硫酸奈替米星含量测定方法的改进
作者：代红 余立 王国兰 田洪昭▲
单位：代红 余立 王国兰 田洪昭(北京市药品检验所 100035)
关键词：
药物分析杂志000420 硫酸奈替米星(netilmicinsulfate)是一种新的氨基糖苷类抗生素，已广泛应用于临床。USP(ⅩⅩⅢ)[1]及日本抗生物质医药品基准解说1993年版[2]均有收载，我国也已研制出此药，有卫生部部标准试行标准，其含量测定方法均采用微生物效价测定法。USP(ⅩⅩⅢ)所用试验菌为表皮葡萄球菌，日本抗生物质医药品基准解说及卫生部部标准(试行)所用试验菌均为金黄色葡萄球菌。这2种试验菌均对培养条件要求较高，需要临用时新鲜传代复壮，当天洗菌，且上层琼脂培养基加菌的温度低(48 ℃)，距培养基的凝固温度(45 ℃)很近，操作技术难度较高，需要的加菌量也多。所以抑菌圈的大小、质量不易控制，实验结果的重现性不很好。本文经实验，改用中国药典1995年版[3]抗生素微生物效价法普遍采用的枯草芽孢杆菌测定其含量，并作出标准曲线。实验证明：改进后的方法可行，对含量测定结果无影响，且枯草菌可以先期制备，加菌的温度高(60 ℃)，易操 作。
, 百拇医药
1 材料与方法
仪器：ZY-300A型抑菌圈电脑测量仪，北京先驱高技术开发公司生产。
试剂：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾均为分析纯。
样品：硫酸奈替米星注射液，浙江康乐集团公司生产；奈替米星对照品，浙江省药 品检验所提供。
试验菌：金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003，枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501，藤黄八叠球菌CMCC(B)28001，短小芽孢杆菌CMCC(B)63202，均由中国药品生物制品检定所提供。
培养基：Ⅰ号(pH7.8～8.0)和Ⅱ号(pH 7.8～8.0)按照中国药典1995年版方法自配。
2 实验步骤及结果
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2.1 检定菌敏感度的测定 用奈替米星对照品加灭菌水制成含 奈替米星 1000 u·mL-1的溶液(溶液1)，再用磷酸盐缓冲液(pH 7.8)稀释成0.5，1.0，5. 0u·mL-1的溶液，选用金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、藤黄八叠球菌、短小芽孢 杆菌按微生物效价测定法测定抑菌圈直径，结果藤黄八叠球菌对硫酸奈替米星敏感度最低，其次是金黄色葡萄球菌和短小芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌的敏感度最高，所以首选枯草芽孢杆菌作为其含量测定的检定菌。
2.2 标准曲线的测定 取溶液1，用磷酸盐缓冲液(pH 7.8)稀 释成0.9，1.0，1.6，2.0，2.5，3.0，4.0，4.5 u·mL-1的溶液，中心浓度为2.0u·mL-1，检定菌为枯草芽孢杆菌，培养基为Ⅰ号(pH 7.8～8.0)；缓冲液为pH 7 .8。照标准曲线法[4]进行测定，得回归方程为：
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logC=0.164 8 fk+0.307 6 r=0.999 6
由回归方程可知，奈替米星在0.9～4.5 u·mL-1浓度范围内，药液浓度的对数剂量与抑菌圈直径呈直线关系，符合微生物效价测定的原理，表明改进后的方法是切实可行的。
2.3 样品的测定 精密量取本品适量，加灭菌水制成含奈替米星1 000u·mL-1的溶液，照抗生素微生物效价检定法(二剂量法)，检定菌分别为枯草芽孢杆 菌和金黄色葡萄球菌；培养基为Ⅰ号或Ⅱ号(pH 7.8～8.0)；缓冲液为pH 7.8，抗生素浓度 范 围为2～4u·mL-1，培养条件：温度35～37 ℃，时间16～18 h。结果见表1。由表1可以看出，改进后的测定结果与原方法测定结果基本一致，但改进后方法的重现性好，同时所用菌种为中国药典微生物检定法中最常用的试验菌种，加菌温度高于金黄色葡萄球菌，且不用临用传代，洗菌。所以，改进后的方法更方便，操作更简单。
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表1 3批样品效价测定结果(奈替米星的标示量%) 批号
改进前
改进后
1
100.4(2.74)
99.29(1.52)
2
99.05(4.25)
100.1(0.98)
3
101.2(3.30)
103.2(1.02)
注：括号内为RSD(%)，n=3 ■
参考文献
1.USP.ⅩⅩⅢ.1995.1080
2.日本抗生物质医药品基准解说.1993.74
3.中国药典.1995.二部：附录113
4.张治锬.抗生素药品检验.北京：人民卫生出版社，1987.17，62
(本文于1999年5月4日收到), http://www.100md.com
单位：代红 余立 王国兰 田洪昭(北京市药品检验所 100035)
关键词：
药物分析杂志000420 硫酸奈替米星(netilmicinsulfate)是一种新的氨基糖苷类抗生素，已广泛应用于临床。USP(ⅩⅩⅢ)[1]及日本抗生物质医药品基准解说1993年版[2]均有收载，我国也已研制出此药，有卫生部部标准试行标准，其含量测定方法均采用微生物效价测定法。USP(ⅩⅩⅢ)所用试验菌为表皮葡萄球菌，日本抗生物质医药品基准解说及卫生部部标准(试行)所用试验菌均为金黄色葡萄球菌。这2种试验菌均对培养条件要求较高，需要临用时新鲜传代复壮，当天洗菌，且上层琼脂培养基加菌的温度低(48 ℃)，距培养基的凝固温度(45 ℃)很近，操作技术难度较高，需要的加菌量也多。所以抑菌圈的大小、质量不易控制，实验结果的重现性不很好。本文经实验，改用中国药典1995年版[3]抗生素微生物效价法普遍采用的枯草芽孢杆菌测定其含量，并作出标准曲线。实验证明：改进后的方法可行，对含量测定结果无影响，且枯草菌可以先期制备，加菌的温度高(60 ℃)，易操 作。
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1 材料与方法
仪器：ZY-300A型抑菌圈电脑测量仪，北京先驱高技术开发公司生产。
试剂：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾均为分析纯。
样品：硫酸奈替米星注射液，浙江康乐集团公司生产；奈替米星对照品，浙江省药 品检验所提供。
试验菌：金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003，枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501，藤黄八叠球菌CMCC(B)28001，短小芽孢杆菌CMCC(B)63202，均由中国药品生物制品检定所提供。
培养基：Ⅰ号(pH7.8～8.0)和Ⅱ号(pH 7.8～8.0)按照中国药典1995年版方法自配。
2 实验步骤及结果
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2.1 检定菌敏感度的测定 用奈替米星对照品加灭菌水制成含 奈替米星 1000 u·mL-1的溶液(溶液1)，再用磷酸盐缓冲液(pH 7.8)稀释成0.5，1.0，5. 0u·mL-1的溶液，选用金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、藤黄八叠球菌、短小芽孢 杆菌按微生物效价测定法测定抑菌圈直径，结果藤黄八叠球菌对硫酸奈替米星敏感度最低，其次是金黄色葡萄球菌和短小芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌的敏感度最高，所以首选枯草芽孢杆菌作为其含量测定的检定菌。
2.2 标准曲线的测定 取溶液1，用磷酸盐缓冲液(pH 7.8)稀 释成0.9，1.0，1.6，2.0，2.5，3.0，4.0，4.5 u·mL-1的溶液，中心浓度为2.0u·mL-1，检定菌为枯草芽孢杆菌，培养基为Ⅰ号(pH 7.8～8.0)；缓冲液为pH 7 .8。照标准曲线法[4]进行测定，得回归方程为：
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logC=0.164 8 fk+0.307 6 r=0.999 6
由回归方程可知，奈替米星在0.9～4.5 u·mL-1浓度范围内，药液浓度的对数剂量与抑菌圈直径呈直线关系，符合微生物效价测定的原理，表明改进后的方法是切实可行的。
2.3 样品的测定 精密量取本品适量，加灭菌水制成含奈替米星1 000u·mL-1的溶液，照抗生素微生物效价检定法(二剂量法)，检定菌分别为枯草芽孢杆 菌和金黄色葡萄球菌；培养基为Ⅰ号或Ⅱ号(pH 7.8～8.0)；缓冲液为pH 7.8，抗生素浓度 范 围为2～4u·mL-1，培养条件：温度35～37 ℃，时间16～18 h。结果见表1。由表1可以看出，改进后的测定结果与原方法测定结果基本一致，但改进后方法的重现性好，同时所用菌种为中国药典微生物检定法中最常用的试验菌种，加菌温度高于金黄色葡萄球菌，且不用临用传代，洗菌。所以，改进后的方法更方便，操作更简单。
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表1 3批样品效价测定结果(奈替米星的标示量%) 批号
改进前
改进后
1
100.4(2.74)
99.29(1.52)
2
99.05(4.25)
100.1(0.98)
3
101.2(3.30)
103.2(1.02)
注：括号内为RSD(%)，n=3 ■
参考文献
1.USP.ⅩⅩⅢ.1995.1080
2.日本抗生物质医药品基准解说.1993.74
3.中国药典.1995.二部：附录113
4.张治锬.抗生素药品检验.北京：人民卫生出版社，1987.17，62
(本文于1999年5月4日收到), http://www.100md.com