添加ATP体外精液处理后宫内人工授精治疗不育症
作者：王建国 何国群 张国瑞
单位：063000 河北省唐山市商业医院 王建国；河北省唐山市中医院 何国群 张国瑞
关键词：三磷酸腺苷；男性不育；人工授精
中国综合临床990555摘 要 目的 研究在多管上游法体外精液处理技术中添加ATP后，对宫内人工授精(IUI)受孕率的影响。方法 对64例添加ATP的多管上游法体外处理后的精液进行宫内人工授精，并设30例对照组对比观察。结果添加ATP组受孕率为45.31%，对照组为30.00%；采用配对t检验进行统计学处理，两组间差异非常显著(P<0.01)。结论 ATP对改善精子活动有重要作用，多管上游法体外精液处理过程中添加ATP可明显提高IUI的受孕率。
夫精精子上游处理后人工授精(AIH)，用于治疗少精症和弱精症屡有报道，但对其治疗效果的评价尚有分岐[1～3]。我们在多管上游法精液处理基础上添加ATP，进一步提高了精液质量。报告如下。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料 94对不育夫妇，男子29.68±3.24岁，女子27.56±2.96岁；婚龄2～5年。精液检查按WHO标准，均为指标异常。女方经妇科检查、子宫内膜活检、输卵管通气、基础体温测定均无异常发现；血清抗精子抗体阴性。其中64对不育夫妇采用添加ATP体外精液处理后行宫内人工授精(IUI)，随机抽取的另30对不育夫妇则采用单纯多管上游法体外精液处理后行IUI，两组结果采用配对t检验进行统计学处理。
1.2 体外精液处理 禁欲1周，手淫排精，将精液收集于无菌广口瓶内，置37℃水浴箱内，待精液液化后，将ATP按20mg/ml比例加入精液中，混匀。将数支含有0.5ml Tyrode液的试管，沿管壁加入精液0.5ml，使两者形成分界面，试管置恒温箱内30°角斜放孵育1h。将试管直立，用吸管吸取每支试管内的上层Tyrode液0.3ml～0.4ml，置于1支无菌的离心管内，1500r/min离心10分钟弃去上清，在精子沉淀团块上加0.5ml Tyrode液，混匀团块备用。不添加ATP的对照组则省略第一步。以上程序均无菌操作进行。
, 百拇医药
1.3 授精方法 根据基础体温测算，在排卵前大约2～4天开始，每日行尿IH测定及B超卵泡监测，在排卵日及排卵后1日各行IUI一次。用无菌细导管插入宫颈管，吸取处理后的精液1ml，先缓缓注入0.5ml，其余任其流向后穹隆。拔出导管，让受术者抬高臀部平卧半小时。
2 结果
2.1 添加ATP的多管上游法处理后与单纯多管上游法处理后比较，精液各项指标的改善显著提高(P<0.05)，活动精子百分率ATP法为单纯法的1.21倍，正常形态精子百分率为1.11倍，精子平均运动速度为1.12倍，生育指数为1.35倍，活动精子回收率为1.14倍(ATP法为43.03%，单纯法为37.80%)。两组相比有显著性差异(P<0.05)[4](见表1)。
表1 添加ATP与单纯多管上游法比较(±s)
单纯多管上游法
, 百拇医药
添加ATP
P
活动精子百分率
72.50±10.00
87.50±13.00
<0.01
正常形态精子百分率
70.50±7.80
78.30±4.23
<0.05
精子平均运动速度(μm/s)
35.60±4.30
, 百拇医药
39.80±3.50
<0.05
生育指数
0.88±0.40
1.19±0.30
<0.05
活动精子回收率
37.80±2.40
43.03±3.30
<0.05
2.2 添加ATP组64例妇女进行了185个周期的IUI，受孕29例，受孕率为45.31%；对照组30例妇女进行行88个周期的IUI，受孕9例，受孕率30.00%；添加ATP组受孕率显著高于对照组(P<0.001)。两组38例受孕均发生在开始治疗的4个周期内，无差异。ATP组有4、5、7、7例，对照组有2、4、6、5例分别在1～4次IUI后放弃了治疗(见表2)。
, 百拇医药
表2 添加ATP组与对照组授精周期与受孕分布 授精周期
(月经周期)
IUI例数
受孕例数
终止IUI例数
各周期受孕率(%)
ATP组
对照组
ATP组
对照组
ATP组
对照组
, 百拇医药
ATP组
对照组
1
64
30
12
4
4
2
18.75
13.30
2
48
24
, 百拇医药
9
3
5
4
14.06
10.00
3
34
17
5
1
7
6
7.81
, 百拇医药
3.30
4
22
10
3
1
7
5
4.69
3.30
5
12
4
0
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0
9
2
0
0
6
3
2
0
0
2
1
0
0
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7
1
1
0
0
0
1
0
0
8
1
0
0
0
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0
0
0
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表2说明：①ATP组中有64例进行1个周期的IUI，48例进行2个周期的IUI……余类推，故共累计进行了185个周期的IUI；而对照组共累计进行了88个周期IUI。②ATP组64例中进行第一个周期IUI后即有12例受孕，受孕率为18.75%；对照组30例中进行第一个周期IUI后即有4例受孕，受孕率为13.30%。余类推。③ATP组64例中，进行完第1个周期IUI以后，因有12例已受孕，并有4例放弃治疗而终止IUI，故只余48例(64-12-4＝48)进入第2个周期IUI；对照组30例中，进行完第1个周期IUI以后，因有4例已受孕，并有2例放弃治疗而终止IUI，故只余下24例(30-4-2＝24)进入第二个周期IUI。余类推。
, http://www.100md.com 3 讨论
很多研究报道认为，有生育能力的男子精子细胞内的ATP浓度高于不育男性[5]。文献报道宫颈管夫精人工授精总妊娠率为13.00%～25.00%[6]，本研究中对照组的妊娠率为30.00%，而添加ATP组则为45.31%，明显高于文献报道及对照组(P<0.01)。
ATP在体外改善精液及IUI中的作用有：①供给精子活动能量。精子本身含有的能量不多，在正常环境和活动状态下，将很快耗尽能量而衰亡[7]。在体外处理中，精液排出体外至液化并处理完毕注入宫腔，至少需要120min。在此期间，添加的ATP可不断地供给精子活动所必需的能量，并可改善精子活力，从而提高受孕率。②可提高精子抗低温能力。实验证明，在21℃室温下加了ATP的精液，精子仍具有正常活动能力。在12℃的环境中，1h后仍有约50%的精子具有较好的活力。ATP的这一作用在体外精液处理中具有重要意义。因为在多管上游法中，将收集每支试管内的上层Tyrode液离心10分，这时，无菌离心管内的Tyrode液温度会迅速下降，其内的精子将处于低温环境中，致使精子活力低下或死亡，而添加ATP则可有效地保护精子，提高精子的抗低温能力。
, 百拇医药
ATP对冷冻复温后的精子活动能力是否有作用，仍存在分岐。Comhaire等[8]选择冷冻复温后ATP浓度高的精液，经6个周期的IUI后发现，妇女的受孕成功率提高。王沛涛等[9]分别用两种浓度的ATP和肌苷溶液孵育处理冷冻复温后的精子，结果显示ATP或肌苷的介质处理对精子的活动力和CM穿透能力等功能无有利影响。本研究中，精液未经冷冻，与冷冻复温后的结果缺乏可比性，总之，本研究证明，添加ATP确有保护精子，增加精子的运动能力，改善精子获能和顶体反应的作用，因而能显著提高受孕率，适用于精子活力低下、少精子等引起的不育。
参考文献
1 Kerin J EP，Peek J，Warnes GM.Improved conception rate after intrauterine insemination of Washed spermatozoa from men with poor quality semen.Lancet，1984，1(4)：533
, http://www.100md.com
2 Hoing LM，Paul D，Andre C.Treatment of infertility of oligosthenotspermia by transcervical intrauterine insemination of motile spermatozoa.Fertil Steril，1986，45(3)：388
3 Harris SJ，Michaelp M，Gordon M.Improved separation of mot-
ile sperm in asthenospermin and its apptiration to artificical insemination homologons(AIH).Fertil Steril，1981，36(2)：219
4 王建国，何国群，张丽娜.添加ATP体外精液处理技术的实验研究.男性学杂志，1997，11(4)：224
, 百拇医药
5 Chan SYW，Christrna Wang.Correlation between semen adenosine triphospate and sperm fertilzing Capacity.Fertil Steril，1987，47(4)：717
6 Cruzl RI，Ekkehard K，Vincent T.A Prospective study of intr-
auterine insemenation of processed sperm from men with oligoasthenospermia in superovulated woman.Fertil Steril，1986，46(4)：673
7 黄平治.男性不育.北京：科学科技文献出版社，1990.318
8 Comhaire FH，Thiery M.Methods for improvement of the success rate of artificial insemination with donor semen.Int J Androl，1986，9(1)：14
9 王沛涛，崔向东.冷冻复温后低温保护剂和精子激活剂对精子功能影响的研究.男性学杂志，1996，10(4)：213
[收稿：1999-01-18 修回：1999-06-10], 百拇医药
单位：063000 河北省唐山市商业医院 王建国；河北省唐山市中医院 何国群 张国瑞
关键词：三磷酸腺苷；男性不育；人工授精
中国综合临床990555摘 要 目的 研究在多管上游法体外精液处理技术中添加ATP后，对宫内人工授精(IUI)受孕率的影响。方法 对64例添加ATP的多管上游法体外处理后的精液进行宫内人工授精，并设30例对照组对比观察。结果添加ATP组受孕率为45.31%，对照组为30.00%；采用配对t检验进行统计学处理，两组间差异非常显著(P<0.01)。结论 ATP对改善精子活动有重要作用，多管上游法体外精液处理过程中添加ATP可明显提高IUI的受孕率。
夫精精子上游处理后人工授精(AIH)，用于治疗少精症和弱精症屡有报道，但对其治疗效果的评价尚有分岐[1～3]。我们在多管上游法精液处理基础上添加ATP，进一步提高了精液质量。报告如下。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料 94对不育夫妇，男子29.68±3.24岁，女子27.56±2.96岁；婚龄2～5年。精液检查按WHO标准，均为指标异常。女方经妇科检查、子宫内膜活检、输卵管通气、基础体温测定均无异常发现；血清抗精子抗体阴性。其中64对不育夫妇采用添加ATP体外精液处理后行宫内人工授精(IUI)，随机抽取的另30对不育夫妇则采用单纯多管上游法体外精液处理后行IUI，两组结果采用配对t检验进行统计学处理。
1.2 体外精液处理 禁欲1周，手淫排精，将精液收集于无菌广口瓶内，置37℃水浴箱内，待精液液化后，将ATP按20mg/ml比例加入精液中，混匀。将数支含有0.5ml Tyrode液的试管，沿管壁加入精液0.5ml，使两者形成分界面，试管置恒温箱内30°角斜放孵育1h。将试管直立，用吸管吸取每支试管内的上层Tyrode液0.3ml～0.4ml，置于1支无菌的离心管内，1500r/min离心10分钟弃去上清，在精子沉淀团块上加0.5ml Tyrode液，混匀团块备用。不添加ATP的对照组则省略第一步。以上程序均无菌操作进行。
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1.3 授精方法 根据基础体温测算，在排卵前大约2～4天开始，每日行尿IH测定及B超卵泡监测，在排卵日及排卵后1日各行IUI一次。用无菌细导管插入宫颈管，吸取处理后的精液1ml，先缓缓注入0.5ml，其余任其流向后穹隆。拔出导管，让受术者抬高臀部平卧半小时。
2 结果
2.1 添加ATP的多管上游法处理后与单纯多管上游法处理后比较，精液各项指标的改善显著提高(P<0.05)，活动精子百分率ATP法为单纯法的1.21倍，正常形态精子百分率为1.11倍，精子平均运动速度为1.12倍，生育指数为1.35倍，活动精子回收率为1.14倍(ATP法为43.03%，单纯法为37.80%)。两组相比有显著性差异(P<0.05)[4](见表1)。
表1 添加ATP与单纯多管上游法比较(±s)
单纯多管上游法
, 百拇医药
添加ATP
P
活动精子百分率
72.50±10.00
87.50±13.00
<0.01
正常形态精子百分率
70.50±7.80
78.30±4.23
<0.05
精子平均运动速度(μm/s)
35.60±4.30
, 百拇医药
39.80±3.50
<0.05
生育指数
0.88±0.40
1.19±0.30
<0.05
活动精子回收率
37.80±2.40
43.03±3.30
<0.05
2.2 添加ATP组64例妇女进行了185个周期的IUI，受孕29例，受孕率为45.31%；对照组30例妇女进行行88个周期的IUI，受孕9例，受孕率30.00%；添加ATP组受孕率显著高于对照组(P<0.001)。两组38例受孕均发生在开始治疗的4个周期内，无差异。ATP组有4、5、7、7例，对照组有2、4、6、5例分别在1～4次IUI后放弃了治疗(见表2)。
, 百拇医药
表2 添加ATP组与对照组授精周期与受孕分布 授精周期
(月经周期)
IUI例数
受孕例数
终止IUI例数
各周期受孕率(%)
ATP组
对照组
ATP组
对照组
ATP组
对照组
, 百拇医药
ATP组
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1
64
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5
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表2说明：①ATP组中有64例进行1个周期的IUI，48例进行2个周期的IUI……余类推，故共累计进行了185个周期的IUI；而对照组共累计进行了88个周期IUI。②ATP组64例中进行第一个周期IUI后即有12例受孕，受孕率为18.75%；对照组30例中进行第一个周期IUI后即有4例受孕，受孕率为13.30%。余类推。③ATP组64例中，进行完第1个周期IUI以后，因有12例已受孕，并有4例放弃治疗而终止IUI，故只余48例(64-12-4＝48)进入第2个周期IUI；对照组30例中，进行完第1个周期IUI以后，因有4例已受孕，并有2例放弃治疗而终止IUI，故只余下24例(30-4-2＝24)进入第二个周期IUI。余类推。
, http://www.100md.com 3 讨论
很多研究报道认为，有生育能力的男子精子细胞内的ATP浓度高于不育男性[5]。文献报道宫颈管夫精人工授精总妊娠率为13.00%～25.00%[6]，本研究中对照组的妊娠率为30.00%，而添加ATP组则为45.31%，明显高于文献报道及对照组(P<0.01)。
ATP在体外改善精液及IUI中的作用有：①供给精子活动能量。精子本身含有的能量不多，在正常环境和活动状态下，将很快耗尽能量而衰亡[7]。在体外处理中，精液排出体外至液化并处理完毕注入宫腔，至少需要120min。在此期间，添加的ATP可不断地供给精子活动所必需的能量，并可改善精子活力，从而提高受孕率。②可提高精子抗低温能力。实验证明，在21℃室温下加了ATP的精液，精子仍具有正常活动能力。在12℃的环境中，1h后仍有约50%的精子具有较好的活力。ATP的这一作用在体外精液处理中具有重要意义。因为在多管上游法中，将收集每支试管内的上层Tyrode液离心10分，这时，无菌离心管内的Tyrode液温度会迅速下降，其内的精子将处于低温环境中，致使精子活力低下或死亡，而添加ATP则可有效地保护精子，提高精子的抗低温能力。
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ATP对冷冻复温后的精子活动能力是否有作用，仍存在分岐。Comhaire等[8]选择冷冻复温后ATP浓度高的精液，经6个周期的IUI后发现，妇女的受孕成功率提高。王沛涛等[9]分别用两种浓度的ATP和肌苷溶液孵育处理冷冻复温后的精子，结果显示ATP或肌苷的介质处理对精子的活动力和CM穿透能力等功能无有利影响。本研究中，精液未经冷冻，与冷冻复温后的结果缺乏可比性，总之，本研究证明，添加ATP确有保护精子，增加精子的运动能力，改善精子获能和顶体反应的作用，因而能显著提高受孕率，适用于精子活力低下、少精子等引起的不育。
参考文献
1 Kerin J EP，Peek J，Warnes GM.Improved conception rate after intrauterine insemination of Washed spermatozoa from men with poor quality semen.Lancet，1984，1(4)：533
, http://www.100md.com
2 Hoing LM，Paul D，Andre C.Treatment of infertility of oligosthenotspermia by transcervical intrauterine insemination of motile spermatozoa.Fertil Steril，1986，45(3)：388
3 Harris SJ，Michaelp M，Gordon M.Improved separation of mot-
ile sperm in asthenospermin and its apptiration to artificical insemination homologons(AIH).Fertil Steril，1981，36(2)：219
4 王建国，何国群，张丽娜.添加ATP体外精液处理技术的实验研究.男性学杂志，1997，11(4)：224
, 百拇医药
5 Chan SYW，Christrna Wang.Correlation between semen adenosine triphospate and sperm fertilzing Capacity.Fertil Steril，1987，47(4)：717
6 Cruzl RI，Ekkehard K，Vincent T.A Prospective study of intr-
auterine insemenation of processed sperm from men with oligoasthenospermia in superovulated woman.Fertil Steril，1986，46(4)：673
7 黄平治.男性不育.北京：科学科技文献出版社，1990.318
8 Comhaire FH，Thiery M.Methods for improvement of the success rate of artificial insemination with donor semen.Int J Androl，1986，9(1)：14
9 王沛涛，崔向东.冷冻复温后低温保护剂和精子激活剂对精子功能影响的研究.男性学杂志，1996，10(4)：213
[收稿：1999-01-18 修回：1999-06-10], 百拇医药