大鼠肾上腺次全切除肾阳虚模型胃、舌病理观察
作者：陈小野，邹世洁，王 震，吕爱平，艾景录
单位：中国中医研究院基础理论研究所，北京 100700
关键词：肾阳虚；肾上腺功能减退；疾病模型；动物；病理学
中国中医基础医学杂志991107 摘 要：目的 本实验观察大鼠肾上腺次全切除肾阳虚模型的胃、舌病理形态改变。方法 实验采用Wistar雄性大鼠，随机分为对照组和实验组。实验组行肾上腺次全切除术，对照做假手术。术后21d处死，主要观察胃、舌病理改变。结果 实验组见胃粘膜胃体腺腺颈部粘液细胞应激性增生，腺腔扩张，粘膜细胞胞浆空泡化及核固缩多见，胃小凹相对长度增加，胃体腺腺底相对厚度减少，胃体粘膜核分裂相频度减少而幽门粘膜核分裂相频度增加。无纤维组织增生和炎症性改变。实验组圆枕前后固有层乳头密度均增加，固有层乳头水肿。丝状乳头核空泡变明显。舌腺粘液腺酸性粘液增多。胃及舌肥大细胞密度和短径有增加或增加趋势。结论 肾上腺大部分切除肾阳虚证模型可见胃粘膜和舌粘膜、舌腺发生萎缩和退变，胃、舌的病理变化有相关性。而胃粘膜和舌腺的变化较舌粘膜更为敏感。
, 百拇医药
作者以往的研究工作认为，慢性萎缩性胃炎的病理本质是肾阳虚[1]，但国内有关这一观点的研究尚少。肾上腺皮、髓质功能减退是中医(肾)阳虚证病理的一个重要方面。本实验观察大鼠肾上腺次全切除肾阳虚模型的胃、舌病理形态改变。
材料与方法
1 动物
Wistar雄性大鼠，体重326.5g±12.5g(x±s)，购自中国医学科学院实验动物中心。随机分为对照组9只和实验组10只。
2 造模方法
实验组于乙醚麻醉下行右侧肾上腺摘除，左侧肾上腺剪去一半以上，余一半挖去髓质[2、3]，术后饲养于用刨花做垫料的塑料鼠盒中，保持室温为21～25℃，以葡萄糖生理盐水代饮水。对照组除不切除肾上腺外，其他手术过程同实验组，术后正常饲养。两组均用青霉素钠注射抗感染。
, 百拇医药
3 观察指示
3.1 实验期间肉眼观察动物外观、体重和舌象
3.2 术后21d脱颈椎处死，取心、肺、肝、脾、肾、睾丸、胸腺、腹膜后脂肪、副睾及周围脂肪垫称湿重，并计算其指数(与体重比值)。取胃、舌和肝、脾、睾丸、胸腺、肾上腺等以中性福尔马林固定，常规制作石蜡切片，胃、舌切片作HE、ABpH2.5PAS(粘液)、中性红(肥大细胞)染色，其他器官作HE染色，光镜观察，测微尺计量有关指标，使铀《MP药携统计分析系统》作X2检验及t检验。
3.3 指标说明
胃小凹相对长度指胃小凹长度与胃体腺体长救比值。罡体腺镔底相对厚度指腺底厚度与腺体长度比值；胃体粘膜中性和酸性粘液细胞层相对厚度指腺颈部中性粘液层厚度和小凹底部和腺颈部酸性粘液层厚度分别与粘膜固有层厚度比值。舌体中部有舌圆枕，舌上皮层厚度指上皮从基底层到颗粒层厚度。
, http://www.100md.com
结果
1 外观、体重和舌象
对照组动物舌苔略多，毛有光泽，较凶猛；实验组动物舌苔略少，嫩，毛明显无光泽，活动减少，较温顺。实验过程两组动物体重均有所增加，组间无统计学差异。手术过程及实验过程对照组死亡3只，实验组死亡4只。实验结束时两组动物腹腔均未见粘连和化脓，腹壁创口未完全愈合。解剖时对照组动物双侧肾上腺均见，实验组动物只见一侧肾上腺残余。
2 脏器指数和各脏器组织病理
实验组动物肝细胞见轻度疏松变。残留的肾上腺增大色暗红。镜下以皮质为主，髓质罕见，皮质或见大片灶状坏死，细胞增生，可见明显核分裂相及成堆的新生细胞，双核细胞多见。皮质细胞脱脂。肾上腺间质炎细胞浸润，血窦扩张，纤维组织增生，甚至分割皮质。肾上腺周围脂肪组织血管扩张，炎细胞浸润。睾丸组织无明显异常。脏器指数和病理计量见表1。
, http://www.100md.com
3 胃粘膜组织病理
两组均见胃体腺腺颈部粘液细胞增生，腺腔扩张，但实验组增生幅度更大。与对照组比较，实验组粘膜各类细胞胞浆空泡化及核固缩多见。两组胃粘膜无明显炎细胞浸润和固有膜纤维组织增生。病理计量见表2。
表1 脏器指数和各脏器组织病理计量
(±s) 器 官
对照组(n=6)
实验组(n=6)
P值
心(×10-2)
0.41±0.018
0.42±0.015
, http://www.100md.com
肺(×10-2)
0.64±0.046
0.78±0.032
<0.05
肝(×10-1)
0.43±0.204
0.46±0.192
脾(×10-2)
0.50±0.082
0.65±0.077
肾(×10-2)
, 百拇医药
0.76±0.021
0.83±0.034
胸腺(×10-3)
0.11±0.013
0.14±0.019
睾丸(×10-2)
0.82±0.037
0.95±0.035
<0.05
腹膜后脂肪(×10-2)
0.86±0.126
, 百拇医药
0.65±0.087
副睾脂肪垫(×10-2)
1.15±0.054
1.08±0.072
双核肝细胞频数(个/324μm2)
0.94±0.150
1.83±0.161
<0.01
胸腺皮质厚度(μm×102)
1.93±0.102
, http://www.100md.com 1.97±0.087
脾小体直径(μm×102)
3.05±0.207
3.32±0.144
脾动脉周围淋巴鞘直径(μm×102)
1.53±0.159
1.75±0.115
注：P值未说明者均>0.1，下同。表2 胃粘膜组织病理计量
(±s) 指 标
对照组(n=6)
, 百拇医药 实验组(n=6)
P值
胃体粘膜固有层厚度(μm)
582.1±12.99
542.0±19.92
幽门粘度固有层厚度(μm)
244.8±2.99
246.2±10.74
胃小凹相对长度
0.14±0.008
0.18±0.011
<0.01
, 百拇医药
胃体腺腺底相对厚度
0.31±0.020
0.21±0.016
<0.01
胃体粘膜核分裂相频度(个/高倍视野)
0.73±0.18
0.28±0.13
<0.1
幽门粘膜核分裂相频度(个/高倍视野)
2.23±0.60
3.00±0.62
, 百拇医药
粘膜肌厚度(μm)
14.96±0.20
14.62±1.43
粘膜肌增生层厚度(μm)
20.97±1.22
20.30±3.23
中性粘液层相对厚度
0.21±0.008
0.26±0.016
<0.05
酸性粘液层相对厚度
, http://www.100md.com 0.003±0.002
0.035±0.010
<0.05
粘膜下层肥大细胞密度(个/高倍视野)
2.42±0.29
3.09±0.83
粘膜下层肥大细胞短径(μm)
5.61±0.41
6.63±0.46
4 舌组织病理
两组丝状乳头附着的细菌增多。与对照组比较，实验组固有层乳头水肿，丝状乳头核空泡变明显，以乳头前部为主。舌腺粘液腺酸性粘液增多，见于胞浆中及腺腔，HE染色嗜碱性增强(病理计量见表3)。表3 舌组织病理计量
, 百拇医药
(±s) 指 标
对照组(n=6)
实验组(n=6)
P值
圆枕前固有层乳头密度(个/100倍视野)
8.93±0.36
10.87±0.39
<0.01
圆枕后固有层乳头密度(个/100倍视野)
17.53±0.43
19.72±0.78
, http://www.100md.com
<0.05
圆枕前基底层核分裂相频数(个/100倍视野)
0.25±0.112
0.18±0.042
舌圆枕前菌状乳头密度(个/100倍视野)
0.32±0.04
0.34±0.06
上皮层厚度(μm)
112.2±7.55
113.4±2.99
角质层厚度(μm)
, 百拇医药
60.64±3.54
61.20±4.22
舌肌肥大细胞密度(个/100倍视野)
21.32±0.99
26.20±2.12
<0.1
舌肌肥大细胞短径(μm)
11.05±0.31
11.56±0.53
讨论
1 肾上腺切除和大部切除模型属肾阳虚证[4]
, http://www.100md.com
实验组腹膜后脂肪和副睾及周围脂肪垫指数有降低趋势，可能与其由于肾上腺功能减退，机体对损伤耐受能力减弱有关。肺脏指数的升高可能与损伤带来的炎症加重有关，作者以往多种实验均发现，实验组动物比正常对照组肺脏指数增大。脾脏、胸腺指数、胸腺皮质厚度、脾小体直径、脾动脉周围淋巴鞘直径有升高趋势，源于肾上腺皮质功能减退导致免疫抑制减弱。睾丸指数增大可能与水盐代谢失调、水肿有关。肝脏细胞轻度疏松变，双核肝细胞频数增加可能反映肝细胞的轻度增生。残余肾上腺发生代偿性增生改变。
2 胃粘膜病理改变
两组腺颈部粘液细胞增生，腺腔扩张，实验组中性粘液层和酸性粘液层相对厚度均增加，可能是对手术损伤的应激反应。这与胃溃疡周围粘膜粘液细胞的反应性增生一致。与对照组比较，实验组粘膜细胞胞浆空泡化及核固缩多见，胃小凹相对长度增加，胃体腺腺底相对厚度减少，胃体粘膜核分裂相频度减少而幽门粘膜核分裂相频度增加。说明胃体粘膜有轻度萎缩改变，这种萎缩主要源于增殖减慢，而无纤维组织增生和炎症性改变。
, http://www.100md.com
3 舌病理改变
两组动物丝状乳头附着的细菌增多，与对照组比较，实验组圆枕前后固有层乳头密度均增加，固有层乳头水肿。这些变化可能与手术损伤常引起的“湿热”病理有关。丝状乳头核空泡变明显，以乳头前部为主。丝状乳头的前部和后部反映不同的角化过程和增殖速度[5、6]。舌腺粘液腺酸性粘液增多，胃及舌肥大细胞密度和短径有增加或增加趋势，均与皮质激素的减少有关。
4 作者另一实验探讨肾上腺切除(5周)肾阳虚动物胃、舌病理变化
其实验组胃粘膜变化与本实验肾阳虚动物在萎缩、胃体粘膜增殖减慢、幽门粘膜增殖加快、非炎症和纤维组织增生等方面的特征一致。但萎缩、细胞变性改变更为严重，而无腺颈部粘液细胞的应激性反应，可能与其实验时间较长，肾上腺又全部切除，应激机制受损更为严重有关。肾上腺切除(5周)肾阳虚动物舌粘膜和舌腺有萎缩和退化表现，比本实验肾阳虚动物程度明显加重。
, 百拇医药
5 肾上腺切除和大部切除作为肾阳虚模型各有其特点
结合此两批实验的结果可以发现，肾上腺皮质功能减退可使胃粘膜和舌粘膜、舌腺发生萎缩和退变，胃、舌的病理变化有相关性，而胃粘膜和舌腺的变化较舌粘膜更为敏感。
作者简介：陈小野，男，37岁，中国中医研究院基础理论研究所研究员，主要从事中医理论、中医动物模型理论、中医证候实验研究。通讯地址：北京东直门内北新仓18号，邮编：100700，电话：64014411-2596。
参考文献
[1] 陈小野.胃粘膜肠上皮化生的反重演律假说.医学与哲学，1992，(9)：1.
[2] 郭鹞.人类疾病的动物模型(第1辑).北京：人民卫生出版社，1982.
, 百拇医药 [3] 李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科技出版社，1991.
[4] 顾德官，等.中医阴阳的实验性研究(Ⅱ)附子、肉桂和六味地黄方对高血压大鼠尿醛固酮等的影响.中西医结合杂志，1985，5(2)：105.
[5] IL.Cameron,Cell proliferation,Migraton,and specialization in the epithel ium of the mouse tongue,J.Exp.Zool.,163:271-284.
[6] M.Lida et al,Three-dimensional and surface structure of rat filiform pa pillae,Acta.anat.,1985，121:237.
(收稿日期 1999-04-25 修回日期 1999-05-20), 百拇医药
单位：中国中医研究院基础理论研究所，北京 100700
关键词：肾阳虚；肾上腺功能减退；疾病模型；动物；病理学
中国中医基础医学杂志991107 摘 要：目的 本实验观察大鼠肾上腺次全切除肾阳虚模型的胃、舌病理形态改变。方法 实验采用Wistar雄性大鼠，随机分为对照组和实验组。实验组行肾上腺次全切除术，对照做假手术。术后21d处死，主要观察胃、舌病理改变。结果 实验组见胃粘膜胃体腺腺颈部粘液细胞应激性增生，腺腔扩张，粘膜细胞胞浆空泡化及核固缩多见，胃小凹相对长度增加，胃体腺腺底相对厚度减少，胃体粘膜核分裂相频度减少而幽门粘膜核分裂相频度增加。无纤维组织增生和炎症性改变。实验组圆枕前后固有层乳头密度均增加，固有层乳头水肿。丝状乳头核空泡变明显。舌腺粘液腺酸性粘液增多。胃及舌肥大细胞密度和短径有增加或增加趋势。结论 肾上腺大部分切除肾阳虚证模型可见胃粘膜和舌粘膜、舌腺发生萎缩和退变，胃、舌的病理变化有相关性。而胃粘膜和舌腺的变化较舌粘膜更为敏感。
, 百拇医药
作者以往的研究工作认为，慢性萎缩性胃炎的病理本质是肾阳虚[1]，但国内有关这一观点的研究尚少。肾上腺皮、髓质功能减退是中医(肾)阳虚证病理的一个重要方面。本实验观察大鼠肾上腺次全切除肾阳虚模型的胃、舌病理形态改变。
材料与方法
1 动物
Wistar雄性大鼠，体重326.5g±12.5g(x±s)，购自中国医学科学院实验动物中心。随机分为对照组9只和实验组10只。
2 造模方法
实验组于乙醚麻醉下行右侧肾上腺摘除，左侧肾上腺剪去一半以上，余一半挖去髓质[2、3]，术后饲养于用刨花做垫料的塑料鼠盒中，保持室温为21～25℃，以葡萄糖生理盐水代饮水。对照组除不切除肾上腺外，其他手术过程同实验组，术后正常饲养。两组均用青霉素钠注射抗感染。
, 百拇医药
3 观察指示
3.1 实验期间肉眼观察动物外观、体重和舌象
3.2 术后21d脱颈椎处死，取心、肺、肝、脾、肾、睾丸、胸腺、腹膜后脂肪、副睾及周围脂肪垫称湿重，并计算其指数(与体重比值)。取胃、舌和肝、脾、睾丸、胸腺、肾上腺等以中性福尔马林固定，常规制作石蜡切片，胃、舌切片作HE、ABpH2.5PAS(粘液)、中性红(肥大细胞)染色，其他器官作HE染色，光镜观察，测微尺计量有关指标，使铀《MP药携统计分析系统》作X2检验及t检验。
3.3 指标说明
胃小凹相对长度指胃小凹长度与胃体腺体长救比值。罡体腺镔底相对厚度指腺底厚度与腺体长度比值；胃体粘膜中性和酸性粘液细胞层相对厚度指腺颈部中性粘液层厚度和小凹底部和腺颈部酸性粘液层厚度分别与粘膜固有层厚度比值。舌体中部有舌圆枕，舌上皮层厚度指上皮从基底层到颗粒层厚度。
, http://www.100md.com
结果
1 外观、体重和舌象
对照组动物舌苔略多，毛有光泽，较凶猛；实验组动物舌苔略少，嫩，毛明显无光泽，活动减少，较温顺。实验过程两组动物体重均有所增加，组间无统计学差异。手术过程及实验过程对照组死亡3只，实验组死亡4只。实验结束时两组动物腹腔均未见粘连和化脓，腹壁创口未完全愈合。解剖时对照组动物双侧肾上腺均见，实验组动物只见一侧肾上腺残余。
2 脏器指数和各脏器组织病理
实验组动物肝细胞见轻度疏松变。残留的肾上腺增大色暗红。镜下以皮质为主，髓质罕见，皮质或见大片灶状坏死，细胞增生，可见明显核分裂相及成堆的新生细胞，双核细胞多见。皮质细胞脱脂。肾上腺间质炎细胞浸润，血窦扩张，纤维组织增生，甚至分割皮质。肾上腺周围脂肪组织血管扩张，炎细胞浸润。睾丸组织无明显异常。脏器指数和病理计量见表1。
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3 胃粘膜组织病理
两组均见胃体腺腺颈部粘液细胞增生，腺腔扩张，但实验组增生幅度更大。与对照组比较，实验组粘膜各类细胞胞浆空泡化及核固缩多见。两组胃粘膜无明显炎细胞浸润和固有膜纤维组织增生。病理计量见表2。
表1 脏器指数和各脏器组织病理计量
(±s) 器 官
对照组(n=6)
实验组(n=6)
P值
心(×10-2)
0.41±0.018
0.42±0.015
, http://www.100md.com
肺(×10-2)
0.64±0.046
0.78±0.032
<0.05
肝(×10-1)
0.43±0.204
0.46±0.192
脾(×10-2)
0.50±0.082
0.65±0.077
肾(×10-2)
, 百拇医药
0.76±0.021
0.83±0.034
胸腺(×10-3)
0.11±0.013
0.14±0.019
睾丸(×10-2)
0.82±0.037
0.95±0.035
<0.05
腹膜后脂肪(×10-2)
0.86±0.126
, 百拇医药
0.65±0.087
副睾脂肪垫(×10-2)
1.15±0.054
1.08±0.072
双核肝细胞频数(个/324μm2)
0.94±0.150
1.83±0.161
<0.01
胸腺皮质厚度(μm×102)
1.93±0.102
, http://www.100md.com 1.97±0.087
脾小体直径(μm×102)
3.05±0.207
3.32±0.144
脾动脉周围淋巴鞘直径(μm×102)
1.53±0.159
1.75±0.115
注：P值未说明者均>0.1，下同。表2 胃粘膜组织病理计量
(±s) 指 标
对照组(n=6)
, 百拇医药 实验组(n=6)
P值
胃体粘膜固有层厚度(μm)
582.1±12.99
542.0±19.92
幽门粘度固有层厚度(μm)
244.8±2.99
246.2±10.74
胃小凹相对长度
0.14±0.008
0.18±0.011
<0.01
, 百拇医药
胃体腺腺底相对厚度
0.31±0.020
0.21±0.016
<0.01
胃体粘膜核分裂相频度(个/高倍视野)
0.73±0.18
0.28±0.13
<0.1
幽门粘膜核分裂相频度(个/高倍视野)
2.23±0.60
3.00±0.62
, 百拇医药
粘膜肌厚度(μm)
14.96±0.20
14.62±1.43
粘膜肌增生层厚度(μm)
20.97±1.22
20.30±3.23
中性粘液层相对厚度
0.21±0.008
0.26±0.016
<0.05
酸性粘液层相对厚度
, http://www.100md.com 0.003±0.002
0.035±0.010
<0.05
粘膜下层肥大细胞密度(个/高倍视野)
2.42±0.29
3.09±0.83
粘膜下层肥大细胞短径(μm)
5.61±0.41
6.63±0.46
4 舌组织病理
两组丝状乳头附着的细菌增多。与对照组比较，实验组固有层乳头水肿，丝状乳头核空泡变明显，以乳头前部为主。舌腺粘液腺酸性粘液增多，见于胞浆中及腺腔，HE染色嗜碱性增强(病理计量见表3)。表3 舌组织病理计量
, 百拇医药
(±s) 指 标
对照组(n=6)
实验组(n=6)
P值
圆枕前固有层乳头密度(个/100倍视野)
8.93±0.36
10.87±0.39
<0.01
圆枕后固有层乳头密度(个/100倍视野)
17.53±0.43
19.72±0.78
, http://www.100md.com
<0.05
圆枕前基底层核分裂相频数(个/100倍视野)
0.25±0.112
0.18±0.042
舌圆枕前菌状乳头密度(个/100倍视野)
0.32±0.04
0.34±0.06
上皮层厚度(μm)
112.2±7.55
113.4±2.99
角质层厚度(μm)
, 百拇医药
60.64±3.54
61.20±4.22
舌肌肥大细胞密度(个/100倍视野)
21.32±0.99
26.20±2.12
<0.1
舌肌肥大细胞短径(μm)
11.05±0.31
11.56±0.53
讨论
1 肾上腺切除和大部切除模型属肾阳虚证[4]
, http://www.100md.com
实验组腹膜后脂肪和副睾及周围脂肪垫指数有降低趋势，可能与其由于肾上腺功能减退，机体对损伤耐受能力减弱有关。肺脏指数的升高可能与损伤带来的炎症加重有关，作者以往多种实验均发现，实验组动物比正常对照组肺脏指数增大。脾脏、胸腺指数、胸腺皮质厚度、脾小体直径、脾动脉周围淋巴鞘直径有升高趋势，源于肾上腺皮质功能减退导致免疫抑制减弱。睾丸指数增大可能与水盐代谢失调、水肿有关。肝脏细胞轻度疏松变，双核肝细胞频数增加可能反映肝细胞的轻度增生。残余肾上腺发生代偿性增生改变。
2 胃粘膜病理改变
两组腺颈部粘液细胞增生，腺腔扩张，实验组中性粘液层和酸性粘液层相对厚度均增加，可能是对手术损伤的应激反应。这与胃溃疡周围粘膜粘液细胞的反应性增生一致。与对照组比较，实验组粘膜细胞胞浆空泡化及核固缩多见，胃小凹相对长度增加，胃体腺腺底相对厚度减少，胃体粘膜核分裂相频度减少而幽门粘膜核分裂相频度增加。说明胃体粘膜有轻度萎缩改变，这种萎缩主要源于增殖减慢，而无纤维组织增生和炎症性改变。
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3 舌病理改变
两组动物丝状乳头附着的细菌增多，与对照组比较，实验组圆枕前后固有层乳头密度均增加，固有层乳头水肿。这些变化可能与手术损伤常引起的“湿热”病理有关。丝状乳头核空泡变明显，以乳头前部为主。丝状乳头的前部和后部反映不同的角化过程和增殖速度[5、6]。舌腺粘液腺酸性粘液增多，胃及舌肥大细胞密度和短径有增加或增加趋势，均与皮质激素的减少有关。
4 作者另一实验探讨肾上腺切除(5周)肾阳虚动物胃、舌病理变化
其实验组胃粘膜变化与本实验肾阳虚动物在萎缩、胃体粘膜增殖减慢、幽门粘膜增殖加快、非炎症和纤维组织增生等方面的特征一致。但萎缩、细胞变性改变更为严重，而无腺颈部粘液细胞的应激性反应，可能与其实验时间较长，肾上腺又全部切除，应激机制受损更为严重有关。肾上腺切除(5周)肾阳虚动物舌粘膜和舌腺有萎缩和退化表现，比本实验肾阳虚动物程度明显加重。
, 百拇医药
5 肾上腺切除和大部切除作为肾阳虚模型各有其特点
结合此两批实验的结果可以发现，肾上腺皮质功能减退可使胃粘膜和舌粘膜、舌腺发生萎缩和退变，胃、舌的病理变化有相关性，而胃粘膜和舌腺的变化较舌粘膜更为敏感。
作者简介：陈小野，男，37岁，中国中医研究院基础理论研究所研究员，主要从事中医理论、中医动物模型理论、中医证候实验研究。通讯地址：北京东直门内北新仓18号，邮编：100700，电话：64014411-2596。
参考文献
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(收稿日期 1999-04-25 修回日期 1999-05-20), 百拇医药