海南与广西两地微小按蚊杂交试验
作者：石焕焕 田春林 黄若密 何登贤
单位：广西医科大学寄生虫学教研室 南宁 530021
关键词：微小按蚊；杂交；多线染色体
广西医科大学学报990402
摘要 目的：观察海南微小按蚊与广西微小按蚊之间是否存在生殖隔离。方法：在海南与广西两地分别采集微小按蚊，实验室中建立单雌繁殖线，用人工交配方法进行杂交试验，观察后代雌蚊的可育性；按Coluzzi方法制备杂种F1代雌蚊卵巢营养细胞多线染色体标本，观察各区带的联会情况。结果：各交配组的后代均显示可育；杂种F1代雌蚊的卵巢营养细胞多线染色体各区正常联会。结论：海南微小按蚊与广西微小按蚊之间不存在生殖隔离，是同种。
中国图书资料分类法分类号 R38
, 百拇医药
HYBRIDIZATION EXPERIMENTS USING ANOPHELES MINIMUS FROM HAINAN AND GUANGXI
Shi Huanhuan,Tian Chunlin,Huang Ruomi,et al
(Department of Parasitology,Guangxi Medical University,Nanning 530021)
Abstract Objective:To investigate whether there is any reproductive isolation between the Anopheles minimus from Hainan and Guangxi.Methods:The isofemale lines of Anopheles minimus collected from Hainan and Guangxi were set up in the laboratory.Hybridization experiments were conducted by forced mating (mosquitoes) in order to observe the reproduction of the desendents.The Coluzzi's method was applied to observe the ovarian nurse cell polytene chromosomes from F1 hybrid females.Result:All hybrid desendents were fertile.The ovarian nurse cell polytene chromosomes of F1 hybrid females showed synapsis in all the zones of the chromosomes.Conclusion:There isn't any reproductive isolation between the Anopheles minimus from Hainan and Guangxi.They are of the same species.
, 百拇医药
Key words anopheles minimus;hybridization;polytene chromosome
微小按蚊广泛分布于我国南方山区，是重要的传疟媒介之一。俞渊等[1]曾把海南微小按蚊分为A、B两型。Sucharit 研究泰国微小按蚊时发现存在A、C两个姐妹种，同时根据形态特征把我国海南省的B型微小按蚊认定为B种。由于地理隔离的缘故，我国微小按蚊是否出现种间分化?为此，我们选择不同地域分布的微小按蚊进行分类学研究。现就海南与广西两地微小按蚊杂交试验结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 蚊虫来源：海南微小按蚊(简称A.m.H),1994年8月采集于海南省儋州市八一农场。广西微小按蚊(简称A.m.G),1992年采集于广西凌云县伶站乡。分别在采集地的牛房中捕获饱血雌蚊,经形态鉴定后单雌产卵,常规驯养,建立单雌繁殖线。
, 百拇医药
1.2 杂交试验：为了避免自交的发生，将羽化12 h内的成蚊分雌雄饲养。羽化第3～5天即饲以豚鼠血,采用人工强迫交配,交配后的雌蚊待卵巢发育成熟后置直径2 cm的玻璃指管内产卵。观察产卵率、平均产卵量和孵化率；解剖已交配过的雌蚊受精囊，计算受精率；子代幼虫孵化后按常规饲养，观察化蛹率、羽化率和成蚊性别比例。
1.3 卵巢营养细胞多线染色体观察：取杂种F1代雌蚊(羽化3～5 d)，饱血后28～32 h，待卵巢发育至克氏Ⅲ期时，分离卵巢营养细胞，按Coluzzi方法制作多线染色体标本。观察染色体各区带的联会情况。
2 结 果
2.1 杂种后代的能育性：A.m.H与A.m.G的杂交结果见表1。在亲本自交组中，A.m.G的受精率、产卵率和幼虫孵化率等比A.m.H低；两地微小按蚊的父本与母本之间的杂交F1代中，各观察指标均无明显差异；杂种F1代与亲本回交组的观察，可见(G×H)F1×G与G×(H×G)F1组的受精率、产卵率明显低于其它回交组。此外，大多数回交组的各项观察指标均无明显差异，各回交组均表现出可育。回交组的子代的各自交组观察，也显示能育。
, 百拇医药
2.2 卵巢营养细胞多线染色体：两地微小按蚊杂种F1代雌蚊的卵巢营养细胞多线染色体各区带未见显著的不联会区，见图1、2。
表1 海南与广西微小按蚊杂交结果 交配组合
♀×♂
交配数
(No)
受精率
(%)
产卵率
(%)
雌蚊平均
产卵数
, 百拇医药
(No)
孵化率
(%)
幼虫数
(No)
幼虫化
蛹 率
(%)
蛹数
(No)
蛹羽
化率
(%)
, 百拇医药
成蚊性
别比例
♀∶♂
H×H
32
62.50
56.25
44.39
62.57
470
87.02
409
94.13
, 百拇医药
1∶0.98
G×G
39
41.03
30.77
72.67
49.08
428
72.90
312
93.59
1∶0.93
H×G
, 百拇医药
35
60.00
51.43
103.94
47.89
850
88.94
756
87.29
1∶0.87
G×H
40
62.50
, 百拇医药
47.50
116.68
51.38
1008
92.96
937
96.48
1∶1.01
(H×G)F1×H
37
56.76
51.35
, http://www.100md.com 94.63
38.71
504
91.47
461
81.13
1∶0.77
H×(H×G)F1
38
57.89
52.63
81.00
53.18
, 百拇医药
610
91.64
559
96.42
1∶0.93
(H×G)F1×G
35
57.14
48.57
58.06
29.95
346
85.84
, 百拇医药
297
94.61
1∶0.90
G×(H×G)F1
34
26.47
23.53
124.00
50.71
503
95.03
478
, 百拇医药 93.83
1∶0.91
(G×H)F1×H
31
64.52
64.52
109.05
44.02
524
79.77
418
97.61
1∶1.00
, http://www.100md.com
H×(G×H)F1
35
71.43
65.71
82.09
52.49
603
90.38
545
96.15
1∶1.07
(G×H)F1×G
, 百拇医药
34
29.41
20.59
115.57
22.99
186
97.85
182
92.86
1∶0.75
G×(G×H)F1
36
44.44
, 百拇医药
41.67
90.07
37.01
500
83.60
418
94.26
1∶0.82
(H×G)F1×(H×G)F1
42
30.95
14.29
, http://www.100md.com
85.33
64.26
329
95.14
313
93.29
1∶1.13
(H×G)F1×(G×H)F1
33
42.42
42.42
95.71
, 百拇医药
65.30
560
87.68
491
95.72
1∶1.00
(G×H)F1×(G×H)F1
48
43.75
33.33
116.56
71.31
, 百拇医药
473
79.28
375
98.40
1∶0.94
(G×H)F1×(H×G)F1
48
25.00
20.83
112.90
60.41
645
, 百拇医药
90.08
581
94.49
1∶0.91
注：H表示A.m.H;G表示A.m.G
图1 (G×H)F1卵巢营养细胞多线染色体
图2(H×G)F1卵巢营养细胞多线染色体
3 讨 论
由于地理隔离和(或)遗传因素的内在影响，不同地理分布的微小按蚊可能出现形态、生理及生活习性等方面的变异。这些变异的程度是否达到种间的差异，必需有一明确的指标说明。而通过杂交试验观察其生殖隔离情况，正是判断种间遗传分化的最为可靠的指标之一。1992年以来，我们通过同工酶谱比较和杂交试验等方法，探明了分布在广西北部、西部与南部的微小按蚊存在差异，但未出现生殖隔离，是同种[3～5]。俞渊等[1]根据形态与吸血习性的差异等把海南微小按蚊分为A、B两型，说明海南的微小按蚊存在变异。Sucharit[2]也是根据形态的比较(未见杂交试验或其它进一步研究材料)，认为海南微小按蚊的B型与泰国的两种微小按蚊不同，定为B种。广西与海南隔海相邻，为了阐明两地微小按蚊的遗传关系，我们对海南与广西微小按蚊进行了形态、同工酶谱比较和杂交试验。形态上，除了第4翅脉第1支中间淡色斑的出现率：海南微小按蚊占10%，广西微小按蚊占3.3%外，两地微小按蚊难以区别。从杂交试验结果看，虽然某些回交组的少数观察指标明显下降，但在所有的交配组中尚未见有不育的现象。卵巢营养细胞多线染色体的观察也未见有意义的恒定不联会区。可见，海南与广西两地微小按蚊之间不存在生殖隔离，是同种。
, 百拇医药
(本课题得到海南省儋州市防疫站寄生虫病防治科全体同志和海南省热带病防治研究所李明馨、司有忠同志的支持，特表谢意)
参考文献
1 俞 渊，李明馨.海南岛微小按蚊Anopheles(Cellia)minimus,1901类型的研究.寄生虫学与寄生虫病杂志,1984,2(2):95
2 Sucharit,Komalamisra,Leemingsawat,et al.Population genetic studies of the Anopheles minimus complex in Thailand.Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth,1988,19(4):717
3 石焕焕,何登贤.广西三地微小按蚊乳酸脱氢酶和酯酶同工酶比较研究.广西医科大学学报,1994,11(3):258
4 石焕焕,袁志刚,何登贤,等.桂南与桂西两地微小按蚊杂交试验.广西医科大学学报,1994,11(4):365
5 石焕焕,黄若密,何登贤,等.桂南与桂北微小按蚊杂交试验.广西医科大学学报，1996,13(2):1
收稿日期：1999-02-05, 百拇医药
单位：广西医科大学寄生虫学教研室 南宁 530021
关键词：微小按蚊；杂交；多线染色体
广西医科大学学报990402
摘要 目的：观察海南微小按蚊与广西微小按蚊之间是否存在生殖隔离。方法：在海南与广西两地分别采集微小按蚊，实验室中建立单雌繁殖线，用人工交配方法进行杂交试验，观察后代雌蚊的可育性；按Coluzzi方法制备杂种F1代雌蚊卵巢营养细胞多线染色体标本，观察各区带的联会情况。结果：各交配组的后代均显示可育；杂种F1代雌蚊的卵巢营养细胞多线染色体各区正常联会。结论：海南微小按蚊与广西微小按蚊之间不存在生殖隔离，是同种。
中国图书资料分类法分类号 R38
, 百拇医药
HYBRIDIZATION EXPERIMENTS USING ANOPHELES MINIMUS FROM HAINAN AND GUANGXI
Shi Huanhuan,Tian Chunlin,Huang Ruomi,et al
(Department of Parasitology,Guangxi Medical University,Nanning 530021)
Abstract Objective:To investigate whether there is any reproductive isolation between the Anopheles minimus from Hainan and Guangxi.Methods:The isofemale lines of Anopheles minimus collected from Hainan and Guangxi were set up in the laboratory.Hybridization experiments were conducted by forced mating (mosquitoes) in order to observe the reproduction of the desendents.The Coluzzi's method was applied to observe the ovarian nurse cell polytene chromosomes from F1 hybrid females.Result:All hybrid desendents were fertile.The ovarian nurse cell polytene chromosomes of F1 hybrid females showed synapsis in all the zones of the chromosomes.Conclusion:There isn't any reproductive isolation between the Anopheles minimus from Hainan and Guangxi.They are of the same species.
, 百拇医药
Key words anopheles minimus;hybridization;polytene chromosome
微小按蚊广泛分布于我国南方山区，是重要的传疟媒介之一。俞渊等[1]曾把海南微小按蚊分为A、B两型。Sucharit 研究泰国微小按蚊时发现存在A、C两个姐妹种，同时根据形态特征把我国海南省的B型微小按蚊认定为B种。由于地理隔离的缘故，我国微小按蚊是否出现种间分化?为此，我们选择不同地域分布的微小按蚊进行分类学研究。现就海南与广西两地微小按蚊杂交试验结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 蚊虫来源：海南微小按蚊(简称A.m.H),1994年8月采集于海南省儋州市八一农场。广西微小按蚊(简称A.m.G),1992年采集于广西凌云县伶站乡。分别在采集地的牛房中捕获饱血雌蚊,经形态鉴定后单雌产卵,常规驯养,建立单雌繁殖线。
, 百拇医药
1.2 杂交试验：为了避免自交的发生，将羽化12 h内的成蚊分雌雄饲养。羽化第3～5天即饲以豚鼠血,采用人工强迫交配,交配后的雌蚊待卵巢发育成熟后置直径2 cm的玻璃指管内产卵。观察产卵率、平均产卵量和孵化率；解剖已交配过的雌蚊受精囊，计算受精率；子代幼虫孵化后按常规饲养，观察化蛹率、羽化率和成蚊性别比例。
1.3 卵巢营养细胞多线染色体观察：取杂种F1代雌蚊(羽化3～5 d)，饱血后28～32 h，待卵巢发育至克氏Ⅲ期时，分离卵巢营养细胞，按Coluzzi方法制作多线染色体标本。观察染色体各区带的联会情况。
2 结 果
2.1 杂种后代的能育性：A.m.H与A.m.G的杂交结果见表1。在亲本自交组中，A.m.G的受精率、产卵率和幼虫孵化率等比A.m.H低；两地微小按蚊的父本与母本之间的杂交F1代中，各观察指标均无明显差异；杂种F1代与亲本回交组的观察，可见(G×H)F1×G与G×(H×G)F1组的受精率、产卵率明显低于其它回交组。此外，大多数回交组的各项观察指标均无明显差异，各回交组均表现出可育。回交组的子代的各自交组观察，也显示能育。
, 百拇医药
2.2 卵巢营养细胞多线染色体：两地微小按蚊杂种F1代雌蚊的卵巢营养细胞多线染色体各区带未见显著的不联会区，见图1、2。
表1 海南与广西微小按蚊杂交结果 交配组合
♀×♂
交配数
(No)
受精率
(%)
产卵率
(%)
雌蚊平均
产卵数
, 百拇医药
(No)
孵化率
(%)
幼虫数
(No)
幼虫化
蛹 率
(%)
蛹数
(No)
蛹羽
化率
(%)
, 百拇医药
成蚊性
别比例
♀∶♂
H×H
32
62.50
56.25
44.39
62.57
470
87.02
409
94.13
, 百拇医药
1∶0.98
G×G
39
41.03
30.77
72.67
49.08
428
72.90
312
93.59
1∶0.93
H×G
, 百拇医药
35
60.00
51.43
103.94
47.89
850
88.94
756
87.29
1∶0.87
G×H
40
62.50
, 百拇医药
47.50
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51.38
1008
92.96
937
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1∶1.01
(H×G)F1×H
37
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51.35
, http://www.100md.com 94.63
38.71
504
91.47
461
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1∶0.77
H×(H×G)F1
38
57.89
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81.00
53.18
, 百拇医药
610
91.64
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1∶0.93
(H×G)F1×G
35
57.14
48.57
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29.95
346
85.84
, 百拇医药
297
94.61
1∶0.90
G×(H×G)F1
34
26.47
23.53
124.00
50.71
503
95.03
478
, 百拇医药 93.83
1∶0.91
(G×H)F1×H
31
64.52
64.52
109.05
44.02
524
79.77
418
97.61
1∶1.00
, http://www.100md.com
H×(G×H)F1
35
71.43
65.71
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52.49
603
90.38
545
96.15
1∶1.07
(G×H)F1×G
, 百拇医药
34
29.41
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22.99
186
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G×(G×H)F1
36
44.44
, 百拇医药
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1∶0.82
(H×G)F1×(H×G)F1
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14.29
, http://www.100md.com
85.33
64.26
329
95.14
313
93.29
1∶1.13
(H×G)F1×(G×H)F1
33
42.42
42.42
95.71
, 百拇医药
65.30
560
87.68
491
95.72
1∶1.00
(G×H)F1×(G×H)F1
48
43.75
33.33
116.56
71.31
, 百拇医药
473
79.28
375
98.40
1∶0.94
(G×H)F1×(H×G)F1
48
25.00
20.83
112.90
60.41
645
, 百拇医药
90.08
581
94.49
1∶0.91
注：H表示A.m.H;G表示A.m.G
图1 (G×H)F1卵巢营养细胞多线染色体
图2(H×G)F1卵巢营养细胞多线染色体
3 讨 论
由于地理隔离和(或)遗传因素的内在影响，不同地理分布的微小按蚊可能出现形态、生理及生活习性等方面的变异。这些变异的程度是否达到种间的差异，必需有一明确的指标说明。而通过杂交试验观察其生殖隔离情况，正是判断种间遗传分化的最为可靠的指标之一。1992年以来，我们通过同工酶谱比较和杂交试验等方法，探明了分布在广西北部、西部与南部的微小按蚊存在差异，但未出现生殖隔离，是同种[3～5]。俞渊等[1]根据形态与吸血习性的差异等把海南微小按蚊分为A、B两型，说明海南的微小按蚊存在变异。Sucharit[2]也是根据形态的比较(未见杂交试验或其它进一步研究材料)，认为海南微小按蚊的B型与泰国的两种微小按蚊不同，定为B种。广西与海南隔海相邻，为了阐明两地微小按蚊的遗传关系，我们对海南与广西微小按蚊进行了形态、同工酶谱比较和杂交试验。形态上，除了第4翅脉第1支中间淡色斑的出现率：海南微小按蚊占10%，广西微小按蚊占3.3%外，两地微小按蚊难以区别。从杂交试验结果看，虽然某些回交组的少数观察指标明显下降，但在所有的交配组中尚未见有不育的现象。卵巢营养细胞多线染色体的观察也未见有意义的恒定不联会区。可见，海南与广西两地微小按蚊之间不存在生殖隔离，是同种。
, 百拇医药
(本课题得到海南省儋州市防疫站寄生虫病防治科全体同志和海南省热带病防治研究所李明馨、司有忠同志的支持，特表谢意)
参考文献
1 俞 渊，李明馨.海南岛微小按蚊Anopheles(Cellia)minimus,1901类型的研究.寄生虫学与寄生虫病杂志,1984,2(2):95
2 Sucharit,Komalamisra,Leemingsawat,et al.Population genetic studies of the Anopheles minimus complex in Thailand.Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth,1988,19(4):717
3 石焕焕,何登贤.广西三地微小按蚊乳酸脱氢酶和酯酶同工酶比较研究.广西医科大学学报,1994,11(3):258
4 石焕焕,袁志刚,何登贤,等.桂南与桂西两地微小按蚊杂交试验.广西医科大学学报,1994,11(4):365
5 石焕焕,黄若密,何登贤,等.桂南与桂北微小按蚊杂交试验.广西医科大学学报，1996,13(2):1
收稿日期：1999-02-05, 百拇医药