浆1ml,精密加入一定量的标准溶液,处理同样品。处理后每个浓度分别在日内、日间重复进样6次,根据线性回归方程(2)计算其相对回收率以及日内、日间相对标准差(RSD),结果见表1。
, 百拇医药
表 1 米非司酮血浆相对回收率和精密度 理论浓度
(ng.ml-1)
实测浓度
(ng.ml-1)
相对回收率
(%)
日内误差
RSD(%)
日间误差
RSD(%)
, 百拇医药
100
103.9±7.8
102.5
3.6
4.4
250
245.8±9.3
98.0
2.5
2.5
400
389.7±12.6
97.4
, 百拇医药
3.7
4.7
600
563.5±10.3
94.1
4.0
5.1
800
788.2±10.2
97.6
2.7
4.8
±s
, 百拇医药
97.9±3.0
3.3±0.7
4.3±1.0
1.6 试验对象和用药方法 40名健康初产妇,既往体健,平均年龄25.3岁,妊娠38～41周,经体检肝、肾和心脏功能正常。单胎头位,有引产指征。采用随机分组分为服药组和对照组。服药组服用米非司酮50mg.d-1,qd,连服3d,第4天加米索前列醇片。观察宫缩发动情况。于服用米非司酮前、产程活跃期(宫口开大3cm以上)抽取产妇静脉血及脐血各3ml,置于肝素管中,分离血浆后置-30℃冰箱中待测。对照组不给予非米司酮,抽取产程活跃期产妇静脉血及脐血,同样处理。2 结果
2.1 服药组、对照组产妇情况资料 从年龄、孕次、体重及孕周等方面比较,无差异,可比性良好。
, 百拇医药 2.2 米非司酮血药浓度 对照组20例中有2例未得到活跃期产妇静脉血,故完整病例数为18例。活跃期产妇静脉血中药物浓度为112±51ng.ml-1,脐血中为35±20ng.ml-1,两者之间差异无显著性(P>0.05)。服药组20例中有3例未得到脐血,故完整病例数为17例。服药前静脉血中米非司酮浓度为106±44ng.ml-1,服药后产程活跃期药物浓度1116±343ng.ml-1,脐血中为436±161ng.ml-1,与对照组相比差异具显著性(P<0.05)。以不同阶段为横坐标,浓度为纵坐标作图,见图3。
图 3 对照组及服药组米非司酮血药浓度分布图……对照组,——服药组
2.3 服药组与对照组在引产前后观察宫颈变化情况,宫颈成熟程度,产程情况,统计结果见表2。
, 百拇医药
表 2 引产前后临床指征变化参数表 组别
宫颈成熟效果
产程
(h)
引 产 效 果
有效(%)
无效(%)
有效(%)
无效(%)
服药组
100
0*1
, 百拇医药
8.8±2.9*2
92.1
7.9*1
对照组
80
20
10.3±4.1
76.7
23.3
与对照组相比 *1 P<0.05,*2 P>0.05
3 结论
3.1 本实验对米非司酮的血浆处理方法进行了一些改进。有国内、国外文献报道采用干冰-丙酮浴冷冻的方法提取血中的米非司酮及其代谢产物[4.5],此方法操作较复杂,且有一定的危险性。我们选用以正己烷∶二氯甲烷的混合液作为蛋白沉淀剂及米非司酮的提取液,且提取物包括米非司酮及其代谢产物,由此得到的总浓度更趋于合理。
, 百拇医药
3.2 对照组结果显示,未服药产妇在分娩过程中体内含有少量的内源性米非司酮,但其浓度在产程活跃期前后无明显变化,说明内源性米非司酮不是发动宫缩的主要原因。
3.3 服药组产程活跃期静脉血中米非司酮浓度高于对照组同期水平,差异具显著性,此结果与服药组引产前后临床指征变化显著,引产成功率高相一致。说明米非司酮在晚期妊娠引产过程中具有明确的促进作用。
3.4 服药组脐血中米非司酮浓度明显高于对照组,说明米非司酮在代谢过程中可以透过胎盘屏障,此结论与文献报道相一致[6.7]。本实验数据还显示透过量与母体产程活跃期时的米非司酮浓度比例为2.55∶1,相关系数0.71(P<0.01)。脐血中较高浓度的非米司酮是否对婴儿有影响,有待进一步观察研究。
参考文献
1 Garfield R E.Effects of the antiprogesterone RU486 on perterm birth in the rat.Am J Obstet Gynecol,1987,157:1281
, 百拇医药
2 Lelaidier C.Induction of labour with mifepristone.Br J Obstet Gynecol,1990,97:406
3 Lelaidier C.Mifepristone and therapeutic late pregnancy termination.Br J Obstet Gynecol,1994,101:501
4 张国庆,叶智厚,石永恩等.高效液相色谱分析人血中RU486及其代谢产物.生殖与避孕,1991,11(1):26
5 石永恩,叶智厚,贺昌海等.孕妇及非孕妇口服不同剂量RU486后的药物动力学研究.生殖与避孕,1992,12(1):8
6 Hill N C W,Selinger M,Feroguson J,et al.The placental transfer of mifepristone during the second trimester and its influence upon maternal and fetal steriod concentration.Br J Obstet Gynecol,1990,97:406
7 Frydman R,Claus G,Joseph E,et al.Transplacental passage of mifepristone.Lancet ii,1019
(1997年2月19日收稿), http://www.100md.com