HPLC 法测定恶吐平制剂各组份含量
作者：郝润喜 闫彩萍 牛勃
单位：郝润喜 闫彩萍 (山西医科大学医学实验中心 太原 030001)；牛勃 (山西医科大学生物化学教研室)
关键词：山莨菪碱；甲氧氯普胺；地塞米松；苯海拉明；恶吐平；色谱法，高压液相
山西医科大学学报990261 摘要 用反相色谱法分析山莨菪碱、甲氧氯普胺、地塞米松及苯海拉明四种组份，在甲醇-水流动相体系中加入少许三乙胺使 C18固定相表面的化学活性改变，结合选择流动相的适宜 pH 值，达到了满意的色谱分离效果。UV检测，其线性范围分别为：10～240 mg/L、10～240 mg/L，10～200 mg/L，以及 15～200 mg/L，最大Rs≤3.94。
中图号 R927.2
Simultaneous determination of injection
, 百拇医药
E Tuping four components by HPLC
Hao Runxi, Yan Caiping, Niu Bo
(Centre of Medical Experiment,Shanxi Medical University, Taiyuan 030001)
Abstract Simultaneous separation and analysis of four components of E Tuping-anisodamine; metoclopramid; dexamethasone and diphenhydramine by HPLC were reported. The reversed-phase C18 column (150mm×4.6mm) was applied and the mobile phase was methanol-water (47:53) containing with 0.12% triethylamine, adjusted to pH 4.5 with phosphoric acid (about 0.25%).The compounds were detected using the UV detector operated at 220 nm which allowed linear ranges of determination 10～240 mg/L,10～240 mg/L，10～200 mg/L and 15～200 mg/L,respectively (the greatest Rs≤3.94).This method is stable,simple and fast.
, 百拇医药
Key words anisodamine; metoclopramide; dexamethasone; diphenhydramine; E Tuping; chromatography,high pressure liquid
恶叶平制剂的主要成分为氢溴酸山莨菪碱 (anisodamine hydrobromide)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、地塞米松磷酸钠(dexamethasone natrium phosphaste)及盐酸苯海拉明(diphenhydramini hydrochloridi)，临床上用于治疗恶性呕吐症及缓解肿瘤患者放疗、化疗期间的胃肠不适反应。准确测定其各成分的含量有利于控制产品质量和药效的稳定性，本文用 HPLC 同时测定其四组份，对分离条件及色谱行为进行优化考察，方法稳定，快速准确。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
, http://www.100md.com
1.1.1 仪器 Beckman 344 HPLC系统，165 紫外可变波长检测器，SP 4270 数据处理机。
1.1.2 试剂 地塞米松磷酸钠对照品，法国 BRAM Co.,甲氧氯普胺、溴酸山莨菪碱和盐酸苯海明对照品，北京制药厂提供，恶吐平注射液，太原市制剂中心提供，磷酸(GR)，甲醇、三乙胺(AR)，北京化工厂，重蒸馏。
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱：Sepheriorb 4.6 mm×150 mm(5 μm) ODS 柱。预柱：2.0 mm×30 mm ODS。柱温：30℃。流动相：甲醇-水-磷酸-三乙胺(470∶530∶2.5∶1.2)，pH≈4.5。流速：1.0 ml/min。UV波长：220 nm。记录纸速：0.1 cm/min。数据处理：外标峰面积法定量计算。
1.2.2 标准溶液制备 精密称取溴酸山莨菪碱①、甲氧氯普胺②；地塞米松磷酸钠③及盐酸苯海拉明④；对照品各 20 mg，分别置于 10 ml 容量瓶中，以甲醇溶解配成各贮备液，临用前取各组分适量，以流动相稀释，使四者均为下列浓度 10 mg/L、60 mg/L、120 mg/L、180 mg/L、240 mg/L系列，摇匀，待用。
, 百拇医药
1.3 实验结果
1.3.1 标准曲线方程及线性关系 在选定的色谱条件下，依次进样标准系列溶液各 20 μl，以峰面(A)对浓度(C)作统计学回归处理，得各方程为：
A1=1 609C1-3 490 r1＝0.999 7；
A2＝8 536C2-39 227 r2=0.999 2；
A3＝3 447C3-1 579 r3＝0.999 6；
A4＝5 677C4-44 507 r4＝0.999 6。
, 百拇医药
其线性范围分别为： 10～240 mg/L，10～240 mg/L，10～200 mg/L 和 15～200 mg/L。
本文实验条件下的色谱图见图1。
图1 对照品(a)及注射液样品(b)的色谱图
1.山莨菪碱； 2.甲氧氯普胺； 3.地塞米松； 4.苯海拉明
1.3.2 回收率与重现性实验 精密称取四种对照品适量，按处方配比加入辅料，以流动相稀释并按含量测定项测定含量计算回收率，结果见表1。取供试品溶液连续进样 5 次，每次 20 μl，记录峰面积并计算 Rs：分别为：①1.29%； ②1.72%； ③1.23%； ④ 2.67%。
表1 恶吐平各组份回收率 (n=6) 组 份
, http://www.100md.com
回收率%
Rs
山莨菪碱
100.2
1.75
甲氧氯普胺
101.3
2.43
地塞米松
97.8
2.77
苯海拉明
96.6
, http://www.100md.com
3.94
1.3.3 含量测定 取本品注射液 5 支，混匀，精密量取适量，置 20 ml 容量瓶中，加流动相稀释定容，取 20 μl进入色谱仪按本法测定，用标准曲线方程计算含量，结果见表2。表2 样品测定结果 批号
标示量准确性(%)
山莨菪碱
甲氧氯普胺
地塞米松
苯海拉明
970526
98.8
98.9
, http://www.100md.com
95.9
95.8
960322
103.1
101.4
95.8
96.9
2 讨论
2.1 流动相选择 以甲醇-水为淋洗液的反相色谱行为中，甲醇浓度直接影响着化合物的保留值、分离度与选择性，在本法中当甲醇体积分数在0.45以下时，分离度不再随甲醇减小而提高，相反却出现峰展宽及拖尾，因此仅改变甲醇浓度达不到理想的分离。流动相中加入少许有机胺类可抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性，使碱性化合物保留性减小且峰形变好[1]。
, http://www.100md.com
2.2 流动相的pH值 甲氧氯普胺、山莨菪碱、苯海拉明均为碱性药物，流动相的pH值对其保留行为有很大作用，是影响选择性的主要因素之，当pH>4时地塞米松与甲氧氯普胺的分离度随 pH 增加而变差，当 pH<6 时苯海拉明峰形随 pH 减小而变宽拖尾，本法中 pH 值在4.5时，K'值较为适宜。
2.3 用 HPLC 分析山莨菪碱[2]、苯海拉明等[3～5]国内早有报道，但作者未见同时分析上述四种化合物的方法。本文对流动相中甲醇的配比、三乙胺含量及pH值进行实验考察，报道了 HPLC 同时测定 4 种组份的方法并对两批产品进行测定，结果符合实际标示量。
参考文献
1 Kiel JS,Morgan SL.Computer-assisted optimazation of a high performance liquid chromatographic separation for chlrormazine and thirteen metabolites. J Chromatogr, 1989, 485 (1): 287
, 百拇医药
2 谢蓝，池华，周同惠.山莨菪碱(654-2)异构体的高效液相色谱法分离.药学学报， 1991， 26 (7)： 527
3 郁月娥.百喘朋片中盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明的高效液相色谱测定法.药物分析杂志， 1990， 10 (6)： 355
4 胡雅斐.HPLC法测定倍他米松和醋酸地塞米松含量.药物分析杂志， 1990， 10 (4)： 244
5 陈萱，钱康年，王红姗.高效液相色谱法测定霜剂中地塞米松磷酸钠含量.湖南医科大学学报， 1995， 20 (5)： 501
[1998-11-03 收稿], http://www.100md.com
单位：郝润喜 闫彩萍 (山西医科大学医学实验中心 太原 030001)；牛勃 (山西医科大学生物化学教研室)
关键词：山莨菪碱；甲氧氯普胺；地塞米松；苯海拉明；恶吐平；色谱法，高压液相
山西医科大学学报990261 摘要 用反相色谱法分析山莨菪碱、甲氧氯普胺、地塞米松及苯海拉明四种组份，在甲醇-水流动相体系中加入少许三乙胺使 C18固定相表面的化学活性改变，结合选择流动相的适宜 pH 值，达到了满意的色谱分离效果。UV检测，其线性范围分别为：10～240 mg/L、10～240 mg/L，10～200 mg/L，以及 15～200 mg/L，最大Rs≤3.94。
中图号 R927.2
Simultaneous determination of injection
, 百拇医药
E Tuping four components by HPLC
Hao Runxi, Yan Caiping, Niu Bo
(Centre of Medical Experiment,Shanxi Medical University, Taiyuan 030001)
Abstract Simultaneous separation and analysis of four components of E Tuping-anisodamine; metoclopramid; dexamethasone and diphenhydramine by HPLC were reported. The reversed-phase C18 column (150mm×4.6mm) was applied and the mobile phase was methanol-water (47:53) containing with 0.12% triethylamine, adjusted to pH 4.5 with phosphoric acid (about 0.25%).The compounds were detected using the UV detector operated at 220 nm which allowed linear ranges of determination 10～240 mg/L,10～240 mg/L，10～200 mg/L and 15～200 mg/L,respectively (the greatest Rs≤3.94).This method is stable,simple and fast.
, 百拇医药
Key words anisodamine; metoclopramide; dexamethasone; diphenhydramine; E Tuping; chromatography,high pressure liquid
恶叶平制剂的主要成分为氢溴酸山莨菪碱 (anisodamine hydrobromide)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、地塞米松磷酸钠(dexamethasone natrium phosphaste)及盐酸苯海拉明(diphenhydramini hydrochloridi)，临床上用于治疗恶性呕吐症及缓解肿瘤患者放疗、化疗期间的胃肠不适反应。准确测定其各成分的含量有利于控制产品质量和药效的稳定性，本文用 HPLC 同时测定其四组份，对分离条件及色谱行为进行优化考察，方法稳定，快速准确。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
, http://www.100md.com
1.1.1 仪器 Beckman 344 HPLC系统，165 紫外可变波长检测器，SP 4270 数据处理机。
1.1.2 试剂 地塞米松磷酸钠对照品，法国 BRAM Co.,甲氧氯普胺、溴酸山莨菪碱和盐酸苯海明对照品，北京制药厂提供，恶吐平注射液，太原市制剂中心提供，磷酸(GR)，甲醇、三乙胺(AR)，北京化工厂，重蒸馏。
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱：Sepheriorb 4.6 mm×150 mm(5 μm) ODS 柱。预柱：2.0 mm×30 mm ODS。柱温：30℃。流动相：甲醇-水-磷酸-三乙胺(470∶530∶2.5∶1.2)，pH≈4.5。流速：1.0 ml/min。UV波长：220 nm。记录纸速：0.1 cm/min。数据处理：外标峰面积法定量计算。
1.2.2 标准溶液制备 精密称取溴酸山莨菪碱①、甲氧氯普胺②；地塞米松磷酸钠③及盐酸苯海拉明④；对照品各 20 mg，分别置于 10 ml 容量瓶中，以甲醇溶解配成各贮备液，临用前取各组分适量，以流动相稀释，使四者均为下列浓度 10 mg/L、60 mg/L、120 mg/L、180 mg/L、240 mg/L系列，摇匀，待用。
, 百拇医药
1.3 实验结果
1.3.1 标准曲线方程及线性关系 在选定的色谱条件下，依次进样标准系列溶液各 20 μl，以峰面(A)对浓度(C)作统计学回归处理，得各方程为：
A1=1 609C1-3 490 r1＝0.999 7；
A2＝8 536C2-39 227 r2=0.999 2；
A3＝3 447C3-1 579 r3＝0.999 6；
A4＝5 677C4-44 507 r4＝0.999 6。
, 百拇医药
其线性范围分别为： 10～240 mg/L，10～240 mg/L，10～200 mg/L 和 15～200 mg/L。
本文实验条件下的色谱图见图1。
图1 对照品(a)及注射液样品(b)的色谱图
1.山莨菪碱； 2.甲氧氯普胺； 3.地塞米松； 4.苯海拉明
1.3.2 回收率与重现性实验 精密称取四种对照品适量，按处方配比加入辅料，以流动相稀释并按含量测定项测定含量计算回收率，结果见表1。取供试品溶液连续进样 5 次，每次 20 μl，记录峰面积并计算 Rs：分别为：①1.29%； ②1.72%； ③1.23%； ④ 2.67%。
表1 恶吐平各组份回收率 (n=6) 组 份
, http://www.100md.com
回收率%
Rs
山莨菪碱
100.2
1.75
甲氧氯普胺
101.3
2.43
地塞米松
97.8
2.77
苯海拉明
96.6
, http://www.100md.com
3.94
1.3.3 含量测定 取本品注射液 5 支，混匀，精密量取适量，置 20 ml 容量瓶中，加流动相稀释定容，取 20 μl进入色谱仪按本法测定，用标准曲线方程计算含量，结果见表2。表2 样品测定结果 批号
标示量准确性(%)
山莨菪碱
甲氧氯普胺
地塞米松
苯海拉明
970526
98.8
98.9
, http://www.100md.com
95.9
95.8
960322
103.1
101.4
95.8
96.9
2 讨论
2.1 流动相选择 以甲醇-水为淋洗液的反相色谱行为中，甲醇浓度直接影响着化合物的保留值、分离度与选择性，在本法中当甲醇体积分数在0.45以下时，分离度不再随甲醇减小而提高，相反却出现峰展宽及拖尾，因此仅改变甲醇浓度达不到理想的分离。流动相中加入少许有机胺类可抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性，使碱性化合物保留性减小且峰形变好[1]。
, http://www.100md.com
2.2 流动相的pH值 甲氧氯普胺、山莨菪碱、苯海拉明均为碱性药物，流动相的pH值对其保留行为有很大作用，是影响选择性的主要因素之，当pH>4时地塞米松与甲氧氯普胺的分离度随 pH 增加而变差，当 pH<6 时苯海拉明峰形随 pH 减小而变宽拖尾，本法中 pH 值在4.5时，K'值较为适宜。
2.3 用 HPLC 分析山莨菪碱[2]、苯海拉明等[3～5]国内早有报道，但作者未见同时分析上述四种化合物的方法。本文对流动相中甲醇的配比、三乙胺含量及pH值进行实验考察，报道了 HPLC 同时测定 4 种组份的方法并对两批产品进行测定，结果符合实际标示量。
参考文献
1 Kiel JS,Morgan SL.Computer-assisted optimazation of a high performance liquid chromatographic separation for chlrormazine and thirteen metabolites. J Chromatogr, 1989, 485 (1): 287
, 百拇医药
2 谢蓝，池华，周同惠.山莨菪碱(654-2)异构体的高效液相色谱法分离.药学学报， 1991， 26 (7)： 527
3 郁月娥.百喘朋片中盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明的高效液相色谱测定法.药物分析杂志， 1990， 10 (6)： 355
4 胡雅斐.HPLC法测定倍他米松和醋酸地塞米松含量.药物分析杂志， 1990， 10 (4)： 244
5 陈萱，钱康年，王红姗.高效液相色谱法测定霜剂中地塞米松磷酸钠含量.湖南医科大学学报， 1995， 20 (5)： 501
[1998-11-03 收稿], http://www.100md.com