口服单剂量5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊的人体相对生物利用度研究
作者：代宗顺 侯淑贤 邵春丽 吴立
单位：同济医科大学临床药理学研究所，武汉 430030
关键词：5-单硝基异山梨醇酯；缓释胶囊；生物利用度；药代动力学
同济医科大学学报000122 摘要 选健康志愿者12名，随机交叉单次口服法国产的5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊(b)和国产的5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊(a)，分别于服药后按规定时间取静脉血，用气相色谱法测定血浆中5-单硝基异山梨醇酯浓度。结果：两种制剂的Cmax分别为(591.9±142.4)和(557.7±173.4) μg.L-1;Tmax为(5.82±0.91)和(6.84±0.64) h; AUC为(7328± 1828)和(7710±2570)μg.L-1.h-1；由此求得国产5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊的相对生物利用度为(104.19±14.37)%。经等效性分析，两种制剂具有生物等效性。
, 百拇医药
中图法分类号 R972， R944.4， R969
Relative Bioavailability of IS-5-MN S ustained-ReleaseCapsules after
Administration of Single Oral Dose to Healthy Volunteers
Dai Zongshun
(Institute of Clinical Pharmacology, Tongji Medical University, Wuhan 430030 )
Hou Shuxian
(Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Tongji Medica l University, Wuhan 430030)
, http://www.100md.com
Shao Chunli
(Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Tongji Medica l University, Wuhan 430030)
Abstract Twelve healthy volunteers were selected and randomlyadministered IS-5-MN sustained-release capsules (SRC) A (Wuhan Spring Pharmaceutical Co., China) and SRC B(Ethypharm Pharmaceutical Co., France) at the oral dose by cross-over met h od. After administration, the venous bloodwas taken out at the planned time poi nts. The plasma IS-5-MN concentrations (Cmax) of two kinds of SRCwe re determined by using gas chromatography. It was found that the Cmax of SRC A and SRC B were(591.9±142.4) μg.L-1 and (557.7±173.4) μ g.L-1, respectively; the time periodsreaching maximal plasma concentrat ion (Tmax) of SRC A and B were (5.82±0.91) h and(6.84±0.64) h, respectively; and the areas under plasma concent ration-time curves (AUC) of SRC A and SRC Bwere (7328±1828) μg.L-1.h-1 and (7710±2570)μg.L-1.h-1,respectively. In conclus ion, the relative bioavailability of 5-MN SRC A was (104.19±14.37) %. Throug h theequivalent analysis, the SRC A and SRC B are bioequivalent.
, 百拇医药
Keywords isosorbide-5-monoitrate; sustained-releasecapsules; bioavailability； pharmacokinetics
5-单硝基异山梨醇酯(isosorbide-5-monoitrate,IS-5-MN)具有明显的抗心肌缺血作用，临床疗效优于消心痛，目前被广泛用于冠心病的长期治疗。但是该药对湿热不稳定，普通片剂的质量不高，为了提高药物质量，延长药物作用时间，减少服药次数，降低副作用，国内外均开展了其缓释胶囊制剂的研究。本文采用气相色谱法测定国产的IS-5-MN缓释胶囊口服后的血浆浓度的经时变化，并与进口同类产品在相同条件下比较，进行该产品相对生 物利用度研究。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂
试验药品：5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊，武汉春天药业有限公司生产，每粒60 mg,批号：970205。参比药品：5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊，法国进口产品，每粒60 mg，批号：96101A，以上两种制剂均由武汉春天药业有限公司提供。试剂：乙酸乙酯为分析纯。
, 百拇医药
1.2 研究对象与给药方法
12名健康男性志愿者，年龄20～22岁，体重60～70 kg，经体检健康合格，理解本试验的目的和性质，愿意按规定服药及采血，并签署知情同意书。根据随机化原则确定服药顺序，分别口服国产和法国产缓释胶囊60 mg，两次服药间隔时间为1周。200 ml温开水送服。服药后3h统一食谱进餐。试验期间由主治医生在备有必要的抢救药品及设备的条件下监护。
1.3 样品采集与处理
1.3.1 样品采集：于服药前(0h)及服药后1、2、3、4、6、8、12、14、16、24和36h取静脉血5ml,3000r/min离心10min，取血浆，保存于-20℃备测。
1.3.2 样品处理：取血浆样品0.3 ml ,置于10 ml磨口试管中，加0.1 mol.L-1 磷酸缓冲液 (pH7.0) 0.1 ml、乙酸乙酯3 ml，旋涡混匀2 min，3600 r/min离心10 min，取上层有机相2.4 ml，于另一试管中，置于 (50±1) ℃的水浴中氮气吹干，残渣以100μl乙酸乙酯溶解，取2 μl 进入色谱仪测定。
, 百拇医药
1.4 血药浓度测定
1.4.1仪器与色谱条件：GC-7AG岛津气相色谱仪，63Ni-电子捕获检测器，C-R3X数据处理机色谱柱：SE-52毛细管色谱柱(30 m×0.22 mm)，柱温：145 ℃，汽化 室温度：240℃，检测器温度：240 ℃，载气：N2(99.99%)；流速：22 ml/min；尾吹 ：65ml.min-1；基流：0.5 μA。标准品与杂质色谱峰分离良好，见图1。
图1 色谱图
(A) 空白血浆； (B) 5-单硝基异山梨醇缓释胶囊血浆样品
1.4.2 标准曲线的制备：在空白血浆中加入5-单硝基异山梨醇酯标准品，配制成10～100 0μg.L-1的标准血浆样品，按血浆样品处理方法提取并分析，结果表明，10～1000μg.L-1浓度范围内，5-MN线性关系良好，得回归方程H=4.36C-1.57,相关系数r=0.9995。C为5-MN的浓度(μg.L-1),H为峰高(mm)。按信噪比(S/N)=2条件下，最小检测浓度： 5μg.L-1。
, 百拇医药
1.4.3 精密度和回收率试验：①精密度：低、中、高(10、500、1100μg.L-1 )3个标准血浆样品浓度，每d测定3次，计算日内相对标准偏差，分别为6.4%、5.1%、3.6%，其
±s为 (5.03±1.40)%，隔天测1次，共测3次，计算日间标准偏差，分别为7.4%、4.7%、6.2%，其±s为 (6.10±1.35)%；②回收率：在低、中、高(10、500、1100 μg.L-1)3个标准血浆样品浓度，按测定方法项下步骤测定，与标准液直接进样，所取得结果进行比较，计算回收率，分别为(78.0±6.4)%、(84.0±5.1)%、(85.0±3.6)%。
1.5 数据处理
, 百拇医药
口服国产和法国产5-MN缓释胶囊的血药浓度经北京计算中心编制的缓释制剂药代动力学计 算程序CRF1处理，求得药代动力学主要参数。药时曲线下面积AUC0-48采用梯形法计算，AUC0-∞为梯形法计算加上矫正值。Tmax或Cmax采用实测 值。
2 结果
2.1 血药浓度
正常人分别单剂量口服国产和法国产的缓释胶囊后，血浆药物浓度-时间曲线见图2。
图2 口服60 mg5-单硝基异山梨醇缓释胶囊血浆浓度-时间曲 线(n=12)
2.2 药代动力学参数
, 百拇医药
国产和进口缓释胶囊的血药浓度经北京计算中心编制的缓释制剂药代动力学计算程序CRF1处理后，求得药代动力学主要参数见表1。
表1 12名志愿者口服60 mg5-单硝基异山梨醇酯 缓释胶囊的药动学参数(n=12，±s) 参数
试 验 品
参 比品
Km (h-1)
0.49±0.13
0.79±0.29
Ke(h-1)
, 百拇医药
0.15±0.04
0.14±0.03
TL(h)
0.55±0.48
0.94±0.58
T1/2(Ke) (h)
4.85±1.18
5.24±1.22
Tmax(h)
6.84±0.64
5.82±0.91
, http://www.100md.com
Cmax(μg.L-1)
557.7±173.4
591.9±142.4
AUC(μg.L-1.h-1)
7 710±2 570
7328±1 828
2.3 相对生物利用度
国产缓释胶囊的人体相对生物利用度按下式计算，F(%)=(国产AUC/法国产AUC)×100 %。结果其生物利用度为(104.19±14.37)%。
, 百拇医药
根据对国产和进口胶囊的AUC、Tmax和Cmax值进行方差分析，结果表明两种制剂均无显著性差异(均为P>0.05),AUC值经等效值法双向单测T检验，提示两种胶囊具生物等效性。
3 讨论
本文应用GC法测定国产与进口5-MN缓释胶囊口服后的血药浓度，两种缓释胶囊的达峰时间、达峰浓度、药时曲线下面积均无显著性差异，(均为P>0.05)，说明两种缓释胶囊特性一致，在体内血药浓度平稳，持续时间长，达到了良好的缓释结果，且能够降低或消除药物的不良反应，表明两种胶囊具有生物等效性。CRF1计算程序由北京计算机中心编制，为缓释制剂药代动力学计算专用程序。该程序采用非房室模型进行求算有关药代动力学参数 。
代宗顺，男，1943年生，教授
参 考 文 献
1，中华人民共和国卫生部药政局编.新药(西药)临床研究指导原则汇编，药物 制剂人体生物利用度指导原则.北京：中华人民共和国卫生部药政局， 1992. 163
2，越奕，周莹，袁虹等.5-单硝基异山梨醇片在正常人体的药代动力学 和生物利用度研究.中国临床药理学杂志， 1995， 11(1)：33
3，夏桂珠，傅贻柯，董善年等.毛细散气相色谱-电子捕获法测定人血清中5-单硝酸异山梨醇酯的浓度和药代动力学参数. 药学学报， 1994， 29(8)：634
(1999-03-15 收稿), 百拇医药
单位：同济医科大学临床药理学研究所，武汉 430030
关键词：5-单硝基异山梨醇酯；缓释胶囊；生物利用度；药代动力学
同济医科大学学报000122 摘要 选健康志愿者12名，随机交叉单次口服法国产的5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊(b)和国产的5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊(a)，分别于服药后按规定时间取静脉血，用气相色谱法测定血浆中5-单硝基异山梨醇酯浓度。结果：两种制剂的Cmax分别为(591.9±142.4)和(557.7±173.4) μg.L-1;Tmax为(5.82±0.91)和(6.84±0.64) h; AUC为(7328± 1828)和(7710±2570)μg.L-1.h-1；由此求得国产5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊的相对生物利用度为(104.19±14.37)%。经等效性分析，两种制剂具有生物等效性。
, 百拇医药
中图法分类号 R972， R944.4， R969
Relative Bioavailability of IS-5-MN S ustained-ReleaseCapsules after
Administration of Single Oral Dose to Healthy Volunteers
Dai Zongshun
(Institute of Clinical Pharmacology, Tongji Medical University, Wuhan 430030 )
Hou Shuxian
(Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Tongji Medica l University, Wuhan 430030)
, http://www.100md.com
Shao Chunli
(Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Tongji Medica l University, Wuhan 430030)
Abstract Twelve healthy volunteers were selected and randomlyadministered IS-5-MN sustained-release capsules (SRC) A (Wuhan Spring Pharmaceutical Co., China) and SRC B(Ethypharm Pharmaceutical Co., France) at the oral dose by cross-over met h od. After administration, the venous bloodwas taken out at the planned time poi nts. The plasma IS-5-MN concentrations (Cmax) of two kinds of SRCwe re determined by using gas chromatography. It was found that the Cmax of SRC A and SRC B were(591.9±142.4) μg.L-1 and (557.7±173.4) μ g.L-1, respectively; the time periodsreaching maximal plasma concentrat ion (Tmax) of SRC A and B were (5.82±0.91) h and(6.84±0.64) h, respectively; and the areas under plasma concent ration-time curves (AUC) of SRC A and SRC Bwere (7328±1828) μg.L-1.h-1 and (7710±2570)μg.L-1.h-1,respectively. In conclus ion, the relative bioavailability of 5-MN SRC A was (104.19±14.37) %. Throug h theequivalent analysis, the SRC A and SRC B are bioequivalent.
, 百拇医药
Keywords isosorbide-5-monoitrate; sustained-releasecapsules; bioavailability； pharmacokinetics
5-单硝基异山梨醇酯(isosorbide-5-monoitrate,IS-5-MN)具有明显的抗心肌缺血作用，临床疗效优于消心痛，目前被广泛用于冠心病的长期治疗。但是该药对湿热不稳定，普通片剂的质量不高，为了提高药物质量，延长药物作用时间，减少服药次数，降低副作用，国内外均开展了其缓释胶囊制剂的研究。本文采用气相色谱法测定国产的IS-5-MN缓释胶囊口服后的血浆浓度的经时变化，并与进口同类产品在相同条件下比较，进行该产品相对生 物利用度研究。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂
试验药品：5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊，武汉春天药业有限公司生产，每粒60 mg,批号：970205。参比药品：5-单硝基异山梨醇酯缓释胶囊，法国进口产品，每粒60 mg，批号：96101A，以上两种制剂均由武汉春天药业有限公司提供。试剂：乙酸乙酯为分析纯。
, 百拇医药
1.2 研究对象与给药方法
12名健康男性志愿者，年龄20～22岁，体重60～70 kg，经体检健康合格，理解本试验的目的和性质，愿意按规定服药及采血，并签署知情同意书。根据随机化原则确定服药顺序，分别口服国产和法国产缓释胶囊60 mg，两次服药间隔时间为1周。200 ml温开水送服。服药后3h统一食谱进餐。试验期间由主治医生在备有必要的抢救药品及设备的条件下监护。
1.3 样品采集与处理
1.3.1 样品采集：于服药前(0h)及服药后1、2、3、4、6、8、12、14、16、24和36h取静脉血5ml,3000r/min离心10min，取血浆，保存于-20℃备测。
1.3.2 样品处理：取血浆样品0.3 ml ,置于10 ml磨口试管中，加0.1 mol.L-1 磷酸缓冲液 (pH7.0) 0.1 ml、乙酸乙酯3 ml，旋涡混匀2 min，3600 r/min离心10 min，取上层有机相2.4 ml，于另一试管中，置于 (50±1) ℃的水浴中氮气吹干，残渣以100μl乙酸乙酯溶解，取2 μl 进入色谱仪测定。
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1.4 血药浓度测定
1.4.1仪器与色谱条件：GC-7AG岛津气相色谱仪，63Ni-电子捕获检测器，C-R3X数据处理机色谱柱：SE-52毛细管色谱柱(30 m×0.22 mm)，柱温：145 ℃，汽化 室温度：240℃，检测器温度：240 ℃，载气：N2(99.99%)；流速：22 ml/min；尾吹 ：65ml.min-1；基流：0.5 μA。标准品与杂质色谱峰分离良好，见图1。
图1 色谱图
(A) 空白血浆； (B) 5-单硝基异山梨醇缓释胶囊血浆样品
1.4.2 标准曲线的制备：在空白血浆中加入5-单硝基异山梨醇酯标准品，配制成10～100 0μg.L-1的标准血浆样品，按血浆样品处理方法提取并分析，结果表明，10～1000μg.L-1浓度范围内，5-MN线性关系良好，得回归方程H=4.36C-1.57,相关系数r=0.9995。C为5-MN的浓度(μg.L-1),H为峰高(mm)。按信噪比(S/N)=2条件下，最小检测浓度： 5μg.L-1。
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1.4.3 精密度和回收率试验：①精密度：低、中、高(10、500、1100μg.L-1 )3个标准血浆样品浓度，每d测定3次，计算日内相对标准偏差，分别为6.4%、5.1%、3.6%，其
±s为 (5.03±1.40)%，隔天测1次，共测3次，计算日间标准偏差，分别为7.4%、4.7%、6.2%，其±s为 (6.10±1.35)%；②回收率：在低、中、高(10、500、1100 μg.L-1)3个标准血浆样品浓度，按测定方法项下步骤测定，与标准液直接进样，所取得结果进行比较，计算回收率，分别为(78.0±6.4)%、(84.0±5.1)%、(85.0±3.6)%。1.5 数据处理
, 百拇医药
口服国产和法国产5-MN缓释胶囊的血药浓度经北京计算中心编制的缓释制剂药代动力学计 算程序CRF1处理，求得药代动力学主要参数。药时曲线下面积AUC0-48采用梯形法计算，AUC0-∞为梯形法计算加上矫正值。Tmax或Cmax采用实测 值。
2 结果
2.1 血药浓度
正常人分别单剂量口服国产和法国产的缓释胶囊后，血浆药物浓度-时间曲线见图2。
图2 口服60 mg5-单硝基异山梨醇缓释胶囊血浆浓度-时间曲 线(n=12)
2.2 药代动力学参数
, 百拇医药
国产和进口缓释胶囊的血药浓度经北京计算中心编制的缓释制剂药代动力学计算程序CRF1处理后，求得药代动力学主要参数见表1。
表1 12名志愿者口服60 mg5-单硝基异山梨醇酯 缓释胶囊的药动学参数(n=12，
±s) 参数试 验 品
参 比品
Km (h-1)
0.49±0.13
0.79±0.29
Ke(h-1)
, 百拇医药
0.15±0.04
0.14±0.03
TL(h)
0.55±0.48
0.94±0.58
T1/2(Ke) (h)
4.85±1.18
5.24±1.22
Tmax(h)
6.84±0.64
5.82±0.91
, http://www.100md.com
Cmax(μg.L-1)
557.7±173.4
591.9±142.4
AUC(μg.L-1.h-1)
7 710±2 570
7328±1 828
2.3 相对生物利用度
国产缓释胶囊的人体相对生物利用度按下式计算，F(%)=(国产AUC/法国产AUC)×100 %。结果其生物利用度为(104.19±14.37)%。
, 百拇医药
根据对国产和进口胶囊的AUC、Tmax和Cmax值进行方差分析，结果表明两种制剂均无显著性差异(均为P>0.05),AUC值经等效值法双向单测T检验，提示两种胶囊具生物等效性。
3 讨论
本文应用GC法测定国产与进口5-MN缓释胶囊口服后的血药浓度，两种缓释胶囊的达峰时间、达峰浓度、药时曲线下面积均无显著性差异，(均为P>0.05)，说明两种缓释胶囊特性一致，在体内血药浓度平稳，持续时间长，达到了良好的缓释结果，且能够降低或消除药物的不良反应，表明两种胶囊具有生物等效性。CRF1计算程序由北京计算机中心编制，为缓释制剂药代动力学计算专用程序。该程序采用非房室模型进行求算有关药代动力学参数 。
代宗顺，男，1943年生，教授
参 考 文 献
1，中华人民共和国卫生部药政局编.新药(西药)临床研究指导原则汇编，药物 制剂人体生物利用度指导原则.北京：中华人民共和国卫生部药政局， 1992. 163
2，越奕，周莹，袁虹等.5-单硝基异山梨醇片在正常人体的药代动力学 和生物利用度研究.中国临床药理学杂志， 1995， 11(1)：33
3，夏桂珠，傅贻柯，董善年等.毛细散气相色谱-电子捕获法测定人血清中5-单硝酸异山梨醇酯的浓度和药代动力学参数. 药学学报， 1994， 29(8)：634
(1999-03-15 收稿), 百拇医药