BAC介导的含97kb人β类珠蛋白基因簇转基因鼠模型的建立
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中国医学科学院；中国协和医科大学 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 北京 100005 沈伟；黄粤；
细菌人工染色体|同源重组|Β珠蛋白|基因簇|转基因小鼠,BaC介导的含97KB人β类珠蛋白基因簇转基因鼠模型的建立
参见附件(587kb)。
中国医学科学院；中国协和医科大学 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 北京 100005 沈伟；黄粤；唐毅；刘德培；刘光；吴敏；梁植权
关键词：细菌人工染色体；同源重组；Β珠蛋白；基因簇；转基因小鼠
摘要：目的利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,修饰含全长人β珠蛋白基因簇及一段IL-11受体α链基因的(?)C(细菌人工染色体)克隆,建立只包括全长人β珠蛋白基因簇的转基因鼠模型。方法分别在待删除片段上、下游用PCR合成500 bp左右的两段同源序列,共同克隆人构建载体pBV的HindⅢ和XbaⅠ位点之间,然后以SalⅠ酶切后将此1 kb的插入片段再克隆入温度敏感型穿梭载体pSV-RecA中,转化含B5-BAC DNA的感受态大肠杆菌DH10B,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸(FA)负筛选,获得发生两次同源重组后只含修饰后的BACDNA而穿梭载体已丢失的菌株。经脉冲场凝胶电泳鉴定后,纯化修饰的BAC ...
中国医学科学院；中国协和医科大学 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 北京 100005 沈伟；黄粤；唐毅；刘德培；刘光；吴敏；梁植权
关键词：细菌人工染色体；同源重组；Β珠蛋白；基因簇；转基因小鼠
摘要：目的利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,修饰含全长人β珠蛋白基因簇及一段IL-11受体α链基因的(?)C(细菌人工染色体)克隆,建立只包括全长人β珠蛋白基因簇的转基因鼠模型。方法分别在待删除片段上、下游用PCR合成500 bp左右的两段同源序列,共同克隆人构建载体pBV的HindⅢ和XbaⅠ位点之间,然后以SalⅠ酶切后将此1 kb的插入片段再克隆入温度敏感型穿梭载体pSV-RecA中,转化含B5-BAC DNA的感受态大肠杆菌DH10B,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸(FA)负筛选,获得发生两次同源重组后只含修饰后的BACDNA而穿梭载体已丢失的菌株。经脉冲场凝胶电泳鉴定后,纯化修饰的BAC ...
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