青翘和老翘中连翘苷的含量测定
作者：张 玲 单卫华 时延增 徐新刚 李春玲
单位：张 玲 单卫华 时延增 徐新刚 济南 250014 山东省中医药研究所；李春玲 济南 250014 山东省药品检验所
关键词：连翘；连翘苷；青翘；老翘；薄层扫描
中国现代应用药学990119摘要 目的：测定青翘与老翘中连翘苷含量。方法：。双波长薄层扫描法。结果：青翘中连翘苷含量为0.076%；老翘中仅为0.012%。与报道的青翘中连翘酯苷含量高于老翘的实验结果相同，结论：本文结果与文献报道的就抗菌效价而言青翘优于老翘的结论吻合。目前市售药材青老翘混杂，有必要进行深入研究，确定合理的采收期。
Determination of forsythin content in Qingqiao and Laoqiao
, 百拇医药
Zhang Ling(Zhang L),Shan Weihua(Shan WH),Shi Yanzeng(Shi YZ),et al(Shandong Institute of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica,Jinan 250014)
ABSTRACT OBJECTIVE：This paper reported the determination of Forsythin content in Qingqiao and Laoqiao.METHODS:Dualwavelentht TLC-scanning was used.RESULTS:The content of forsythin in Qingqiao was 0.078% and that in Laoqiao was only 0.013%.CONCLUSION:The content of forsythin in Qingqiao was higher than that in Laoqiao.
, 百拇医药
KEY WORDS Lianqio,forsythin,Qingqiao,Laoqiao,TLC-densitometry
连翘[Forsythia suspen (Thunb) Vahl]为木樨科连翘属植物连翘的干燥果实。为常用的清热解毒中药。连翘的化学成分为挥发油，连翘苷等木脂素类，齐墩果酸等三萜酸类等[1]。其中连翘苷具有较强的抑菌作用，并能抑制CAMP、磷酸二酯酶的活性[2]。连翘根据其果实成熟程度，商品中有青翘和老翘之分。目前有关青翘和老翘中连翘苷含量的比较研究尚未见报道。为此，较青翘和老翘之间的异同，保证连翘的药用质量及临床疗效，本文采用薄层扫描法，进行了青翘和老翘中连翘苷的含量测定，实验结果表明青翘和老翘中连翘苷含量差异较大，青翘中连翘苷含量为0.078%；而老翘仅为0.013%。与文献报道的青翘中连翘酯苷含量高于老翘的实验结果相同[3]。
1 仪器与试药
, 百拇医药
CS-930薄层扫描仪(日本岛津公司)；PBQ-Ⅰ型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量毛细管(美国Drummond厂)。
连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所)；连翘药材(济南药材站，经本所彭广芳研究员鉴定符合药典规定)。甲醇、乙醇、氯仿、冰醋酸等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 药材样品供试液及对照品溶液的制备
药材样品供试液的制备：精称青翘及老翘药材各2g,置100ml圆底瓶中， 精密加入50ml水，精密称重，电热套加热回流提取1.5h,放冷，补足损失的水份，过滤，弃去初滤液，精取续滤液25ml,用氯仿提取4次(20,20,10和10ml),合并提取液，用水洗涤3次，弃去水液，水浴挥去氯仿，残渣以乙醇溶解，并定容至1ml量瓶中，作为各样品供试液。
, 百拇医药
对照品溶液的制备：精取连翘苷对照品2mg,加甲醇溶解，转移至2ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2 层析条件
硅胶G薄层板：取硅胶G加入0.2%的CMC-Na，自动铺板器铺成0.5mm(500μm)的薄层板，晾干，于105℃活化1h,置干燥器中备用。
展开剂；氯仿-甲醇-冰醋酸(85∶12∶0.5)。
显色剂：5%香兰素浓硫酸。
2.3 薄层层析
精密吸取上述药材样品供试液及连翘苷对照品溶液各2μl,点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开10cm,晾干，显色，烘干，连翘苷显鲜紫色斑点,Rf值为0.45,与其它成分斑点得到较好的分离。薄层图谱见图1。
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图1 连翘苷对照品及连翘药材的TLC图
1-连翘苷对照品；2-青翘样品供试液；3-老翘样品供试液
2.4 薄层扫描定量
2.4.1 仪器扫描条件：测定波长λS=540nm,参比波长λR=700nm;反射锯齿形扫描，线性参数SX=3,狭缝1.2mm×1.2mm,扫描速度20mm/min。
2.4.2 稳定性试验：精密吸取对照品溶液点于同一硅胶G薄层板上，层离，挥干溶剂，立即扫描，再每隔20min扫描一次，结果表明，连翘苷斑点在1h内稳定。
2.4.3 精密度试验：同一斑点连续扫描5次，测得RSD=0.88%;同一薄层板5个相同量的各对照品斑点，测得面积，计算RSD=1.79%;测定5块不同薄层板相同量的对照品斑点，其RSD=2.74%,具有较好的精密度。2.4.4 标准曲线的绘制：精密吸取连翘苷对照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0和5.0μl,分别点于同一薄层板上，按既定条件层离扫描，以点样量为横坐标，测得斑点峰面积值为纵坐标，作图。回归方程:Y=1047.3X-57.5,r=0.9998。结果表明，连翘苷点样量在1～5μg范围内与其峰面积值呈线性关系。
, 百拇医药
2.4.5 样品测定：按上述方法测得各样品供试液中连翘苷含量，结果见表1。表1 青翘和老翘中连翘苷含量测定(n=3) 样 品
连翘苷含量(%)
1
2
3
RSD(%)
青翘
0.078
0.074
0.075
0.076
2.75
, 百拇医药
老翘
0.013
0.012
0.012
0.012
4.68
2.4.6 回收率试验：精密称取青翘药材1g,共取3份，分别加入连翘苷对照品0.3mg,依法测定连翘苷含量，计算回收率，测得结果分别为94.57%,97.31%和96.49%。
3 小结与讨论
3.1 实验结果表明，青翘和老翘中连翘苷含量差异较大，青翘中连翘苷含量为0.076%,而老翘中仅为0.012%。与文献报道青翘中连翘酯苷含量高于老翘的实验结果相同。另有文献报道，就抗菌效价而言青翘优于老翘[3]。而目前市售连翘药材往往青老翘混杂，其中大多为老翘，青翘仅占1/10或更少。鉴于连翘为常用中药，目前以连翘为主要的中成药就有数余种，因此，有必要对连翘进行深入研究，以保证药材质量和临床疗效。
, 百拇医药
3.2 目前有关连翘苷的含量测定方法报道较少。本文采用的薄层展开及显色系统，方法简便、快速、灵敏度高、重现性好，可作为连翘药材及含连翘制剂的质控方法。在连翘苷提取分离中，采用氯仿进行提取，再用水洗去氯仿提取液中水溶性杂质，可有效地去除干扰，薄层效果较好。
参考文献
[1] 刘东雷，李会轻，徐绥绪.连翘属植物化学成分的研究进展.沈阳药科大学学报，1995，12(4)∶301.
[2] 都恒青，王升启，李朝民.连翘叶的化学成分.中草药，1986，17(2)∶7.
[3] 丁冈，刘延泽，等.中药连翘及其同属植物的研究近况.中药材，1994，17(10)∶42.
收稿日期：1998-04-06, http://www.100md.com
单位：张 玲 单卫华 时延增 徐新刚 济南 250014 山东省中医药研究所；李春玲 济南 250014 山东省药品检验所
关键词：连翘；连翘苷；青翘；老翘；薄层扫描
中国现代应用药学990119摘要 目的：测定青翘与老翘中连翘苷含量。方法：。双波长薄层扫描法。结果：青翘中连翘苷含量为0.076%；老翘中仅为0.012%。与报道的青翘中连翘酯苷含量高于老翘的实验结果相同，结论：本文结果与文献报道的就抗菌效价而言青翘优于老翘的结论吻合。目前市售药材青老翘混杂，有必要进行深入研究，确定合理的采收期。
Determination of forsythin content in Qingqiao and Laoqiao
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Zhang Ling(Zhang L),Shan Weihua(Shan WH),Shi Yanzeng(Shi YZ),et al(Shandong Institute of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica,Jinan 250014)
ABSTRACT OBJECTIVE：This paper reported the determination of Forsythin content in Qingqiao and Laoqiao.METHODS:Dualwavelentht TLC-scanning was used.RESULTS:The content of forsythin in Qingqiao was 0.078% and that in Laoqiao was only 0.013%.CONCLUSION:The content of forsythin in Qingqiao was higher than that in Laoqiao.
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KEY WORDS Lianqio,forsythin,Qingqiao,Laoqiao,TLC-densitometry
连翘[Forsythia suspen (Thunb) Vahl]为木樨科连翘属植物连翘的干燥果实。为常用的清热解毒中药。连翘的化学成分为挥发油，连翘苷等木脂素类，齐墩果酸等三萜酸类等[1]。其中连翘苷具有较强的抑菌作用，并能抑制CAMP、磷酸二酯酶的活性[2]。连翘根据其果实成熟程度，商品中有青翘和老翘之分。目前有关青翘和老翘中连翘苷含量的比较研究尚未见报道。为此，较青翘和老翘之间的异同，保证连翘的药用质量及临床疗效，本文采用薄层扫描法，进行了青翘和老翘中连翘苷的含量测定，实验结果表明青翘和老翘中连翘苷含量差异较大，青翘中连翘苷含量为0.078%；而老翘仅为0.013%。与文献报道的青翘中连翘酯苷含量高于老翘的实验结果相同[3]。
1 仪器与试药
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CS-930薄层扫描仪(日本岛津公司)；PBQ-Ⅰ型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量毛细管(美国Drummond厂)。
连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所)；连翘药材(济南药材站，经本所彭广芳研究员鉴定符合药典规定)。甲醇、乙醇、氯仿、冰醋酸等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 药材样品供试液及对照品溶液的制备
药材样品供试液的制备：精称青翘及老翘药材各2g,置100ml圆底瓶中， 精密加入50ml水，精密称重，电热套加热回流提取1.5h,放冷，补足损失的水份，过滤，弃去初滤液，精取续滤液25ml,用氯仿提取4次(20,20,10和10ml),合并提取液，用水洗涤3次，弃去水液，水浴挥去氯仿，残渣以乙醇溶解，并定容至1ml量瓶中，作为各样品供试液。
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对照品溶液的制备：精取连翘苷对照品2mg,加甲醇溶解，转移至2ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2 层析条件
硅胶G薄层板：取硅胶G加入0.2%的CMC-Na，自动铺板器铺成0.5mm(500μm)的薄层板，晾干，于105℃活化1h,置干燥器中备用。
展开剂；氯仿-甲醇-冰醋酸(85∶12∶0.5)。
显色剂：5%香兰素浓硫酸。
2.3 薄层层析
精密吸取上述药材样品供试液及连翘苷对照品溶液各2μl,点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开10cm,晾干，显色，烘干，连翘苷显鲜紫色斑点,Rf值为0.45,与其它成分斑点得到较好的分离。薄层图谱见图1。
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图1 连翘苷对照品及连翘药材的TLC图
1-连翘苷对照品；2-青翘样品供试液；3-老翘样品供试液
2.4 薄层扫描定量
2.4.1 仪器扫描条件：测定波长λS=540nm,参比波长λR=700nm;反射锯齿形扫描，线性参数SX=3,狭缝1.2mm×1.2mm,扫描速度20mm/min。
2.4.2 稳定性试验：精密吸取对照品溶液点于同一硅胶G薄层板上，层离，挥干溶剂，立即扫描，再每隔20min扫描一次，结果表明，连翘苷斑点在1h内稳定。
2.4.3 精密度试验：同一斑点连续扫描5次，测得RSD=0.88%;同一薄层板5个相同量的各对照品斑点，测得面积，计算RSD=1.79%;测定5块不同薄层板相同量的对照品斑点，其RSD=2.74%,具有较好的精密度。2.4.4 标准曲线的绘制：精密吸取连翘苷对照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0和5.0μl,分别点于同一薄层板上，按既定条件层离扫描，以点样量为横坐标，测得斑点峰面积值为纵坐标，作图。回归方程:Y=1047.3X-57.5,r=0.9998。结果表明，连翘苷点样量在1～5μg范围内与其峰面积值呈线性关系。
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2.4.5 样品测定：按上述方法测得各样品供试液中连翘苷含量，结果见表1。表1 青翘和老翘中连翘苷含量测定(n=3) 样 品
连翘苷含量(%)
1
2
3
RSD(%)
青翘
0.078
0.074
0.075
0.076
2.75
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老翘
0.013
0.012
0.012
0.012
4.68
2.4.6 回收率试验：精密称取青翘药材1g,共取3份，分别加入连翘苷对照品0.3mg,依法测定连翘苷含量，计算回收率，测得结果分别为94.57%,97.31%和96.49%。
3 小结与讨论
3.1 实验结果表明，青翘和老翘中连翘苷含量差异较大，青翘中连翘苷含量为0.076%,而老翘中仅为0.012%。与文献报道青翘中连翘酯苷含量高于老翘的实验结果相同。另有文献报道，就抗菌效价而言青翘优于老翘[3]。而目前市售连翘药材往往青老翘混杂，其中大多为老翘，青翘仅占1/10或更少。鉴于连翘为常用中药，目前以连翘为主要的中成药就有数余种，因此，有必要对连翘进行深入研究，以保证药材质量和临床疗效。
, 百拇医药
3.2 目前有关连翘苷的含量测定方法报道较少。本文采用的薄层展开及显色系统，方法简便、快速、灵敏度高、重现性好，可作为连翘药材及含连翘制剂的质控方法。在连翘苷提取分离中，采用氯仿进行提取，再用水洗去氯仿提取液中水溶性杂质，可有效地去除干扰，薄层效果较好。
参考文献
[1] 刘东雷，李会轻，徐绥绪.连翘属植物化学成分的研究进展.沈阳药科大学学报，1995，12(4)∶301.
[2] 都恒青，王升启，李朝民.连翘叶的化学成分.中草药，1986，17(2)∶7.
[3] 丁冈，刘延泽，等.中药连翘及其同属植物的研究近况.中药材，1994，17(10)∶42.
收稿日期：1998-04-06, http://www.100md.com