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编号:10497308
银杏叶片防治冠心病患者体内红细胞膜脂质过氧化损伤的临床观察
http://www.100md.com 《同济大学学报(医学版)》 2000年第1期
     作者:马建林 毛焕元 周本财 郭和平

    单位:同济医科大学心血管疾病研究所,武汉 430022

    关键词:银杏叶片;冠状动脉硬化;红细胞膜;脂质过氧化 损伤

    同济医科大学学报000125 摘要 53例住院冠心病患者随机分为实验组和对照组,分别给予中药制剂银杏叶片(银可络)和安慰剂治疗1个月,所有患者实验前后分别检测P- Tc、P-LDLc、P-oxLDL、P-SOD、P-GSH-PX、M-Tc、M-LDLc、M-oxLDL、M-Flu、R-MDA、R-SOD水平。结果显示,①实验组用药后P-LPO、P-oxLDL、M-oxLDL、R-MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01);P-SOD、P-GSH-PX、R-SOD、M-Flu水平明显升高(P<0.05或P<0.01),而P-Tc、P-LDLc、M-Tc、M-LDLc水平无明显变化;②对照组实验前后各项指标水平均无明显变化。提示银杏叶片可以明显增加冠心病患者体内抗氧化酶的活性,降低血浆及红细胞膜中脂质过氧化物水平,增加膜的流动性。
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    中图法分类号 R972, R541.4

    Anti-oxidate Effects of Ginkgo Plus on Lipid P eroxidate-induced

    Injury ofErythrocytic Membrane in Patients with Coronary A rtery Disease

    Ma Jianlin MaoHuanyuan Zhou Bencai et al

    (Institute of Cardiovascular Diseases,TongjiMedical Un iversity, Wuhan 430022)

    Abstract Fifty-three patientswith coronary artery disease wer e randomly divided into two groups: experimental group and control one. Each on e wasrespectively treated with Ginkgo plus or placebo for one month. Before and after the experiment, the levels of blood plasmatotal cholesterol (P-Tc), low density lipoprotein cholesterol (P-LDLc), oxidative of low density lipoprotein (P-oxLDL),superoxide dismutase (P-SOD), glutathion peroxidase (P-GSH-PX), m embrane total cholesterol (M-Tc), membranelow density lipoprotein-cholesterol (M-LDLc), membrane oxidative modification of low density lipoprotein (M-oxLDL ),membrane fluidity (M-Flu), erythrocytic malondialdehyde (R-MDA) and superox ide dismutase (R-SOD) weremeasured.The results showed the levels of P-LPO, P -oxLDL, M-oxLDL and R-MDA were significantly decreased(P<0.05 or P<0.01), while P-SOD, P-GSX-PX, R-SOD and M-Flu were si gnificantly increased in theexperimental group after administration (P<0.05 or P<0.01). All indices had no significant change in the controlgroup after administration. The results suggest that Ginkg o plus has a prominent effect on increasing activities ofanti-oxidase, lowerin g lipid peroxidates of plasma and erythrocytic membrane and improving fluidities of erythrocyticmembrane in patients with coronary artery disease.
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    Key words ginkgoplus; coronary artery disease; eryth rocytic membrane; lipid peroxidate-inducedinjury

    晚近研究证实,中药制剂银杏叶片(商品名银可络)具有明显的清除氧自由基(OFR)作用,可以防治脂质过氧化损伤。为了观察这一效应,我们于1995年2月至1995年12月期间对53例住院冠心病(CAD)患者分别进行为期1个月的药物治疗或安慰剂对照观察,为临床应用奠定一定的理论基础。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象

    选择符合1979年WHO及全国CAD诊断标准的住院CAD患者53例,随机分为2组:①实验组27例,其中男性15例,女性12例,年龄38~78岁,平均61.2岁,包括心绞痛11例,无痛性心肌缺血9例,陈旧性心肌梗死7例,其中12例合并高血压病;②对照组26例,其中男性14例,女性12例,年龄37~76岁,平均59.6岁,包括心绞痛10例,无痛性心肌缺血8例,陈旧性心肌梗死8例,其中10例合并高血压病。
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    1.2 实验方法

    所有受试者均在实验前停用影响自由基及其脂质代谢的药物1周以上,且禁食12 h,晨间 取静脉血10ml,置入20 g/L EDTA-Na2试管中(血∶抗凝剂=9∶1),离心取其血浆,低温冰箱保存(先取少量血液测定Hb含量)。取部分红细胞测定:M-Flu,用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤红细胞2次,配成含细胞4×107/ml的红细胞悬液,按1∶1与DPH(荧光探针)标记液混匀,于25 ℃保温30 min,离心弃去标记残液,用PBS洗涤细胞2次,再用PBS稀释成 2 ml悬液,在25℃下采用荧光光度计分别测定与激发偏振光振动方向平行、垂直时荧光偏振强度,根据公式计算出M-Flu;R-MDA,参考Uchlyma等[1]方法提取MDA前质,再按钟福孙等[2]的硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量;R-SOD采用邻苯三酚自 氧化法测定。

    将剩下的红细胞用生理盐水洗涤后,溶于0.025 nmol/L的CaCl2溶液中(体积比1∶1), 于4 ℃置30min至完全溶血,然后以1400 r/min速度离心10 min,去掉溶血液,沉淀物用0 .01 mmol/LPBS(pH值7.40)反复洗涤,再按所取的红细胞体积加入50 g/L NaCl,先在超声波绞碎仪上超声匀浆,再用500 r/min,离心5 min,吸上清液测定M-Tc,吸10 μl匀浆,采用宁波慈城生化试剂厂提供药盒酶法测定;M-LDLc,采用武汉市第四医院生化室提供的药盒酶法测定;M-oxLDL按李家林等[3]的紫外分光光度法提取,在233 nm波长处测吸光度,再按共轭双烯的摩尔吸光因素2.1×104 cm2/mol(转换系数为1)换算成nmol/L,再根据Hb含量算出nmol/g值。
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    取血浆测定P-Tc、P-LDLc(药盒及方法同M-Tc、M-LDLc),P-LPO测定采用紫外分光光度法,单位为KΔA233/L(ΔA233系在波长为233 nm的相对吸光度);P-oxLDL测定:先按Schriewer 等[4]方法沉淀极低密度脂蛋白,再按Sezylar等[5]方法 分离HDL和LDL,沉淀的LDL再用50 g/LNaCl复溶,先按上述紫外分光光度法测定共轭双烯,再按其摩尔吸光因素换算出nmol/L;P-SOD测定方法同R-SOD;P-GSH-PX测定按夏奕明等[6]提供的酶促方法 测定,其活性单位用单位时间单位体积内的谷脱甘肽减少量表示(kU/L)。

    实验组患者给予银可络(深圳海王药业有限公司生产),每日3次,每次2片(每片含有效成分银杏总黄酮甙9.6 mg),对照组给予安慰剂每日3次,每次2片(本院制剂室提供的淀粉制剂),均在治疗1个月后复查上述指标,治疗过程中如出现心绞痛发作给予消心痛5~ 10mg舌下含化。
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    1.3 统计学处理

    数据均采用±s表示,采用自身配对t(t′)检验方法进行统计分析 。

    2 结果

    对照组及实验组服药前后检测的P-Tc、P-LDLc、P-LPO、L-oxLDL、P-SOD、P-GSH-PX、M-Tc、M-LDLc、M-oxLDL、M-Flu、R-MDA、R-SOD的比较结果见表1。表1 二组患者服药前后各项指标比较(±s) 指 标

    对照组(n=26)

    实验组(n=27)

, http://www.100md.com     服药前

    服药后

    服药前

    服药后

    P-Tc(mmol/L)

    5.43± 1.28

    5.39±1.20

    5.61± 1.20

    5.34± 1.31

    P-LDLc(mmol/L)

    3.62±0.42

    3.56± 0.38
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    3.76± 0.44

    3.38± 0 .39

    P-LPO(KΔA233/L)

    3.86± 1.30

    3.81± 1.28

    3.96± 1 .25

    3.01±1.02*

    P-oxLDL(nmol/L)

    76.4±14.8

    73.9±12.6

    79.4±13.2
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    67.8±11.4*

    P-SOD(kU/L)

    10.02± 2.61

    10.84± 0.36

    10.41± 2.96

    12.86± 3.57*

    P-GSH-PX(kU/L)

    5.37± 1.48

    5.46± 1.36

    5.20± 1.26

    6.11±1.37*
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    M-Tc(μmol/g)

    8.58± 2.80

    8.46± 2.44

    8.69± 2.31

    8.41± 2.09

    M-LDLc(μmol/g)

    3.08± 1.02

    3.01± 0.91

    3.01± 0.91

    2.90± 0.86

    M-oxLDL(nmol/g)
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    162.3±42.4

    158.9±38.9

    160.3±38.6

    132.6±30.4**

    R-SOD(kU/g)

    1.79± 0.26

    1.80± 0.27

    1.76±0.25

    2.01± 0. 29**

    R-MDA(nmol/g)

    14.8± 2.7
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    14.1± 3.2

    14.3±2.5

    10.4± 2. 1**

    M-Flu

    2.96± 0.51

    3.04± 0.52

    2.89±0.46

    3.58± 0.62*

    与服药前比较 * P<0.05 **P<0.01

    整个实验过程中,实验组有2例出现轻度口干、味苦,1例出现轻度乏力,经休息1~3 d后自行缓解,未予特殊处理;对照组有4例患者出现1~3次心绞痛发作,实验组有2例患者各出现1次发作,均经舌下含化消心痛5~10 mg后症状缓解。
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    3 讨论

    银杏是现存种子植物中最古老的的孑遗植物,其对疾病的防治作用早在数千年前就已载入我国中药宝库之中,目前临床上所采用的银杏树叶提取物是其标准剂Egb761,主要成份包括黄酮甙及银杏内酯和白果内酯,基础研究证实其是很强的还原剂,可以消除细胞膜花生四烯酸代谢过程中产生的自由基[7],500 μg/L的Egb761可以抑制65%的氢氧自由基以及50%的阿雷素基生成。正常情况下,自由基被内源性抗氧化酶迅速灭活,这些酶主要包括SOD及GSH-PX,保持自由基产生与清除之间的动态平衡;病理情况下,酶的活性降低,自由基产生超过清除,蓄积于体内,破坏细胞膜磷脂中的不饱和脂肪酸,产生LPO,造成细胞膜饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸的比例失调,影响了红细胞膜的形态与结构[8],导致其脆性增加,变形能力下降。

    实验结果显示,银杏叶片在不干扰脂质代谢的同时,可以显著增加CAD患者体内主要抗氧化酶SOD、GSH-PX活性(均为P<0.05),降低LPO及其代谢产物MDA水平(分别为P<0.05及<0.01),尤其是降低血浆及红细胞膜中ox-LDL水平(分别为P<0.05及<0.01),避免了后者通过清道夫受体途径引起巨噬细胞中胆固醇含量剧增并向泡沫细胞转化。表明其具 有 明显的消除自由基作用,其机制可能与增加抗氧化酶SOD、GSH-PX的生物合成继而促进自由基清除,防止后者氧化体内的不饱和脂肪酸有关。此外,本文结果还显示,银杏叶片在不影响红细 胞膜中Tc、LDL含量的同时,能显著增加其流动性(P<0.01),提示该药可以降低红细胞膜的脆性,维护其正常的变形性,避免了动脉粥样硬化形成时红细胞聚集、粘附甚至血栓形成,其机制也可能与减少自由基生成有关,防止后者氧化红细胞膜中不饱和脂肪酸继而造成与饱和脂肪酸的比例失调有关。
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    马建林,男,1959年生,博士,副主任医师。现址:海南省人民医院内科, 海口 570311

    参 考 文 献

    1,Uchlyme M, Mihara M. Determination of malonadehyde precursor in tiss ues by thiobarbiture acid test. AnalBiochem, 1978, 86: 271

    2,钟福孙,胡文尧,冯驰.硫代巴比土酸比色法测定血清过氧化脂质的方法探 讨. 临床检验杂志,1986, 4(3): 129

    3,李家林,杨贵金,童淑芬等. 紫外分光光度法测定血浆过氧化脂质含量. 中国循环杂志,1989,4(1):57

    4,Schriewe H, Moisey M. Determination of LDL cholesterol andLDL apoli poprotein B following precipitation of vLDL in blood serum within phosphotungit ic acid/MgCl2. J ClinBiochemic, 1984, 22: 35
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    6,夏奕明,朱莲珍.血和组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力的测定方法. 卫生研究 ,1987,16(4):29

    5 ,Sezylar L,Wu W T. Separation of serum high-density lipoprotein for cholesterol determination. Clin Chem, 1984, 27: 838

    7,Doly M, Droy-Lefaix M T,Millerin M N et al.Oxygenated free radicals and electrophysiology ofisolated rat retina: protection by a ginkgo bi loba extract.Abstract. Free Radic Biol Med, 1990,9(suppl 1):12

    8,Bui M N,Sack M N,Moutsatsos G et al.Autoantibody titers to oxida ted low density lipoprotein in patientswith coronary atherosclerosis. Am Heart J,1996,131(4):663

    (1997-08-10,收稿), http://www.100md.com