慢性特发性血小板减少性紫癜患者细胞免疫功能的研究
苏丽萍 郝国平 罗鹏飞 乔振华
关键词：慢性特发性血小板减少性紫癜 NK细胞活性 白细胞介素2 T淋巴细胞亚群
我们通过检测慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者的T淋巴细胞亚群、NK细胞活性、白细胞介素2(IL-2)活性和IL-2分泌细胞(IL-2SC)水平，以探讨慢性ITP患者细胞免疫功能。
对象和方法
1 研究对象 慢性ITP患者16例， 男7例，女9例，年龄5～24岁，均为初诊患者。符合首届中华血液学会全国血栓与止血学术会议有关出凝血疾病的诊断标准。正常对照53名，男33名，女20名，年龄5～60岁。
2 试剂和方法
2.1 主要试剂、仪器：冻干SPA菌体试剂为上海生物制品研究所产品；CD3、CD4、CD8由卫生部武汉生物制品研究所提供；125I-UDR、3H-TDR分别为中国原子能科学研究所、中国科学院上海原子能研究所产品；β液体闪烁仪Beckman LS9800。
, 百拇医药
2.2 方法：取空腹静脉血5ml，灭菌肝素抗凝，淋巴细胞分离液分离淋巴细胞。用含体积分数为10%的小牛血清的RPMI 1640培养液调整细胞数至5×105/ml， 测淋巴细胞亚群；调整至5×106/ml,测NK细胞活性；调整至1×106/ml(含PHA 100mg/L)，37℃、体积分数为5%的CO2中温育24h，2000r/min离心20min，取上清液置-30℃保存，备测IL-2活性。T细胞亚群的测定采用直接SPA菌花环法[1]；NK细胞活性按王氏125I-UDR释放法[2]检测；IL-2活性按丁桂凤介绍的方法[3]检测；IL-2SC检测采用王小宁介绍的APAAP法[4]，试剂盒由军事医学科学院基础所分子免疫室提供。
2.3 统计学分析：两样本均数比较，方差齐时采用t检验，方差不齐时采用t′检验。以Pernson相关分析检验两变量间的相关性。
, 百拇医药
结 果
1 各项指标检测结果见表1。
2 ITP组CD4+与CD8+细胞百分率之和为73.013%， 明显超过总T细胞(CD3+细胞，54.004%)，而正常对照CD4+与CD8+细胞百分率之和为66.039%，与总T细胞(62.778%)接近。
3 相关分析 ITP组CD8+细胞百分率与CD+4/CD+8及NK细胞活性呈显著负相关(r=-0.72635、-0.58324),CD+4/CD+8与IL-2活性呈显著正相关(r=0.69185)。血小板计数与CD+4/CD+8呈显著正相关(r=0.73900)，与CD+8细胞百分率呈显著负相关(r=-0.69494)。
, http://www.100md.com
4 1例慢性ITP患者治疗后CD4+细胞百分率、CD4+/CD8+、NK细胞及IL-2活性均有明显提高， 分别由治疗前的32.03%、0.59、 11.05%及5.0增至35.0%、1.01、19.90%和13.44，CD8+细胞百分率则明显下降，由55.68%降低至34.83%。
表1 慢性ITP组与正常组各项免疫指标比较(X±s)
组别
例数
CD+3(%)
CD+4(%)
, 百拇医药
CD+8(%)
CD+4/CD+8
NK细胞活性(%)
IL-2活性
IL-2SC(%)
正常组
53
62.778±7.928
39.996±7.325
26.043±7.032
, 百拇医药
1.529±0.387
37.783±3.030
21.265±8.577
27.497±8.242
慢性ITP
16
54.004±14.931
32.823±8.282
40.190±12.794
0.918±0.454
26.141±10.502
, http://www.100md.com
13.583±8.711
20.276±6.684
P值
>0.05
>0.1
<0. 05
<0.01
<0.05
<0.05
<0.05
讨论
近年来实验证明，自身免疫性疾病的发生与机体免疫内环境平衡的紊乱有关，而辅助T细胞与抑制T细胞亚群间的平衡是维持免疫内环境稳定的中心环节。我们的研究结果显示，慢性ITP患者外周血平均CD8+细胞百分率显著增高，辅助T细胞与抑制T细胞亚群比例失调，辅助T细胞与抑制T细胞之和明显超过总T细胞，说明慢性ITP患者外周血中存在CD4+、CD8+双标记细胞，真正的CD8+细胞是减少的。相关分析结果CD8+细胞百分率与NK细胞活性呈负相关，CD4+/CD8+与IL-2活性呈显著正相关。说明慢性ITP患者T细胞亚群比例失调是导致NK细胞活性及IL-2活性降低的始动因素。血小板计数与CD8+细胞百分率呈显著负相关，而CD8+细胞百分率与NK细胞活性呈负相关，CD4+/CD8+与IL-2活性呈显著正相关。因此，NK细胞及IL-2活性的降低与慢性ITP的发生也有密切关系。我们对1例患者自身对照研究发现治疗后各项指标均有不同程度恢复，提示细胞免疫功能异常与慢性ITP的发展、转归亦有显著关系。
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作者单位：苏丽萍(030001 太原，山西医科大学附属第二医院血液科)
乔振华(030001 太原，山西医科大学附属第二医院血液科)
郝国平(山西省儿童医院血液科)
罗鹏飞(山西省儿童医院血液科)
参考文献
1 王丽君.检测正常人外周血T淋巴细胞亚群三种方法的比较.中华微生物学和免疫学杂志,1989,9:55-57.
2 王球达.天然杀伤(NK)细胞的研究，125I-UDR释放试验和正常人外周血淋巴细胞的NK活性.上海免疫学杂志，1983,10:272-277.
3 丁桂凤.用活化的小鼠脾细胞测定IL-2.上海免疫学杂志,1988,8:64-67.
4 王小宁.用单克隆抗体检测人IL-2分泌细胞.上海免疫学杂志,1991,11:38-39., http://www.100md.com
关键词：慢性特发性血小板减少性紫癜 NK细胞活性 白细胞介素2 T淋巴细胞亚群
我们通过检测慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者的T淋巴细胞亚群、NK细胞活性、白细胞介素2(IL-2)活性和IL-2分泌细胞(IL-2SC)水平，以探讨慢性ITP患者细胞免疫功能。
对象和方法
1 研究对象 慢性ITP患者16例， 男7例，女9例，年龄5～24岁，均为初诊患者。符合首届中华血液学会全国血栓与止血学术会议有关出凝血疾病的诊断标准。正常对照53名，男33名，女20名，年龄5～60岁。
2 试剂和方法
2.1 主要试剂、仪器：冻干SPA菌体试剂为上海生物制品研究所产品；CD3、CD4、CD8由卫生部武汉生物制品研究所提供；125I-UDR、3H-TDR分别为中国原子能科学研究所、中国科学院上海原子能研究所产品；β液体闪烁仪Beckman LS9800。
, 百拇医药
2.2 方法：取空腹静脉血5ml，灭菌肝素抗凝，淋巴细胞分离液分离淋巴细胞。用含体积分数为10%的小牛血清的RPMI 1640培养液调整细胞数至5×105/ml， 测淋巴细胞亚群；调整至5×106/ml,测NK细胞活性；调整至1×106/ml(含PHA 100mg/L)，37℃、体积分数为5%的CO2中温育24h，2000r/min离心20min，取上清液置-30℃保存，备测IL-2活性。T细胞亚群的测定采用直接SPA菌花环法[1]；NK细胞活性按王氏125I-UDR释放法[2]检测；IL-2活性按丁桂凤介绍的方法[3]检测；IL-2SC检测采用王小宁介绍的APAAP法[4]，试剂盒由军事医学科学院基础所分子免疫室提供。
2.3 统计学分析：两样本均数比较，方差齐时采用t检验，方差不齐时采用t′检验。以Pernson相关分析检验两变量间的相关性。
, 百拇医药
结 果
1 各项指标检测结果见表1。
2 ITP组CD4+与CD8+细胞百分率之和为73.013%， 明显超过总T细胞(CD3+细胞，54.004%)，而正常对照CD4+与CD8+细胞百分率之和为66.039%，与总T细胞(62.778%)接近。
3 相关分析 ITP组CD8+细胞百分率与CD+4/CD+8及NK细胞活性呈显著负相关(r=-0.72635、-0.58324),CD+4/CD+8与IL-2活性呈显著正相关(r=0.69185)。血小板计数与CD+4/CD+8呈显著正相关(r=0.73900)，与CD+8细胞百分率呈显著负相关(r=-0.69494)。
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4 1例慢性ITP患者治疗后CD4+细胞百分率、CD4+/CD8+、NK细胞及IL-2活性均有明显提高， 分别由治疗前的32.03%、0.59、 11.05%及5.0增至35.0%、1.01、19.90%和13.44，CD8+细胞百分率则明显下降，由55.68%降低至34.83%。
表1 慢性ITP组与正常组各项免疫指标比较(X±s)
组别
例数
CD+3(%)
CD+4(%)
, 百拇医药
CD+8(%)
CD+4/CD+8
NK细胞活性(%)
IL-2活性
IL-2SC(%)
正常组
53
62.778±7.928
39.996±7.325
26.043±7.032
, 百拇医药
1.529±0.387
37.783±3.030
21.265±8.577
27.497±8.242
慢性ITP
16
54.004±14.931
32.823±8.282
40.190±12.794
0.918±0.454
26.141±10.502
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13.583±8.711
20.276±6.684
P值
>0.05
>0.1
<0. 05
<0.01
<0.05
<0.05
<0.05
讨论
近年来实验证明，自身免疫性疾病的发生与机体免疫内环境平衡的紊乱有关，而辅助T细胞与抑制T细胞亚群间的平衡是维持免疫内环境稳定的中心环节。我们的研究结果显示，慢性ITP患者外周血平均CD8+细胞百分率显著增高，辅助T细胞与抑制T细胞亚群比例失调，辅助T细胞与抑制T细胞之和明显超过总T细胞，说明慢性ITP患者外周血中存在CD4+、CD8+双标记细胞，真正的CD8+细胞是减少的。相关分析结果CD8+细胞百分率与NK细胞活性呈负相关，CD4+/CD8+与IL-2活性呈显著正相关。说明慢性ITP患者T细胞亚群比例失调是导致NK细胞活性及IL-2活性降低的始动因素。血小板计数与CD8+细胞百分率呈显著负相关，而CD8+细胞百分率与NK细胞活性呈负相关，CD4+/CD8+与IL-2活性呈显著正相关。因此，NK细胞及IL-2活性的降低与慢性ITP的发生也有密切关系。我们对1例患者自身对照研究发现治疗后各项指标均有不同程度恢复，提示细胞免疫功能异常与慢性ITP的发展、转归亦有显著关系。
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作者单位：苏丽萍(030001 太原，山西医科大学附属第二医院血液科)
乔振华(030001 太原，山西医科大学附属第二医院血液科)
郝国平(山西省儿童医院血液科)
罗鹏飞(山西省儿童医院血液科)
参考文献
1 王丽君.检测正常人外周血T淋巴细胞亚群三种方法的比较.中华微生物学和免疫学杂志,1989,9:55-57.
2 王球达.天然杀伤(NK)细胞的研究，125I-UDR释放试验和正常人外周血淋巴细胞的NK活性.上海免疫学杂志，1983,10:272-277.
3 丁桂凤.用活化的小鼠脾细胞测定IL-2.上海免疫学杂志,1988,8:64-67.
4 王小宁.用单克隆抗体检测人IL-2分泌细胞.上海免疫学杂志,1991,11:38-39., http://www.100md.com