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编号:10500371
水溶性猩红-亮绿双重染色法在显示神经髓鞘中的应用
http://www.100md.com 《中华病理学杂志》 2000年第4期
     水溶性猩红-亮绿双重染色法在显示神经髓鞘中的应用

    田玉旺 丁华野 冷咏梅 邓永江 邢惠清

    关键词:髓鞘染色;水溶性猩红-亮绿法 在神经病理诊断和研究工作中,髓鞘染色是一种常用的染色方法。其染色方法很多,我们在实际应用过程中,发现这些经典的染色方法有下列弊端:染色时间过长,操作步骤复杂,分化难以掌握,极易造成染色失败;同时锇酸价格昂贵,给病理诊断和研究带来不便。为此,我们根据神经髓鞘的组织结构特点及染色原理,经大量实验,采用水溶性猩红-亮绿法对神经髓鞘进行染色,收到了满意的效果。

    一、材料和方法

    1. 标本来源:活检、尸检及动物正常或病变的脑组织、脊髓和周围神经组织,均经4%甲醛-钙液固定,常规石蜡切片,厚5 μm。同时与Weil染色法进行对照。
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    2. 试剂的配制:(1)水溶性猩红染色液:水溶性猩红(即比布列西猩红Biebrich scarlet water soluble,上海化学试剂采购供应站分装厂) 1 g,冰醋酸 1 ml,蒸馏水99 ml,3者混合即可使用。(2)媒染液:磷钼酸 2.5 g,磷钨酸2.0 g,蒸馏水100 ml。(3)亮绿染液:亮绿2.5 g,冰醋酸2.5 ml,蒸馏水97.5 ml。

    3. 染色方法:(1)切片常规脱蜡至蒸馏水;(2)切片用水溶性猩红染液染色4 min;(3)自来水洗,然后在媒染液中作用1 min;(4)用亮绿染液复染4 min;(5)直接入1%冰醋酸水溶液分化10~20 s;(6)自来水洗,梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

    二、结果

    神经髓鞘呈鲜红色,轴索和间质呈绿色;变性的髓鞘因磷脂消失故不着色(图1,2)。
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    图1,2 糖尿病性周围神经病变:神经髓鞘染成鲜红色,图1 横断面髓鞘呈环状,部分髓鞘溃变染色呈半环状,部分髓鞘彻底溃变,染色不着色,呈空白区,图2 纵切面髓鞘呈条索状 ×400

    三、讨论

    1.髓鞘染色方法是神经病理诊断的重要技术。多年来,均采用Weil法和Loyez法来观察研究神经病理的形态变化。我们经大量实验,认为采用水溶性猩红-亮绿染色法显示神经组织髓鞘,观察髓鞘的脱失程度,对神经系统疾病的病理诊断具有一定的意义。其染色原理可能为:髓鞘是包裹在神经轴突外面的管状鞘,由鞘磷脂所构成,其主要成分是蛋白质和类脂质,在它们的结构当中含有羧基和氨基等负离子基团,这些酸性基和碱性基具有两性游离等电点的特性。即神经组织髓鞘在酸性染液中呈碱性,带正点荷,能与带负电荷的酸性猩红染料结合,从而使神经髓鞘染成鲜红色;轴索和间质被亮绿染成绿色。

    2.染液置常温下,可反复使用。
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    3.组织取材后,我们认为采用4%甲醛-钙液(无水氯化钙1 g,4%甲醛10 ml,蒸馏水90 ml)对神经组织进行固定较好,这样有助于保存髓鞘磷脂,使磷脂损失显著减少。

    4.通常髓鞘染色的切片厚度都要求在12~20 μm,我们体会到切片太厚,易出现脱片及浓染等现象。认为切片的厚度在6~8 μm之间为宜,既避免了以上的不足,又能使髓鞘显示的更加清楚。

    5.该法染色时间短,操作简便,易于掌握,试剂价格低廉,结果清晰可靠,对神经组织疾病的病理诊断及研究具有较好的实用价值。

    作者单位:田玉旺(100700 北京军区总医院病理科)

    丁华野(100700 北京军区总医院病理科)

    邓永江(100700 北京军区总医院病理科)

    邢惠清(100700 北京军区总医院病理科)

    冷咏梅(解放军第二六三医院病理科), 百拇医药