脐血清体外对急性白血病病儿化疗后造血细胞增殖的影响
作者：王同显 佟琳如 李延年 尹振尧
单位：王同显:青岛市红十字 会中心血站(青岛 266071)佟琳如 李延年:青岛医学院附属医院儿内科 尹振尧:青岛医学院 第二附属医院儿科
关键词：胎血；造血干细胞；白血病；药物疗法
青岛医学院990413 【摘 要】 ①目的 探讨脐血清体外对急性白血病 化疗后骨髓抑制期造血细胞增殖的影响。②方法 采用体外粒单细 胞集落形成单位(CFU-GM)培养法，观察正常成人血清和脐血清，对正常造血细胞和急性白 血病化疗后抑制期骨髓造血细胞增殖的影响。③结果 脐血清组的 正常骨髓CFU-GM产率明显高于成人血清组(t=6.993,P<0.01)，脐血清组的白血病 化疗后骨髓CFU-GM产率亦高于成人血清组(t=3.060,P<0.05)。④结论 脐血清体外能促进正常骨髓和白血病化疗后抑制期骨髓造血细胞的增殖
, http://www.100md.com
中国图书馆分类法分类号 R733.7
EFFECT OF CORD BLOOD SERUM ON EXPA NSION OF HEMATOPOIETIC
PROGENITOR CELLS IN CHILDREN WITH ACUTE
LEUKEMIA AFTER CH EMOTHERAPY
Wang Tongxian, Tong Linru, Li Yannian, et al
Qingdao Red Cross Central Station, Qingdao 266071
【ABSTRACT】 Objective To explore the effect of cord blood( CB) serum on hematopoietic progenitor cells of patients with acute leukemia(AL) in period of post-chemotherapeutic bone marrow suppression(PCBS). Methods In vitro CFU-GM culturing was used to study the effect of adult serum and CB serum on hemapoietic progenitor cells of normal bone mar row(BM) and children with AL in period of PCBS. Results CFU-GM yield of normal BM and BM from children with AL i n period of PCBS in CB serum group was significantly higher than that of adult s erum group(t=3.060,P<0.05;t=6.993,P<0.01). Conclusion CB serum could stimulate expansion of progenitor cell s derived from normal BM and BM of patient with AL in period of PCBS.
, 百拇医药
【KEY WORDS】 fetal blood; hematopoietic stem cells; leukemia; drug therapy
近年来，脐血清或(和)血浆对造血干或(和)祖细胞增殖的促进作用已引起人们极大兴趣 ，有关研究日益增多〔1～3〕，但这些研究仅限于正常状态造血细胞，对病理状态下 造血细胞增殖的影响尚未见报道。本文采用体外细胞培养法,观察了脐血清对急性白血病化 疗后骨髓抑制期体外粒单细胞集落形成单位(CFU-GM)生长的影响，现将结果报告如下 。
1 材料与方法
1.1 试剂及来源
甲基纤维素为Sigma公司产品，马血清和RPMI-1640营养液为Gibco公司产品。
1.2 血清来源
, http://www.100md.com
脐血来自青岛医学院附属医院产科34例正常足月新生儿脐静脉，分离血清混合；混合成人 血清来自20例健康献血员。
1.3 标本选择
10例急性白血病病儿骨髓来自青岛医学院附属医院儿科住院病儿，其中ALL 7例，ANLL 3例 ，在诱导缓解或巩固治疗阶段的骨髓抑制期采取骨髓，肝素(1万单位/人)抗凝。骨髓抑制标 准为外周血WBC<1.5×109/L，ANC<0.5×109/L，骨髓涂片示增生极度低下或明显低 下。10例正常骨髓来自心胸外科切除的肋骨。
1.4 骨髓单个核细胞(MNC)悬液的制备和培养
常规方法分离正常骨髓和白血病骨髓MNC，最终调整为8×108/L的MNC悬液。培养基含20 g/L的甲基纤维素0.75mL，马血清0.25mL,RPMI-1640营养液(pH 7.0)0.5mL.正常 骨髓 CFU-GM培养：取两个培养基，分别加脐血清和成人血清0.5mL，再各加正常骨髓MNC悬 液0.5mL；白血病骨髓CFU-GM培养则加白血病骨髓MNC悬液0.5mL.上述培养体系分 装2个直径3.5mm培养皿(每皿含2×105 MNC，血清体积分数为0.20)，在37℃，体积分 数为0.05的CO2，饱和湿度条件下培养14d，集落确定参照文献〔4〕，结果取其平均值。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 脐血清对正常骨髓CFU-GM产率的影响10例正常骨髓MNC加脐血清和成人血清培养后，每皿CFU-GM产率分别为304.9±105.2和181. 6±64.0，两组比较差异有极显著意义(t=6.993,P<0.01)。
2.2 脐血清对白血病化疗后抑制期骨髓CFU-GM产率的影响
10例急性白血病病儿化疗后处于抑制期骨髓MNC，加脐血清和成人血清培养后每皿CFU-GM 产率分别为10.7±5.1和7.2±3.9，两组比较差异有显著意义(t=3.060,P<0.05)。
3 讨 论
脐血对正常造血细胞增殖的促进作用国内外已有报道〔1,5〕，本文正常骨髓MNC培养 结果也证实了这一点，其作用机制可能与脐血中含有多种或较高水平造血生长因子有关。研 究发现，脐血中IL-3，IL-6及GM-CSF等多种造血生长因子水平明显高于成人血〔6〕 ，它们可单独或协同促进造血干或(和)祖细胞增殖分化。但有人认为脐血中造血生长因 子含量极微，不足以刺激造血祖细胞增殖〔7〕。也有人观察到脐血血浆体外对造血 祖细胞集落形成的刺激作用有一定的选择性〔3〕，这种选择性表现在造血细胞来源 和细胞ABO血型两个方面。对脐血造血祖细胞，无论细胞与脐血血浆血型是否相同均 有刺激作用；而对骨髓造血祖细胞，两者血型相同时无刺激作用，只有在两者血型不同时才 有刺激作用，机制尚不清楚。本文所采用的是不同血型的混合血清，未观察到这种选择性。
, 百拇医药
本文结果表明，脐血清不仅能明显促进骨髓CFU-GM生长，对急性白血病化疗后骨髓抑制 期CFU-GM生长也有促进作用。白血病细胞在正常造血祖细胞培养条件下一般不能形成集落, 有人通过免疫表型分析证明，1/3病人CFU-AML相当于正常骨髓多向祖细胞(CFU-GEMM)，2/ 3则与正常CFU-GM有相同表型。白血病病儿在接受强烈有效化疗后，大量白血 病细胞被杀死，白血病细胞克隆受抑制，正常细胞克隆得以增生。本文结果表明，此时病儿 骨髓加入脐血血清可促进其造血祖细胞增殖分化。由此推测，白血病病儿接受强烈化疗和干 细胞移植后输注脐血，可促进造血功能恢复，缩短骨髓抑制期，减少感染并发症的发生。
参考文献
1 Bertonlini F, Lazzari L, Lauri E, et al. Cord blood plasma-mediated ex vivo expansion of hematopoietic progenitor cells. Bone Marrow Transplant , 1994,15:347
, http://www.100md.com
2 Kuruta H. Ex vivo expansion of hematopoietic progenitor cells in h uman cord blood: an effect enriched by cord blood plasma. Hematol Pathol, 1995,9:73
3 伍 钢,应大明,林 辛.脐血血浆体外对造血祖细胞增殖的影响.中华血液 学杂志, 1997,18:237
4 Nagler A, Riklis I, Kletter Y, et al. Effect of 1, 25-dihydroxy vita min D3 and retinotic acid on human pluripotent(CFU-Mix),erythroid(CFU-E) a nd myeloid(CFU-C) progenitor cell growth and differentiation patterns. Exp H ematol, 1986,14:60
, http://www.100md.com
5 张林生,王逸兰,陆道培.脐血血浆支持造血祖细胞体外集落培养的研究.中 国实验血液学杂志, 1996,4:87
6 王同显,佟琳如.脐血血清GM-CSF,IL-3和IL-6水平检测及意义.现代康 复, 1999,3:160
7 Carow CE, Hangoc G, Broxmeyer HE, et al. Human multipotential proge nitor cells(CFU-GEMM) have extensive replating capacity for secondary CFU-GE MM: an effect enhanced by cord blood plasma. Blood, 1993,81:942
(1999-04-25收稿 1999-07-28修回), http://www.100md.com
单位：王同显:青岛市红十字 会中心血站(青岛 266071)佟琳如 李延年:青岛医学院附属医院儿内科 尹振尧:青岛医学院 第二附属医院儿科
关键词：胎血；造血干细胞；白血病；药物疗法
青岛医学院990413 【摘 要】 ①目的 探讨脐血清体外对急性白血病 化疗后骨髓抑制期造血细胞增殖的影响。②方法 采用体外粒单细 胞集落形成单位(CFU-GM)培养法，观察正常成人血清和脐血清，对正常造血细胞和急性白 血病化疗后抑制期骨髓造血细胞增殖的影响。③结果 脐血清组的 正常骨髓CFU-GM产率明显高于成人血清组(t=6.993,P<0.01)，脐血清组的白血病 化疗后骨髓CFU-GM产率亦高于成人血清组(t=3.060,P<0.05)。④结论 脐血清体外能促进正常骨髓和白血病化疗后抑制期骨髓造血细胞的增殖
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中国图书馆分类法分类号 R733.7
EFFECT OF CORD BLOOD SERUM ON EXPA NSION OF HEMATOPOIETIC
PROGENITOR CELLS IN CHILDREN WITH ACUTE
LEUKEMIA AFTER CH EMOTHERAPY
Wang Tongxian, Tong Linru, Li Yannian, et al
Qingdao Red Cross Central Station, Qingdao 266071
【ABSTRACT】 Objective To explore the effect of cord blood( CB) serum on hematopoietic progenitor cells of patients with acute leukemia(AL) in period of post-chemotherapeutic bone marrow suppression(PCBS). Methods In vitro CFU-GM culturing was used to study the effect of adult serum and CB serum on hemapoietic progenitor cells of normal bone mar row(BM) and children with AL in period of PCBS. Results CFU-GM yield of normal BM and BM from children with AL i n period of PCBS in CB serum group was significantly higher than that of adult s erum group(t=3.060,P<0.05;t=6.993,P<0.01). Conclusion CB serum could stimulate expansion of progenitor cell s derived from normal BM and BM of patient with AL in period of PCBS.
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【KEY WORDS】 fetal blood; hematopoietic stem cells; leukemia; drug therapy
近年来，脐血清或(和)血浆对造血干或(和)祖细胞增殖的促进作用已引起人们极大兴趣 ，有关研究日益增多〔1～3〕，但这些研究仅限于正常状态造血细胞，对病理状态下 造血细胞增殖的影响尚未见报道。本文采用体外细胞培养法,观察了脐血清对急性白血病化 疗后骨髓抑制期体外粒单细胞集落形成单位(CFU-GM)生长的影响，现将结果报告如下 。
1 材料与方法
1.1 试剂及来源
甲基纤维素为Sigma公司产品，马血清和RPMI-1640营养液为Gibco公司产品。
1.2 血清来源
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脐血来自青岛医学院附属医院产科34例正常足月新生儿脐静脉，分离血清混合；混合成人 血清来自20例健康献血员。
1.3 标本选择
10例急性白血病病儿骨髓来自青岛医学院附属医院儿科住院病儿，其中ALL 7例，ANLL 3例 ，在诱导缓解或巩固治疗阶段的骨髓抑制期采取骨髓，肝素(1万单位/人)抗凝。骨髓抑制标 准为外周血WBC<1.5×109/L，ANC<0.5×109/L，骨髓涂片示增生极度低下或明显低 下。10例正常骨髓来自心胸外科切除的肋骨。
1.4 骨髓单个核细胞(MNC)悬液的制备和培养
常规方法分离正常骨髓和白血病骨髓MNC，最终调整为8×108/L的MNC悬液。培养基含20 g/L的甲基纤维素0.75mL，马血清0.25mL,RPMI-1640营养液(pH 7.0)0.5mL.正常 骨髓 CFU-GM培养：取两个培养基，分别加脐血清和成人血清0.5mL，再各加正常骨髓MNC悬 液0.5mL；白血病骨髓CFU-GM培养则加白血病骨髓MNC悬液0.5mL.上述培养体系分 装2个直径3.5mm培养皿(每皿含2×105 MNC，血清体积分数为0.20)，在37℃，体积分 数为0.05的CO2，饱和湿度条件下培养14d，集落确定参照文献〔4〕，结果取其平均值。
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2 结 果
2.1 脐血清对正常骨髓CFU-GM产率的影响10例正常骨髓MNC加脐血清和成人血清培养后，每皿CFU-GM产率分别为304.9±105.2和181. 6±64.0，两组比较差异有极显著意义(t=6.993,P<0.01)。
2.2 脐血清对白血病化疗后抑制期骨髓CFU-GM产率的影响
10例急性白血病病儿化疗后处于抑制期骨髓MNC，加脐血清和成人血清培养后每皿CFU-GM 产率分别为10.7±5.1和7.2±3.9，两组比较差异有显著意义(t=3.060,P<0.05)。
3 讨 论
脐血对正常造血细胞增殖的促进作用国内外已有报道〔1,5〕，本文正常骨髓MNC培养 结果也证实了这一点，其作用机制可能与脐血中含有多种或较高水平造血生长因子有关。研 究发现，脐血中IL-3，IL-6及GM-CSF等多种造血生长因子水平明显高于成人血〔6〕 ，它们可单独或协同促进造血干或(和)祖细胞增殖分化。但有人认为脐血中造血生长因 子含量极微，不足以刺激造血祖细胞增殖〔7〕。也有人观察到脐血血浆体外对造血 祖细胞集落形成的刺激作用有一定的选择性〔3〕，这种选择性表现在造血细胞来源 和细胞ABO血型两个方面。对脐血造血祖细胞，无论细胞与脐血血浆血型是否相同均 有刺激作用；而对骨髓造血祖细胞，两者血型相同时无刺激作用，只有在两者血型不同时才 有刺激作用，机制尚不清楚。本文所采用的是不同血型的混合血清，未观察到这种选择性。
, 百拇医药
本文结果表明，脐血清不仅能明显促进骨髓CFU-GM生长，对急性白血病化疗后骨髓抑制 期CFU-GM生长也有促进作用。白血病细胞在正常造血祖细胞培养条件下一般不能形成集落, 有人通过免疫表型分析证明，1/3病人CFU-AML相当于正常骨髓多向祖细胞(CFU-GEMM)，2/ 3则与正常CFU-GM有相同表型。白血病病儿在接受强烈有效化疗后，大量白血 病细胞被杀死，白血病细胞克隆受抑制，正常细胞克隆得以增生。本文结果表明，此时病儿 骨髓加入脐血血清可促进其造血祖细胞增殖分化。由此推测，白血病病儿接受强烈化疗和干 细胞移植后输注脐血，可促进造血功能恢复，缩短骨髓抑制期，减少感染并发症的发生。
参考文献
1 Bertonlini F, Lazzari L, Lauri E, et al. Cord blood plasma-mediated ex vivo expansion of hematopoietic progenitor cells. Bone Marrow Transplant , 1994,15:347
, http://www.100md.com
2 Kuruta H. Ex vivo expansion of hematopoietic progenitor cells in h uman cord blood: an effect enriched by cord blood plasma. Hematol Pathol, 1995,9:73
3 伍 钢,应大明,林 辛.脐血血浆体外对造血祖细胞增殖的影响.中华血液 学杂志, 1997,18:237
4 Nagler A, Riklis I, Kletter Y, et al. Effect of 1, 25-dihydroxy vita min D3 and retinotic acid on human pluripotent(CFU-Mix),erythroid(CFU-E) a nd myeloid(CFU-C) progenitor cell growth and differentiation patterns. Exp H ematol, 1986,14:60
, http://www.100md.com
5 张林生,王逸兰,陆道培.脐血血浆支持造血祖细胞体外集落培养的研究.中 国实验血液学杂志, 1996,4:87
6 王同显,佟琳如.脐血血清GM-CSF,IL-3和IL-6水平检测及意义.现代康 复, 1999,3:160
7 Carow CE, Hangoc G, Broxmeyer HE, et al. Human multipotential proge nitor cells(CFU-GEMM) have extensive replating capacity for secondary CFU-GE MM: an effect enhanced by cord blood plasma. Blood, 1993,81:942
(1999-04-25收稿 1999-07-28修回), http://www.100md.com