HPLC法测定万辉化痰止咳露中磷酸可待因、盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏的含量
作者：南楠 陈华 朱霁虹
单位：南楠 陈华 朱霁虹(中国药品生物制品检定所 北京 100050)
关键词：高效液相色谱法；磷酸可待因；盐酸麻黄碱；马来酸氯苯那敏
药物分析杂志000102 摘 要：目的：建立一种采用高效液相色谱分离检测多组分复方制剂中磷酸可待因、盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏含量的方法。方法：以ODS为固定相，0.05 mol.-1磷酸二氢钾(含1%三乙胺，用磷酸调pH=3)-0.005 mol.L-1 IPR-B6甲醇溶液(1.2∶1)为流动相，UV检测波长为254 nm。结果：磷酸可待因、盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏3种成分的回收率分别为101.6%，99.6%，101.7%；RSD分别为1.1%，1.2%，1.9%(n=5)。结论：方法简便，结果准确可靠。
, http://www.100md.com
HPLC Determination of Codeine Phosphate,Ephedrine Hydrochloride and Chlorpheniramine Maleate in Coci-Fedra-C-Syrup
Nan Nan Chen Hua Zhu Jihong
(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products,Beijing 100050)
Abstract：Objective：A method of HPLC determination for Coci-Fedra-C-Syrup complex preparation of codeine phosphate,ephedrine hydrochloride and chlorpheniramine maleate has been described.Method:In the method,ODS as the stationary phase,0.05 mol.L-1 KH2PO4 (containing 1% triethylamine and pH ethyl adjusted to 3 with phosphate acid)-0.005 mol.L-1 IRP-B6(1.2∶1) as the mobile phase were adopted.The wavelength of detection was 254 nm.Results:The method recoveries of codeine phosphate,ephedrine hydrochloride and chlorpheniramine maleate were 101.6%,99.6% and 101.7% respectively.RSD were 1.1%,1.2%,1.9%(n＝5).Conclusion:The method for three active ingredient determinations in Coci-Fedra-C Syrup is simple,rapid and reliable.
, 百拇医药
Key words：HPLC,codeine phosphate,ephedrine hydrochloride,chlorpheniramine maleate▲
万辉化痰止咳露是进口复方制剂，具有镇咳祛痰及抗过敏之功效。其中主要成分为磷酸可待因、盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏，另外还有少量远志、海葱等中药流浸膏，以及适量的辅料，成分较为复杂，因此在检测中相互干扰和影响。采用高效液相色谱法[1，2]，对于多种组分复方制剂的检测，能够收到较好的效果。本文在液-液提取处理基础上采用反相高效液相色谱法，对3种主药成分同时进行分离与检测，该方法简便、快速、准确、可靠，对于科学地、准确地控制和管理麻醉及精神药品起到了很好的作用。
1 仪器与主要试剂
HP-1050液相色谱仪；HP-3396积分仪。
磷酸可待因对照品(纯度为99.8%)、盐酸麻黄碱对照品(纯度为99.8%)、马来酸氯苯那敏对照品(纯度为100.0%)均由中国药品生物制品检定所提供。
, http://www.100md.com
离子对试剂：IPR-B6由天津市化学试剂二厂生产；氯仿、正己烷、氢氧化钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸、甲醇均为分析纯试剂。
万辉化痰止咳露样品由香港万辉药业公司提供。批号：HW2351、HW2361、HW2371；规格：每5 mL样品中含磷酸可待因4.0 mg、盐酸麻黄碱5.0 mg、马来酸氯苯那敏2.5 mg。
2 色谱条件
色谱柱：μ-Bondapak ODS 5 μm 150 mm×4 mm;UV检测波长为254 nm。
流动相：0.05 mol.L-1磷酸二氢钾(含1%三乙胺，磷酸调pH=3)-0.005 mol.L-1 IPR-B6甲醇溶液(1.2∶1)；流速为1 mL.min-1。
, 百拇医药
3 测定方法
3.1 混合对照品溶液的配制 准确称取经105 ℃干燥至恒重的磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏对照品分别约为20，25，12.5 mg，置10 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.2 供试品溶液配制 精密量取止咳露样品5.0 mL于分液漏斗中，用2%氢氧化钠试液调至强碱性(约pH 11)，用氯仿提取3次，每次20 mL，再用正己烷20 mL提取1次，合并有机相。加入氯化钠饱和溶液10 mL洗1次，水相用氯仿回提2次，每次10 mL，将有机相通过无水硫酸钠，过滤，滤液加入2%盐酸甲醇溶液5 mL，在40 ℃减压蒸干，加入流动相2.0 mL溶解，并经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试品溶液。
3.3 测定 分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各5 μL，依次注入高效液相色谱仪，记录色谱图(见图1-A、B)。根据混合对照品溶液中可待因、麻黄碱、氯苯那敏的峰面积，计算出供试品溶液中3种组分的含量。由于供试品溶液的制备是在碱性条件下，用有机溶媒提取3种主药成分的游离碱，马来酸在水相中被弃去，所以供试品溶液的液相色谱图中无马来酸色谱峰；而混合对照品溶液是采用马来酸氯苯那敏对照品配制的，在水溶液中2者呈解离状态存在，故在对照品溶液的色谱图中出现有马来酸峰。因此在马来酸氯苯那敏的含量测定时是以氯苯那敏峰面积来计算的。
, 百拇医药
图1 混合对照品溶液(A)、供试品溶液(B)液相色谱图
1.马来酸 2.可待因 3.麻黄碱 4.氯苯那敏
4 结果与讨论
4.1系统适应性试验 在本实验液相色谱系统下，取含量测定用混合对照品溶液5 μL进样，记录液相色谱图(见图1-A)。可见3种被测组分能够较好地分离。该方法的系统适应性结果见表1。
表1 系统适应性实验结果 名称
保留时间/min
理论塔板数
相邻两峰之间分离度
马来酸
, http://www.100md.com
1.51
1260
2.24
可待因
2.36
2140
2.55
麻黄碱
3.43
2550
12.43
4.2 方法回收率 按处方比例，取3种主药成分及各种辅料配制成样品后，测定3种组分的回收率。磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏的平均回收率分别为101.6%，99.6%，101.7%；RSD分别为1.1%，1.2%，1.9%，n=5。结果表明，3种组分的回收率均较好，RSD较小，说明该分析方法是准确可靠的。
, http://www.100md.com
4.3 线性范围 根据处方的比例，将3种主药成分配制成一系列不同浓度的混合对照品溶液，依次进行液相色谱分析，以浓度C(mg.mL-1)为纵坐标，以峰面积A为横坐标，得到磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏的线性回归方程分别为：
C=3.09×10-7A-0.04 r=0.999 6
C=5.18×10-6A-0.08 r=0.999 9
C=7.16×10-8A+0.02 r=0.999 9
线性范围分别为：0.3～8.1，0.4～10.3，0.2～5.2 mg.mL-1。
4.4 配制溶液的稳定性实验 在本实验条件下，配制溶液具有较好的稳定性，同一溶液连续3 d内分别进样(n＝12)。可待因峰面积日内RSD为0.24%～0.74%，日间RSD小于1.0%；麻黄碱峰面积日内RSD为1.6%～2.5%，日间RSD小于4.2%；氯苯那敏峰面积日内RSD为0.44%～1.3%，日间RSD小于1.7%。
, http://www.100md.com
4.5 空白辅料干扰实验 按处方比例配制除去3种主药以外的空白溶液，用与含量测定项下相同的方法提取处理样品，得到一空白供试品溶液。在本实验液相色谱条件下进样，得到该空白供试液色谱图基本为一条无明显色谱峰的直线，说明经有机溶媒提取后，可除去其它组分的干扰。
4.6 检测波长的确定 根据处方中3种主药成分的比例配制的溶液在紫外区域内的吸收光谱图见图2。从图中可以看出磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏的最大吸收波长分别为285，257，263 nm。它们的吸收值相差较大，其中盐酸麻黄碱的紫外吸收响应值最低，因此首先考虑选择检测波长在257 nm，参考有关文献中磷酸可待因的检测波长使用254 nm[3,4]，我们对2个波长下3种组分的色谱图进行了比较，结果发现检测波长从257 nm改为254 nm，麻黄碱的峰面积相差不大，几乎不变；而可待因的峰面积却有很大提高。为使3种主药成分都能有较高的吸收值，满足紫外检测灵敏度的要求，在综合各方面因素后将检测波长确定为254 nm，在此波长下检测，3种主药成分的响应值较大，重现性较好。可待因、麻黄碱、氯苯那敏峰面积的平均值分别为：5 497 459，420 950，14 676 919；RSD分别为：0.8%，2.0%，1.1%；n＝6。
, http://www.100md.com
图2 3种主药成分的紫外吸收光谱图
1.盐酸麻黄碱 2.马来酸氯苯那敏 3.磷酸可待因
4.7 关于样品的处理 由于该制剂成分复杂，经预先处理可减少干扰，利于分离，保护液相色谱柱。样品的处理是在碱性条件下使3种主药成分转化成游离碱后，用氯仿提取，从而与辅料成分分离，达到纯化的目的。其中马来酸氯苯那敏能溶于氯仿，但其游离碱(氯苯那敏)更易溶于极性小的溶剂。为了确保提取完全，在用氯仿提取后再用正己烷提取1次，否则将使测定结果偏低，其回收率低于90%。此外，还应注意防止麻黄碱的损失。因为游离的麻黄碱有一定的挥发性[5]，温度较高时可挥发导致结果偏低。如在减压蒸干前加入少量盐酸甲醇溶液，使其成盐，并保持温度在40 ℃以下，则使麻黄碱的回收率提高并接近100%。
4.8 测定结果 用所建立的方法检验厂家提供的3批样品，结果见表2。结果表明，该分析方法的精密度、准确度都比较好，并且操作较简便、快捷，一次进样即可得到3种组分的含量测定结果，便于在实际生产、检验中应用。
, http://www.100md.com
表2 万辉化痰止咳露含量测定结果(%，n＝3) 样品批号
磷酸可待因
盐酸麻黄碱
马来酸氯苯那敏
HW2351
99.5(0.9)
101.7(1.0)
103.2(0.8)
HW2361
100.8(1.0)
100.8(1.2)
, 百拇医药 104.2(1.1)
HW2371
95.9(0.7)
99.9(0.9)
101.2(0.8)
注：括号内为RSD(%)■
参考文献：
[1]李小燕，陈合山.HPLC法同时测定呋麻滴鼻液中二组分含量.药物分析杂志，1996，16(1)：37
[2]方璐锡，刘颖.感冒通片中双氯灭痛和扑尔敏的高效液相含量测定法.药物分析杂志，1992.12(6)：355
[3]南楠，杨信群，朱霁虹.磷酸可待因与布洛芬的分离与检测.中国药物依赖性通报，1998，7(1)：36
[4]卫生部药品标准(试行).WS-117(X-102)-97
[5]Wade A.Martindale Extra Pharmacopoeia.28th.London England:Pharmaceutical Press,10
收稿日期：1999-06-07, 百拇医药
单位：南楠 陈华 朱霁虹(中国药品生物制品检定所 北京 100050)
关键词：高效液相色谱法；磷酸可待因；盐酸麻黄碱；马来酸氯苯那敏
药物分析杂志000102 摘 要：目的：建立一种采用高效液相色谱分离检测多组分复方制剂中磷酸可待因、盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏含量的方法。方法：以ODS为固定相，0.05 mol.-1磷酸二氢钾(含1%三乙胺，用磷酸调pH=3)-0.005 mol.L-1 IPR-B6甲醇溶液(1.2∶1)为流动相，UV检测波长为254 nm。结果：磷酸可待因、盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏3种成分的回收率分别为101.6%，99.6%，101.7%；RSD分别为1.1%，1.2%，1.9%(n=5)。结论：方法简便，结果准确可靠。
, http://www.100md.com
HPLC Determination of Codeine Phosphate,Ephedrine Hydrochloride and Chlorpheniramine Maleate in Coci-Fedra-C-Syrup
Nan Nan Chen Hua Zhu Jihong
(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products,Beijing 100050)
Abstract：Objective：A method of HPLC determination for Coci-Fedra-C-Syrup complex preparation of codeine phosphate,ephedrine hydrochloride and chlorpheniramine maleate has been described.Method:In the method,ODS as the stationary phase,0.05 mol.L-1 KH2PO4 (containing 1% triethylamine and pH ethyl adjusted to 3 with phosphate acid)-0.005 mol.L-1 IRP-B6(1.2∶1) as the mobile phase were adopted.The wavelength of detection was 254 nm.Results:The method recoveries of codeine phosphate,ephedrine hydrochloride and chlorpheniramine maleate were 101.6%,99.6% and 101.7% respectively.RSD were 1.1%,1.2%,1.9%(n＝5).Conclusion:The method for three active ingredient determinations in Coci-Fedra-C Syrup is simple,rapid and reliable.
, 百拇医药
Key words：HPLC,codeine phosphate,ephedrine hydrochloride,chlorpheniramine maleate▲
万辉化痰止咳露是进口复方制剂，具有镇咳祛痰及抗过敏之功效。其中主要成分为磷酸可待因、盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏，另外还有少量远志、海葱等中药流浸膏，以及适量的辅料，成分较为复杂，因此在检测中相互干扰和影响。采用高效液相色谱法[1，2]，对于多种组分复方制剂的检测，能够收到较好的效果。本文在液-液提取处理基础上采用反相高效液相色谱法，对3种主药成分同时进行分离与检测，该方法简便、快速、准确、可靠，对于科学地、准确地控制和管理麻醉及精神药品起到了很好的作用。
1 仪器与主要试剂
HP-1050液相色谱仪；HP-3396积分仪。
磷酸可待因对照品(纯度为99.8%)、盐酸麻黄碱对照品(纯度为99.8%)、马来酸氯苯那敏对照品(纯度为100.0%)均由中国药品生物制品检定所提供。
, http://www.100md.com
离子对试剂：IPR-B6由天津市化学试剂二厂生产；氯仿、正己烷、氢氧化钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸、甲醇均为分析纯试剂。
万辉化痰止咳露样品由香港万辉药业公司提供。批号：HW2351、HW2361、HW2371；规格：每5 mL样品中含磷酸可待因4.0 mg、盐酸麻黄碱5.0 mg、马来酸氯苯那敏2.5 mg。
2 色谱条件
色谱柱：μ-Bondapak ODS 5 μm 150 mm×4 mm;UV检测波长为254 nm。
流动相：0.05 mol.L-1磷酸二氢钾(含1%三乙胺，磷酸调pH=3)-0.005 mol.L-1 IPR-B6甲醇溶液(1.2∶1)；流速为1 mL.min-1。
, 百拇医药
3 测定方法
3.1 混合对照品溶液的配制 准确称取经105 ℃干燥至恒重的磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏对照品分别约为20，25，12.5 mg，置10 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.2 供试品溶液配制 精密量取止咳露样品5.0 mL于分液漏斗中，用2%氢氧化钠试液调至强碱性(约pH 11)，用氯仿提取3次，每次20 mL，再用正己烷20 mL提取1次，合并有机相。加入氯化钠饱和溶液10 mL洗1次，水相用氯仿回提2次，每次10 mL，将有机相通过无水硫酸钠，过滤，滤液加入2%盐酸甲醇溶液5 mL，在40 ℃减压蒸干，加入流动相2.0 mL溶解，并经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试品溶液。
3.3 测定 分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各5 μL，依次注入高效液相色谱仪，记录色谱图(见图1-A、B)。根据混合对照品溶液中可待因、麻黄碱、氯苯那敏的峰面积，计算出供试品溶液中3种组分的含量。由于供试品溶液的制备是在碱性条件下，用有机溶媒提取3种主药成分的游离碱，马来酸在水相中被弃去，所以供试品溶液的液相色谱图中无马来酸色谱峰；而混合对照品溶液是采用马来酸氯苯那敏对照品配制的，在水溶液中2者呈解离状态存在，故在对照品溶液的色谱图中出现有马来酸峰。因此在马来酸氯苯那敏的含量测定时是以氯苯那敏峰面积来计算的。
, 百拇医药
图1 混合对照品溶液(A)、供试品溶液(B)液相色谱图
1.马来酸 2.可待因 3.麻黄碱 4.氯苯那敏
4 结果与讨论
4.1系统适应性试验 在本实验液相色谱系统下，取含量测定用混合对照品溶液5 μL进样，记录液相色谱图(见图1-A)。可见3种被测组分能够较好地分离。该方法的系统适应性结果见表1。
表1 系统适应性实验结果 名称
保留时间/min
理论塔板数
相邻两峰之间分离度
马来酸
, http://www.100md.com
1.51
1260
2.24
可待因
2.36
2140
2.55
麻黄碱
3.43
2550
12.43
4.2 方法回收率 按处方比例，取3种主药成分及各种辅料配制成样品后，测定3种组分的回收率。磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏的平均回收率分别为101.6%，99.6%，101.7%；RSD分别为1.1%，1.2%，1.9%，n=5。结果表明，3种组分的回收率均较好，RSD较小，说明该分析方法是准确可靠的。
, http://www.100md.com
4.3 线性范围 根据处方的比例，将3种主药成分配制成一系列不同浓度的混合对照品溶液，依次进行液相色谱分析，以浓度C(mg.mL-1)为纵坐标，以峰面积A为横坐标，得到磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏的线性回归方程分别为：
C=3.09×10-7A-0.04 r=0.999 6
C=5.18×10-6A-0.08 r=0.999 9
C=7.16×10-8A+0.02 r=0.999 9
线性范围分别为：0.3～8.1，0.4～10.3，0.2～5.2 mg.mL-1。
4.4 配制溶液的稳定性实验 在本实验条件下，配制溶液具有较好的稳定性，同一溶液连续3 d内分别进样(n＝12)。可待因峰面积日内RSD为0.24%～0.74%，日间RSD小于1.0%；麻黄碱峰面积日内RSD为1.6%～2.5%，日间RSD小于4.2%；氯苯那敏峰面积日内RSD为0.44%～1.3%，日间RSD小于1.7%。
, http://www.100md.com
4.5 空白辅料干扰实验 按处方比例配制除去3种主药以外的空白溶液，用与含量测定项下相同的方法提取处理样品，得到一空白供试品溶液。在本实验液相色谱条件下进样，得到该空白供试液色谱图基本为一条无明显色谱峰的直线，说明经有机溶媒提取后，可除去其它组分的干扰。
4.6 检测波长的确定 根据处方中3种主药成分的比例配制的溶液在紫外区域内的吸收光谱图见图2。从图中可以看出磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏的最大吸收波长分别为285，257，263 nm。它们的吸收值相差较大，其中盐酸麻黄碱的紫外吸收响应值最低，因此首先考虑选择检测波长在257 nm，参考有关文献中磷酸可待因的检测波长使用254 nm[3,4]，我们对2个波长下3种组分的色谱图进行了比较，结果发现检测波长从257 nm改为254 nm，麻黄碱的峰面积相差不大，几乎不变；而可待因的峰面积却有很大提高。为使3种主药成分都能有较高的吸收值，满足紫外检测灵敏度的要求，在综合各方面因素后将检测波长确定为254 nm，在此波长下检测，3种主药成分的响应值较大，重现性较好。可待因、麻黄碱、氯苯那敏峰面积的平均值分别为：5 497 459，420 950，14 676 919；RSD分别为：0.8%，2.0%，1.1%；n＝6。
, http://www.100md.com
图2 3种主药成分的紫外吸收光谱图
1.盐酸麻黄碱 2.马来酸氯苯那敏 3.磷酸可待因
4.7 关于样品的处理 由于该制剂成分复杂，经预先处理可减少干扰，利于分离，保护液相色谱柱。样品的处理是在碱性条件下使3种主药成分转化成游离碱后，用氯仿提取，从而与辅料成分分离，达到纯化的目的。其中马来酸氯苯那敏能溶于氯仿，但其游离碱(氯苯那敏)更易溶于极性小的溶剂。为了确保提取完全，在用氯仿提取后再用正己烷提取1次，否则将使测定结果偏低，其回收率低于90%。此外，还应注意防止麻黄碱的损失。因为游离的麻黄碱有一定的挥发性[5]，温度较高时可挥发导致结果偏低。如在减压蒸干前加入少量盐酸甲醇溶液，使其成盐，并保持温度在40 ℃以下，则使麻黄碱的回收率提高并接近100%。
4.8 测定结果 用所建立的方法检验厂家提供的3批样品，结果见表2。结果表明，该分析方法的精密度、准确度都比较好，并且操作较简便、快捷，一次进样即可得到3种组分的含量测定结果，便于在实际生产、检验中应用。
, http://www.100md.com
表2 万辉化痰止咳露含量测定结果(%，n＝3) 样品批号
磷酸可待因
盐酸麻黄碱
马来酸氯苯那敏
HW2351
99.5(0.9)
101.7(1.0)
103.2(0.8)
HW2361
100.8(1.0)
100.8(1.2)
, 百拇医药 104.2(1.1)
HW2371
95.9(0.7)
99.9(0.9)
101.2(0.8)
注：括号内为RSD(%)■
参考文献：
[1]李小燕，陈合山.HPLC法同时测定呋麻滴鼻液中二组分含量.药物分析杂志，1996，16(1)：37
[2]方璐锡，刘颖.感冒通片中双氯灭痛和扑尔敏的高效液相含量测定法.药物分析杂志，1992.12(6)：355
[3]南楠，杨信群，朱霁虹.磷酸可待因与布洛芬的分离与检测.中国药物依赖性通报，1998，7(1)：36
[4]卫生部药品标准(试行).WS-117(X-102)-97
[5]Wade A.Martindale Extra Pharmacopoeia.28th.London England:Pharmaceutical Press,10
收稿日期：1999-06-07, 百拇医药