当前位置: 首页 > 期刊 > 《河北医科大学学报》 > 1999年第4期
编号:10496376
胃癌增殖细胞核抗原表达的研究
http://www.100md.com 《河北医科大学学报》 1999年第4期
     作者:王顺祥 李 勇 马志学 刘品一 何向辉 范立桥

    单位:河北医科大学第四医院外科(石家庄 050011)

    关键词:胃肿瘤/诊断;核蛋白质类/分析;流式细胞术/方法

    河北医科大学学报990404 摘 要 目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)与胃癌生物学行为的关系。方法 应用流式细胞术,对68例胃癌及癌旁组织细胞中PCNA的表达进行了检测。结果 PCNA在胃癌中的表达明显高于正常胃粘膜及癌旁组织;PCNA指数与胃癌分化程度及肿瘤浸润深度有关(P<0.05)。结论 检测PCNA的表达有助于发现早期癌变及判断胃癌的生物学特性。

    中图号 R735.2

    EXPRESSION OF PROLIFERATING CELL NUCLEAR ANTIGEN IN GASTRIC CANCER
, 百拇医药
    Wang Shunxiang Li Yong Ma Zhixue Liu Pingyi He Xianghui Fan Liqiao

    Depantment of Surgery,the Fourth Hospital of Hebei Medical University

    (Shijiazhuang 050011)

    ABSTRACT Objective To study the relationship between the expression of proliferative cell nuclear antigen(PCNA) and the biological behaviour of gastric cancer.Methods Cellular expression of PCNA in gastric cancer and adjacent tissue was analyzed with flow cytometry(FCM) in 68 cases.Results The expression of PCNA in gastic cancer tissue was significantly higher than that in normal and adjacent tissue.PCNA LI was related to the differentiation and invasiveness of cancer (P<0.05).
, http://www.100md.com
    Conclusion Determination of PCNA is helpful to find the early diagnosis and judgment of the biological characteristics of gastric cancer.

    MeSH stomach neoplasms/diag;nuclear proteins/anal;flow cytometry/methods

    增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是反映肿瘤细胞增殖状态的标记物〔1,2〕。本文应用流式细胞术对PCNA在胃癌中的表达进行了定量分析,探讨其与胃癌生物学行为之间的关系。

    1 材料与方法

    1.1 材料:本院手术切除并经病理证实的胃癌标本68例,15例癌旁组织(距癌灶2~3 cm,并经病理证实为慢性胃炎伴轻、中度不典型增生),正常胃粘膜10例做对照,一式2份,1份做病理学检查,进一步验证所取组织分别为癌、癌旁和正常胃粘膜组织;另1份立即用70%的酒精固定,0~4 ℃保存,用于流式细胞检测。病理学分级和TNM分期按国际抗癌协会标准。
, http://www.100md.com
    1.2 流式细胞分析样品的制备:①将70%酒精固定的组织标本,以网搓法制备成单细胞悬液;②把单细胞悬液200目铜网过滤,500 r/min,离心3 min,去碎片及上清液;③采用间接免疫标记法,将1×106/ml细胞悬液用PBS液离心洗涤2次,如入1∶100稀释的鼠抗人PCNA单克隆抗体(Santa Cruz公司),37 ℃温育30 min,以PBS液离心洗涤2次,(1 000 r/min,5 min),弃上清,加入1∶20稀释的羊抗鼠FITC-IgG 100 μl(美国,Jackson Immllno Reserch公司),37 ℃温育30 min,PBS液离心洗涤2次,除去未结合的多余荧光抗体,加入1 ml PBS液混匀,500目铜网过滤,然后上机分析。经免疫荧光染色的癌细胞涂片,在荧光显微镜下观察,可见PCNA蛋白染色后黄绿色荧光主要分布在胞核。

    1.3 流式细胞仪检测方法:采用美国BD公司生产的FACS 420型流式细胞仪,光源为2 W离子激光器,工作工率为300 mW,测量数据、图形,同时输入计算机,应用相应的程序软件进行资料处理。测量前以鸡红细胞标准样品调整仪器的CV值在5.0%以内。
, 百拇医药
    1.4 结果判定:PCNA采用PCNA指数(PCNA Labeling Index,PCNALI)作为判定标准,即1 000个细胞中PCNA表达阳性的细胞数。取各组PCNALI的均数,以t检验进行统计学处理。

    2 结果

    胃癌,癌旁组织及正常胃粘膜的PCNALI分别为264.53±78.87,139.13±61.02,118.50±20.86;胃癌细胞的PCNALI显著高于癌旁组织及正常胃粘膜(P<0.05),且PCNALI与胃癌的分化程度及浸润深度密切相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤部位、Borrmann分型及淋巴结转移无关(P>0.05),见表1。

    表1 PCNA与胃癌临床病理特点的关系

    Table 1 Proliferating cell nuclear antigen and pathological
, http://www.100md.com
    features of gastric cancer

    (±s) Clinico-pathological factor

    n

    PCNA

    Sex

    male

    50

    267.32±65.45

    female

    18

    243.73±102.45

, 百拇医药     Age(a)

    ≥60

    39

    261.95±71.19

    <60

    29

    259.90±85.69

    Borrmann classfication

    local

    24

    249.0±62.75

    invasive
, 百拇医药
    41

    269.49±86.25

    Differentiation

    advanced to median

    28

    290.54±61.75*

    lower

    40

    244.95±83.38

    Invasion

    T1+T2
, 百拇医药
    17

    231.0±68.82

    T3+T4

    51

    274.0±78.22

    Lymphocytic metastasis

    N-

    21

    268.1±62.48

    N+

    47

, http://www.100md.com     260.7±84.69

    TNM grade

    Ⅰ~Ⅱ

    20

    259.5±66.48

    Ⅱ~Ⅲ

    48

    265.31±83.97

    PCNA:Proliferating cell nuclear antigen

    *P<0.05 vs lower by t test △P<0.05 vs T1+T2 by t test3 讨论
, http://www.100md.com
    PCNA基因定位于20号染色体上,编码一种相对分子质量为36 ku的核蛋白,是DNA聚合酶的1种辅助蛋白,也是一种细胞周期蛋白〔3〕。已证实PCNA的表达与细胞周期有关,在G1期PCNA开始增多,S期达到高峰,G2/M期明显下降,应用PCNALI对评价肿瘤细胞的增殖状态及正确判断其生物学行为和预后有很高的价值〔4~6〕。本研究结果发现胃癌细胞PCNALI显著高于癌旁组织和正常胃粘膜组织,证实癌细胞的增殖活性有明显地增强,提示临床可通过胃镜活检,动态观察细胞增殖程度,对不典型增生伴有PCNA高表达者应注意有否早期癌变。有关PCNA与胃癌病理特点的报道不尽一致,Muecle〔7〕对189例经病理证实的胃癌标本进行免疫组织化学研究,结果表明PCNALI与胃癌的分化程度无关,而与胃癌的肝、腹膜及淋巴结转移有关,有转移者PCNALI显著增高,且随浸润深度的增加PCNALI明显升高,他还以PCNALI高于50%或低于50%为界限,分析发现低PCNALI组的5年生存率为90.5%,而高PCNALI组的5年生存率低于40%,且高PCNALI组易复发。前田等〔5〕也报告PCNALI与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、进展程度和预后有关。田中等〔8〕报告随肿瘤浸润深度及分期的增加PCNALI显著增高(P<0.05),而且在高中分化胃癌PCNALI明显升高。山本等〔9〕也发现PCNALI与肿瘤浸润深度和淋巴结转移有关。本实验也显示PCNALI与肿瘤的分化程度及浸润深度有关,以高中分化癌和T3、T4胃癌PCNALI为高(P<0.05)。但也有的学者认为PCNA仅反映肿瘤细胞的增殖程度,而与肿瘤的分化、转移等无关。总之,各家研究结果尚存较大差异,有待统一标准,扩大病例数深入研究。本研究结果高中分化癌PCNALI增高可能与分化较好的癌细胞中含有高DNA倍体有关。另外,作为已知的增殖因子EGF,EGFR、CerbB2在高中分化胃癌呈高表达,使肿瘤细胞的增殖活性增强〔8〕。作者认为肿瘤细胞的增殖和分化是多种细胞因子作用的结果,PCNA表达的变化只反映了细胞增殖的1个环节,并非细胞增殖活性的全部;也说明组织分级在反映细胞的增殖活性方面虽有一定意义,但同时也有其局限性。
, 百拇医药
    总之,通过对68例胃癌组织中PCNA表达的研究,作者认为PCNA可以作为反映肿瘤细胞增殖活性及其生物学行为的指标。

    参考文献

    1.Hall PA,Levison DA.Review:Assessment of cell proliferation in histological material.J Clin Pathol,1990,43:184

    2.Jain S,Filipe MT,Hall PA,et al.Application of proliferation(PCNA) immunostaining in gastric carcinoma,J Pathol,1990,161:351

    3.Bravo R,Frank R,Blundell P,et al.Cyclin/PCNA is the auxiliary protein of DNA polymerasee δ.Nature,1987,326:515
, 百拇医药
    4.中野浩,生田目公夫,熊田馨,他.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) 发现率によゐ胃癌增殖活性の评价.日外会谂,1993,94:580

    5.前田清,郑容锡,小野田上佳,他.早期胃癌における Proliferating cell nuclear antigen 标识率の术前生检标本ごの检讨.日消外会谂,1993,26:2740

    6.Yonemura Y,Kimura H,Fushida S,et al.Analysis of proliferative activity using anti-proliferating cell nuclear antigen antibody in gastric cancer tissue specimens obtained by endoscopic biopsy.Cancer,1993,71:2448
, 百拇医药
    7.Maeda K,Chung Y,Onoda N,et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis.Cancer,1994,73:528

    8.田中贤一,中村毅,中江史郎,他.胃癌における Proliferating cell nuclear antigen および C-met 遗传子产物发现の意义.日消外会谂,1996,29:1603

    9.山本裕司,须田嵩,天野富薰,他.sm 胃癌におけるProliferating cell nuclear antigen (PCNA) 标识率とリンパ结转移の检讨.癌の临床,1996,42:728

    (1998-03-24 收稿), 百拇医药