VITEK-AMS CC4仪在检测产超广谱β-内酰胺酶细菌中的应用
施菁玲 李从荣 李红霞 施雪梅 彭少华
摘 要： 目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的检测方法及其耐药性，指导临床用药。方法 采用法国生物-梅里埃公司生产的VITEK全自动微生物分析系统(AMS)及GNS-NT，GNS-F2药敏卡，对从临床感染标本中分离出的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌作ESBLs的检测和药敏试验。结果 从167例被检菌中，共检出产ESBLs细菌17株，产ESBLs细菌阳性率为10.2%，ESBLs阳性细菌对12种抗生素的耐药率远远高于ESBLs阴性菌，并同时高耐氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素。 结论 仪器法检测产ESBLs细菌，准确、快速，产ESBLs细菌多重耐药现象严重。
关键词：检测法；ESBLs；耐药性
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近年来，随着三代头孢菌素在临床上日益广泛的应用，出现了对这些新一代β-内酰胺类药物耐药的细菌，导致细菌三代头孢菌素耐药的主要原因是细菌染色体或质粒介导的超广谱β-内酰胺酶的产生，产ESBLs的细菌，对所有三代头孢和氨曲南耐药，其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是产ESBLs的主要细菌[1]。能准确地检出产ESBLs的细菌，对临床医生合理使用抗生素是十分必要的。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株 试验全部菌株为我院1998年7月～1999年7月从各类临床感染标本中分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。质控菌为ATCC25922，ATCC25923，ATCC27853，ATCC700603(肺炎克雷伯菌ESBLs阳性)。
1.1.2 仪器 法国生物-梅里埃公司生产的VITEK AMS和GNS-NT，GNS-F2药敏卡。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 菌株鉴定 应用VITEK AMS的GNI卡进行鉴定
1.2.2 ESBLs检测 检测应用VITEK AMS及GNS-NT卡，通过测定头孢他啶及其与酶抑制剂棒酸的联合制剂对待检菌的抑制作用进行测定[2]，当头孢他啶与棒酸的联合制剂与单纯头孢他啶MIC值之比≥4时，判定为ESBLs阳性。
1.2.3 药敏试验 试验应用VITEK AMS及GNS-NT，GNS-F2药敏卡，采用微量稀释法测定MIC值，判定标准及结果解释参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准。
2 结 果
2.1 用仪器法从167株试验菌中，共检出ESBLs阳性菌株17例，其中肺炎克雷伯菌63株，检出11株产ESBLs的细菌，阳性率为17.5%，高于大肠埃希菌5.7%。
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2.2 分别对167株试验菌用GNS-NT，GNS-F2卡作药敏试验，选取12种有代表性的抗生素分别对ESBLs阳性菌和ESBLs阴性菌作比较，ESBLs阳性菌耐药率远远高于ESBLs阴性菌，见表1。
表1 ESBLs阳性菌与阴性菌耐药率(%)比较
抗生素
ESBLs
阳性菌
阴性菌
阿莫西林/克拉维酸
70.6
19.3
氨苄西林
, 百拇医药
100.0
81.3
头孢噻肟
70.6
4.0
氨曲南
88.2
11.3
庆大霉素
76.5
37.3
萘啶酸
94.1
, 百拇医药
50.7
奈替米星
29.4
11.3
呋喃妥因
41.2
13.3
环丙沙星
82.4
22.7
妥布霉素
41.2
20.7
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复方新诺明
70.6
55.3
亚胺培南
0.0
0.0
3 讨 论
3.1 ESBLs是β-内酰胺酶(TEM，SHV)个别氨基酸的总突变形成的。迄今为止，TEM类ESBLs由TEM-3增加到TEM-6，SHV类ESBLs也由SHV-2增加到SHV-12[3]，由于ESBLs可由质粒携带，很容易在细菌间传递扩散，导致对抗生素耐药细菌的广泛传播。因此尽早检出产ESBLs细菌，有助于控制此类耐药菌及其耐药质粒的传播。
, 百拇医药 3.2 由于许多产ESBLs的细菌对常用检测ESBLs的药物如头孢噻肟和头孢曲松(头孢三嗪)敏感，仪器法检测出的ESBLs阳性菌对头孢噻肟的耐药率只有70.6%，故仅根据常规细菌药敏试验结果，不能正常检出产ESBLs的细菌，而必须用特殊的试验方法，双纸片协同试验简单，但只能检测TEM-12以外的TEM类和SHV类的ESBLs，不能检测AmpC类ESBLs[4]，而且，两种纸片间的距离对结果影响很大。E-TEST法操作简便，结果准确，但有时克拉维酸从试条扩散致使对侧的抑菌环变形，MIC值不能读取，且价格较贵。本试验采用VITEK AMS及GNS-NT卡，能准确、快速地检出产ESBLs的细菌[5]，同时报告药敏结果，检出率为99.5%[2]。
3.3 167株被检菌中，大肠埃希菌104株，检出产ESBLs细菌6株，肺炎克雷伯菌63株，产ESBLs细菌11株，检出率为17.5%，远远高于大肠埃希菌(5.7%)与报道的肺炎克雷伯菌产ESBLs细菌高于大肠埃希菌相附，总产ESBLs细菌阳性检出率为10.2%，高于国内其他报道，提示我院三代头孢菌素类抗生素使用率高，造成临床感染标本中产ESBLs细菌增加，应引起大家重视。
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3.4 由表1可见，产ESBLs细菌对环丙沙星等12种抗生素的耐药率远远高于不产酶细菌，其多重耐药现象也更严重和显著，这是由于携带ESBLs的质粒上可同时携带对氨基糖苷类和喹诺酮类等多种药物耐药的基因，故对环丙沙星的耐药率高达82.4%，对庆大霉素、复方新诺明、萘啶酸等抗生素耐药率分别为76.5%，70.6%，94.1%。目前未发现亚胺培南/西司他丁(泰能)耐药的菌株。产ESBLs细菌对三代头孢类抗生素和氨曲南均耐药，即使体外药敏试验三代头孢类抗生素结果敏感的，体内效果也不佳，应提示给临床医生，不能使用。临床用药时可用含有酶抑制剂的联合制剂，如阿莫西林+克拉维酸，必要时可选择亚胺培南/西司他丁。
总之，由于临床大量使用三代头孢菌素β-内酰胺类抗生素，使产ESBLs的细菌逐年增多，产ESBLs细菌引起医院暴发感染也时有报道。产ESBLs细菌感染，由于其多重耐药性给临床治疗带来了困难。用VITEK AMS仪器法，能快速、准确地检出产ESBLs的细菌，尽早提示给临床医生，减少徒劳用药，指导医生合理使用抗生素，有效控制产ESBLs细菌引起的医院暴发感染。
, 百拇医药
施菁玲(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
李从荣(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
李红霞(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
施雪梅(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
彭少华(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
参考文献
1，赵秀丽, 李家泰. 质粒介导的超广谱β-内酰胺酶的研究进展[J]. 中国临床药理学杂志, 1996, 12: 58.
2，Sanders CC, Barry AL, Washington JA, et al.Detection of extended-spectrum beta-lactamase-producing members of the family Enterobacteriaceae with the VITEK ESBL test[J]. J Clin Microbiol, 1996, 34(12): 2997.
, 百拇医药
3，沈定霞, 周贵民. 产超广谱β-内酰胺酶细菌的研究近况[J]. 国外医学临床化学与检验学分册, 1999, 20(1): 24.
4，Livermore DM, Yuan M. Antibiobic resistance and production of ESBLs amongst Klebsiella spp. from intensive care units in Europe[J]. J Antimicrob Chemother, 1996 38(3): 409.
5，Ho PL, Chow KH, Yuen KY, et al. Comparison of a novel, inhibitor-potentiated disc diffusion test with other methods for the detection of extended-spectrum beta-lactamases in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae[J]. J Antimicrob Chemother, 1998, 42: 49., 百拇医药
摘 要： 目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的检测方法及其耐药性，指导临床用药。方法 采用法国生物-梅里埃公司生产的VITEK全自动微生物分析系统(AMS)及GNS-NT，GNS-F2药敏卡，对从临床感染标本中分离出的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌作ESBLs的检测和药敏试验。结果 从167例被检菌中，共检出产ESBLs细菌17株，产ESBLs细菌阳性率为10.2%，ESBLs阳性细菌对12种抗生素的耐药率远远高于ESBLs阴性菌，并同时高耐氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素。 结论 仪器法检测产ESBLs细菌，准确、快速，产ESBLs细菌多重耐药现象严重。
关键词：检测法；ESBLs；耐药性
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近年来，随着三代头孢菌素在临床上日益广泛的应用，出现了对这些新一代β-内酰胺类药物耐药的细菌，导致细菌三代头孢菌素耐药的主要原因是细菌染色体或质粒介导的超广谱β-内酰胺酶的产生，产ESBLs的细菌，对所有三代头孢和氨曲南耐药，其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是产ESBLs的主要细菌[1]。能准确地检出产ESBLs的细菌，对临床医生合理使用抗生素是十分必要的。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株 试验全部菌株为我院1998年7月～1999年7月从各类临床感染标本中分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。质控菌为ATCC25922，ATCC25923，ATCC27853，ATCC700603(肺炎克雷伯菌ESBLs阳性)。
1.1.2 仪器 法国生物-梅里埃公司生产的VITEK AMS和GNS-NT，GNS-F2药敏卡。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 菌株鉴定 应用VITEK AMS的GNI卡进行鉴定
1.2.2 ESBLs检测 检测应用VITEK AMS及GNS-NT卡，通过测定头孢他啶及其与酶抑制剂棒酸的联合制剂对待检菌的抑制作用进行测定[2]，当头孢他啶与棒酸的联合制剂与单纯头孢他啶MIC值之比≥4时，判定为ESBLs阳性。
1.2.3 药敏试验 试验应用VITEK AMS及GNS-NT，GNS-F2药敏卡，采用微量稀释法测定MIC值，判定标准及结果解释参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准。
2 结 果
2.1 用仪器法从167株试验菌中，共检出ESBLs阳性菌株17例，其中肺炎克雷伯菌63株，检出11株产ESBLs的细菌，阳性率为17.5%，高于大肠埃希菌5.7%。
, http://www.100md.com
2.2 分别对167株试验菌用GNS-NT，GNS-F2卡作药敏试验，选取12种有代表性的抗生素分别对ESBLs阳性菌和ESBLs阴性菌作比较，ESBLs阳性菌耐药率远远高于ESBLs阴性菌，见表1。
表1 ESBLs阳性菌与阴性菌耐药率(%)比较
抗生素
ESBLs
阳性菌
阴性菌
阿莫西林/克拉维酸
70.6
19.3
氨苄西林
, 百拇医药
100.0
81.3
头孢噻肟
70.6
4.0
氨曲南
88.2
11.3
庆大霉素
76.5
37.3
萘啶酸
94.1
, 百拇医药
50.7
奈替米星
29.4
11.3
呋喃妥因
41.2
13.3
环丙沙星
82.4
22.7
妥布霉素
41.2
20.7
, http://www.100md.com
复方新诺明
70.6
55.3
亚胺培南
0.0
0.0
3 讨 论
3.1 ESBLs是β-内酰胺酶(TEM，SHV)个别氨基酸的总突变形成的。迄今为止，TEM类ESBLs由TEM-3增加到TEM-6，SHV类ESBLs也由SHV-2增加到SHV-12[3]，由于ESBLs可由质粒携带，很容易在细菌间传递扩散，导致对抗生素耐药细菌的广泛传播。因此尽早检出产ESBLs细菌，有助于控制此类耐药菌及其耐药质粒的传播。
, 百拇医药 3.2 由于许多产ESBLs的细菌对常用检测ESBLs的药物如头孢噻肟和头孢曲松(头孢三嗪)敏感，仪器法检测出的ESBLs阳性菌对头孢噻肟的耐药率只有70.6%，故仅根据常规细菌药敏试验结果，不能正常检出产ESBLs的细菌，而必须用特殊的试验方法，双纸片协同试验简单，但只能检测TEM-12以外的TEM类和SHV类的ESBLs，不能检测AmpC类ESBLs[4]，而且，两种纸片间的距离对结果影响很大。E-TEST法操作简便，结果准确，但有时克拉维酸从试条扩散致使对侧的抑菌环变形，MIC值不能读取，且价格较贵。本试验采用VITEK AMS及GNS-NT卡，能准确、快速地检出产ESBLs的细菌[5]，同时报告药敏结果，检出率为99.5%[2]。
3.3 167株被检菌中，大肠埃希菌104株，检出产ESBLs细菌6株，肺炎克雷伯菌63株，产ESBLs细菌11株，检出率为17.5%，远远高于大肠埃希菌(5.7%)与报道的肺炎克雷伯菌产ESBLs细菌高于大肠埃希菌相附，总产ESBLs细菌阳性检出率为10.2%，高于国内其他报道，提示我院三代头孢菌素类抗生素使用率高，造成临床感染标本中产ESBLs细菌增加，应引起大家重视。
, http://www.100md.com
3.4 由表1可见，产ESBLs细菌对环丙沙星等12种抗生素的耐药率远远高于不产酶细菌，其多重耐药现象也更严重和显著，这是由于携带ESBLs的质粒上可同时携带对氨基糖苷类和喹诺酮类等多种药物耐药的基因，故对环丙沙星的耐药率高达82.4%，对庆大霉素、复方新诺明、萘啶酸等抗生素耐药率分别为76.5%，70.6%，94.1%。目前未发现亚胺培南/西司他丁(泰能)耐药的菌株。产ESBLs细菌对三代头孢类抗生素和氨曲南均耐药，即使体外药敏试验三代头孢类抗生素结果敏感的，体内效果也不佳，应提示给临床医生，不能使用。临床用药时可用含有酶抑制剂的联合制剂，如阿莫西林+克拉维酸，必要时可选择亚胺培南/西司他丁。
总之，由于临床大量使用三代头孢菌素β-内酰胺类抗生素，使产ESBLs的细菌逐年增多，产ESBLs细菌引起医院暴发感染也时有报道。产ESBLs细菌感染，由于其多重耐药性给临床治疗带来了困难。用VITEK AMS仪器法，能快速、准确地检出产ESBLs的细菌，尽早提示给临床医生，减少徒劳用药，指导医生合理使用抗生素，有效控制产ESBLs细菌引起的医院暴发感染。
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施菁玲(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
李从荣(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
李红霞(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
施雪梅(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
彭少华(湖北医科大学附属第一医院， 湖北 武汉 430060)
参考文献
1，赵秀丽, 李家泰. 质粒介导的超广谱β-内酰胺酶的研究进展[J]. 中国临床药理学杂志, 1996, 12: 58.
2，Sanders CC, Barry AL, Washington JA, et al.Detection of extended-spectrum beta-lactamase-producing members of the family Enterobacteriaceae with the VITEK ESBL test[J]. J Clin Microbiol, 1996, 34(12): 2997.
, 百拇医药
3，沈定霞, 周贵民. 产超广谱β-内酰胺酶细菌的研究近况[J]. 国外医学临床化学与检验学分册, 1999, 20(1): 24.
4，Livermore DM, Yuan M. Antibiobic resistance and production of ESBLs amongst Klebsiella spp. from intensive care units in Europe[J]. J Antimicrob Chemother, 1996 38(3): 409.
5，Ho PL, Chow KH, Yuen KY, et al. Comparison of a novel, inhibitor-potentiated disc diffusion test with other methods for the detection of extended-spectrum beta-lactamases in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae[J]. J Antimicrob Chemother, 1998, 42: 49., 百拇医药