切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞分泌t-PA和PAI-1的影响
作者：李玉泉 姜宗来 张炎 丛兴忠 张传森 杨向群
单位：第二军医大学解剖学教研室，生物医学工程研究所，上海200433
关键词：内皮细胞；平滑肌细胞；联合培养；切应力；组织纤溶酶 原激活物；纤溶酶原激活物抑制剂；组织工程
解剖学报00zk24
【摘要】目的 探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮 细胞分泌 t-PA和PAI-1的影响。 方法 应用发色底物法研究40dyn/cm2切应 力作用下与 血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞分泌t-PA和PAI-1的量的变化，以静态条件下单独培 养 的内皮细胞和联合培养的内皮细胞为两对照组。 结果 静态条件下联 合 培养的内皮细胞分泌t-PA的量较单独培养的内皮细胞分泌的量显著增多，同期PAI-1的分 泌 量减少。切应力作用下联合培养的内皮细胞t-PA的分泌量进一步增多，PAI-1的分泌量在 整 个切应力作用过程中没有显著的变化。 结论 切应力作用下，与血管 平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗血栓能力增强。
, 百拇医药
【中图分类号】 R318.01;331.36 【文献标识码】 A 【文章编号】 0529-1356(2000)增-93
EFFECT OF CO-CULTURED VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELLS ON T-PA AND PAI-1 SECRETION OF ENDOTHELIAL CELLS UNDER SHEAR STRESS
LI Yu-quan,JIANG Zong-lai*,ZHANG Yan,CONG Xing-zhong,ZHANG Chuan-sen,YANG Xiang-qun
(Department of Anatomy,Institute of Biomedical Engineering,the Second Military
Medical University,Shanghai 200433,China)
, http://www.100md.com
【Abstract】Objective The effect of vascular smooth muscle cells (VSMCs)on the abilities of secreting t-PA and PAI-1 by Co-cultured endotheli al cells(ECs) under shear stress has been studied.Methods Contents o f tissue plasminogen activator (t-PA)and type l plasminogen activator inhibitor ( PAI-1)by Co-cultured ECs with VSMCs under shear stress were investigated with th e methods of colorsubstrate,two controls of ECs cultured alone and Co-cultured E Cs were maintained under static conditions.Results Compared with ECs cultured alone,in static condition,the content of t-PA secretion by Co-cul tu red ECs increased dramatically,while at the same time,the content of PAI-1 decr ea sed.Under shear stress,the t-PA secretion by Co-cultured ECs increased further .The PAI-1 secretion was unaffected by shear stress over the entire time range. Conclusion Under shear stress condition,the capabilities of an ti-thrombosis of Co-cultured ECs were strengthened,and our results may also su pply some thoretical and experimental foundation for improving tissue engineerin g of vascular endothelial cell seeding.
, http://www.100md.com
【Key words】Endothelial cells;Smooth muscle cells;Co-cult ure;Shear stress;Tissue-plasminogen activator;plasminogen activator inhibitor;Tissu e engineering 心血管人工移植物临床应用的主要问题是血栓形成和钙化，在人工移植物表面单独种植内皮细胞(endothelial cells,EC)后由于其抗血栓能力较弱并不能取得满意的结果。在体条件下，与EC相邻的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)对EC的形态结构和生理功能有积极的影响及调节作用[1]。如果改变EC种植技术，将EC和VSMC联合种植，可能增强人工种植内皮的功能特性，使其抗血栓能力增强。
许多临床研究和动物实验表明，纤溶酶原活性下降是血栓形成的主要原因，而组织纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)是一对纤溶程度的调节剂，对血栓的形成与溶解起着重要的作用。血液中t-PA和PAI-1主要来源于EC，因此对EC分泌t-PA和PAI-1的研究具有十分重要的意义。国外已在切应力对单独培养的EC分泌t-PA和PAI-1的影响方面以及静态条件下其他类型的细胞对EC分泌PAI-1的影响进行了研究[2，3]。但在切应力作用下对与VSMC联合培养的EC分泌t-PA及PAI-1的变化尚未见报道。我们旨在探讨切应力作用下VSMC对联合培养的EC抗血栓能力的影响，为阐明动脉粥样硬化和血栓形成的机制提供一些实验依据。
, 百拇医药
材料和方法
1.内皮细胞和平滑肌细胞的原代培养及鉴定
取新生小牛胸主动脉，用0.1%胶原酶和0.125%胰酶的混合液(1：4)消化EC，用0.125%胰蛋白酶(Sigama公司)消化VSMC，所得的细胞悬液用含20%新生牛血清的DMEM培养基种植于培养瓶中，2～3d换液1次。分别用兔抗人vWF(von willebrand factor)多克隆抗体、SABC试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)和鼠抗人α-肌动蛋白单克隆抗体、ABC试剂盒(美国Vector公司)对EC特有的vWF和VSMC特异的α-肌动蛋白进行免疫细胞化学检测，阳性着色者分别为EC和VSMC。
图1 流体应力测试系统模式图
Fig.1 Diagram of fluid stress testing system
, http://www.100md.com
2.内皮细胞与平滑肌细胞的联合培养[4]
传代2～6代的EC经胰酶消化，调整细胞浓度到1×105个/ml，种植于PET膜的外面，3-4h后细胞贴壁完全，将膜翻转，在膜的内面以同样的浓度种植2～6代的VSMC，然后将PET膜插入配套的6孔培养板中，进行联合培养，每2d换液1次，EC形成单层后用于实验。
3.用于内皮细胞与平滑肌细胞联合培养模型的力学系统[5]
本系统主要由3个部分组成：(1)平行平板流动腔；(2)液体灌流系统；(3)温度及pH值控制装置。整个装置的核心部分为平行平板流动腔，它是专门为上述联合培养模型设计的，液体流动时作用于EC的力为稳定层流切应力。实验时，整个装置置于37℃生化培养箱内以维持温度恒定。液体pH值的恒定有赖于二元混合气体的维持(图1)。
, 百拇医药
4.内皮细胞t-PA和PAI-1活性的发色底物法检测。
实验组为联合培养的EC受40dyn/cm2的切应力作用，对照组为静态条件下单独培养的EC和联合培养的EC。取样时间点为6、12、18和24h。收集的样本离心后，置于-80℃冰箱保存。标本收集齐后，分别用t-PA和PAI-1活性检测试剂盒(上实医大生物工程有限公司)，XL800型酶标仪(美国 Bio-tex仪器公司)检测待测样品t-PA和PAI-1和活性。
5.数据处理
以A405对t-PA和PAI-1标准品活性作标准曲线，待测样品t-PA和PAI-1活性从标准曲线上求算，乘上稀释倍数。将所得数据进行统计处理，组与组之间用t检验。
结 果
1.t-PA活性的变化
, 百拇医药
静态条件下，联合培养的EC和单独培养EC的t-PA活性在24h内均逐渐增加，但联合培养EC的t-PA活性增加幅度快，两者之间从18h开始有显著性差异(P<0.05)。40dyn/cm2切应力作用下，联合培养EC的t-PA分泌量进一步增多，切应力作用6h开始就有非常显著差异P <0.01)(图2，表1)。
图2 内皮细胞t-PA活性标准曲线
Fig.2 t-PA activity standard curve of EC表1 内皮细胞的t-PA活性的检测(×10-2IU/ml，
±s，n=3)
Table l t-PA activity determination of EC 组别
, 百拇医药
group
时间点(小时)time(hours)
0
6
12
18
24
SC
0
0.57±0.20
1.15±0.06
1.95±0.20*
, http://www.100md.com
4.09±0.02**
CC
0
1.19±0.06＃＃
1.54±0.18＃＃
2.65±0.21＃＃
5.47±0.10＃＃
SS
0
3.12±0.09
5.68±0.27△△
, http://www.100md.com
7.71±1.20※※
11.88±1.05※※
注：SC：单独培养的EC组，CC：联合培养的EC组，SS：联合培养的EC受切应力作用组(以下同)
*(SC vs CC P<0.05)，**(SC vs CC P<0.01)，＃＃(SS vs CC P<0.05)，△△(12 vs 6 P<0.01)，※※(18 vs 12 P<0.01 24 vs 18 P<0.01)
Note：SC：ECs cultured alone，CC：Co-cultured ECs，SS：Co-cultured ECs under shear stress
*(SC vs CC P<0.05)，**(SC vs CC P<0.01)，＃＃(SS vs CC P<0.05)，△△(12 vs 6 P<0.01)，※※(18 vs 12 P<0.01 24 vs 18 P<0.01)
, 百拇医药
2.PAI-1活性的变化
静态条件下，联合培养EC和单独培养EC的PAI-1活性在24h内均逐渐增加，但联合培养EC的PAI-1活性增加的幅度较慢，两者之间从12h开始有显著性差异(P<0.05)。40dyn/cm2切应力作用下，PAI-1的活性在整个切应力作用过程中与对照组没有明显的变化(图3，表2)
图3内皮细胞PAI-1活性标准曲线
Fig.3 PAI-1 activity standard curve of EC
表2 内皮细胞的PAI-1活性的检测(AU/ml,±s n=3)
, 百拇医药
Table 2 PAI-1 activity determination of EC 组别
group
时间点(小时)time(hours)
0
6
12
18
24
SC
0
2.18±0.04
2.40±0.05
, 百拇医药
2.48±0.01
2.52±0.02
CC
0
2.13±0.05
2.30±0.03*
2.39±0.05*
2.47±0.02*
SS
0
2.13±0.03
, 百拇医药 2.29±0.01
2.40±0.08
2.49±0.01
*SC vs C C P<0.05
讨 论
血管EC是合成和释放t-PA的主要部位，t-PA是体内重要的活化物之一，它可与纤维蛋白结合，增强t-PA对纤溶酶原激活的催化能力，形成的纤溶酶作用于纤维蛋白,促进形成的血栓溶解。血管EC也能合成释放PAI-1，PAI-1通过1∶1化学计量快速形成酶/抑制物复合物，抑制t-PA的活性。因此t-PA和PAI-1是一对纤溶程度的调节剂，对血栓的形成与溶解起着重要作用。
本实验结果显示，静态条件下，与单独培养的EC相比，与VSMC联合培养EC的t-PA分泌量增多，PAI-1的分泌量减少，在24h内t-PA和PAI-1的分泌量均与时间呈正相关。切应力作用下，联合培养的EC分泌t-PA的能力进一步增强，从6h开始就存在显著性差异。由此可见，VSMC可刺激EC分泌t-PA，切应力使这一作用进一步增强。在整个切应力作用过程中，PAI-1的分泌没有明显的变化，可见VSMC抑制EC分泌PAI-1，但切应力对PAI-1的分泌无抑制作用。
, http://www.100md.com
国外研究者们在切应力对单独培养的EC分泌t-PA和PAI-1的影响及其机制方面作了一些研究工作，他们的研究结果证实，切实力作用下EC的t-PA分泌增多是由于切应力作用引起的[6～8]。Diamond等[2]的研究表明，单独培养的ECs在动脉的切应力作用6h后t-PA的分泌量与对照组之间没有显著差异。而本实验结果显示，与平滑肌联合培养的EC，在静态条件下培养12h和切应力作用6h开始，t-PA的分泌量与对照组之间均存在显著差异。我们认为，产生这种差别的原因是本实验中加入了VSMC对EC的影响。虽然切应力对联合培养EC的PAI-1分泌没有影响，但静态条件下联合培养EC的PAI-1分泌减少，说明VSMC抑制EC合成和释放PAI-1。也就是说，单独培养的EC分泌高水平的PAI-1可能其部分原因是缺少血管VSMC的抑制作用。但对于VSMC是通过何种途径影响EC的t-PA mRNA转录及PAI-1的合成与释放的机制仍不清楚，是否通过分泌可溶性因子调节EC的t-PA和PAI-1生物合成，还有待于今后的进一步研究。
, http://www.100md.com
虽然目前关于流体动力学对血管EC抗血栓能力的影响的研究资料有限，但本实验结果提示，VSMC通过直接或间接的途径影响EC的t-PA和PAI-1合成和释放，使切应力作用下与VSMC联合培养的EC抗血栓能力增强。这一结果为血管组织工程研究带来新的理论和实验依据。同时，也为阐明动脉粥样硬化和血栓形成的机制提供了一些新的资料。
【基金项目】国家自然科学基金资助项目(39670200)；全军“九五”医药 卫生科研基金资助项目(96M068)
【作者简介】李玉泉(1967-)，女(汉族)，安微太湖人，医学博士，讲师
参考文献
[1] Mark F F，Lawrence N S，Jack L C，et al. Co-culture of endothelial cells and smooth muscle cells in bilayer and conditioned media[J].J Surg Res，1997 ，67 (2)：167-178.
, 百拇医药
[2] Diamond.S L,Eskin S G,Mcintire L V.Fluid flow stimulates tissue pla sminogen ac tivator secretion by cultured human endothelial cells[J].Science,1989,243(4897 ):1483-1485.
[3] Rydzewski A,Sakata K, Kobayshi A,et al.Changes in plasminogen activ ator inhibitor-1 land tissue-type plasminogen activator during exercise in patients with coronary artery disease[J].Haemostasis,1990,20(5):305-309.
[4] 姜宗来，陈双红，张炎.内皮细胞平滑肌细胞联合培养的新模型[J].中国 学术期刊文摘，1999，5(1)：80～81.
, 百拇医药
[5] 丛兴忠.切应力条件下与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞形态及凝血相关因 子的分泌改变[D].第二军医大学硕士学位论文，2000：4～11.
[6] Zhang JC,Astrid F,Ljubomir P,et al.Human fibroblasts downregulate plasminog en activator inhibitor type-1 in cultured human macrovascular and microvascular endothelial cells[J].Blood,1996,88(10):3880-3886.
[7] Callicchio M,Argyriou S,Ianches G,et al.Stimulation of PAI-1 expre ssion in en dothelial cells by cultured vascular smooth muscle cells[J].Artherioscler Thro mb,1994,14(5):815-820.
[8] Kooistra T，van Den Berg J，TkJns A,et al.Butyrate stimulates ti ssue -type plasmi nogen-activator synthesis in cultured human endothelial cells [J].Biochem J,1 987,247(3):605-612.
【收稿日期】2000-06-15 【修回日期】2000-08-01, http://www.100md.com
单位：第二军医大学解剖学教研室，生物医学工程研究所，上海200433
关键词：内皮细胞；平滑肌细胞；联合培养；切应力；组织纤溶酶 原激活物；纤溶酶原激活物抑制剂；组织工程
解剖学报00zk24
【摘要】目的 探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮 细胞分泌 t-PA和PAI-1的影响。 方法 应用发色底物法研究40dyn/cm2切应 力作用下与 血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞分泌t-PA和PAI-1的量的变化，以静态条件下单独培 养 的内皮细胞和联合培养的内皮细胞为两对照组。 结果 静态条件下联 合 培养的内皮细胞分泌t-PA的量较单独培养的内皮细胞分泌的量显著增多，同期PAI-1的分 泌 量减少。切应力作用下联合培养的内皮细胞t-PA的分泌量进一步增多，PAI-1的分泌量在 整 个切应力作用过程中没有显著的变化。 结论 切应力作用下，与血管 平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗血栓能力增强。
, 百拇医药
【中图分类号】 R318.01;331.36 【文献标识码】 A 【文章编号】 0529-1356(2000)增-93
EFFECT OF CO-CULTURED VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELLS ON T-PA AND PAI-1 SECRETION OF ENDOTHELIAL CELLS UNDER SHEAR STRESS
LI Yu-quan,JIANG Zong-lai*,ZHANG Yan,CONG Xing-zhong,ZHANG Chuan-sen,YANG Xiang-qun
(Department of Anatomy,Institute of Biomedical Engineering,the Second Military
Medical University,Shanghai 200433,China)
, http://www.100md.com
【Abstract】Objective The effect of vascular smooth muscle cells (VSMCs)on the abilities of secreting t-PA and PAI-1 by Co-cultured endotheli al cells(ECs) under shear stress has been studied.Methods Contents o f tissue plasminogen activator (t-PA)and type l plasminogen activator inhibitor ( PAI-1)by Co-cultured ECs with VSMCs under shear stress were investigated with th e methods of colorsubstrate,two controls of ECs cultured alone and Co-cultured E Cs were maintained under static conditions.Results Compared with ECs cultured alone,in static condition,the content of t-PA secretion by Co-cul tu red ECs increased dramatically,while at the same time,the content of PAI-1 decr ea sed.Under shear stress,the t-PA secretion by Co-cultured ECs increased further .The PAI-1 secretion was unaffected by shear stress over the entire time range. Conclusion Under shear stress condition,the capabilities of an ti-thrombosis of Co-cultured ECs were strengthened,and our results may also su pply some thoretical and experimental foundation for improving tissue engineerin g of vascular endothelial cell seeding.
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【Key words】Endothelial cells;Smooth muscle cells;Co-cult ure;Shear stress;Tissue-plasminogen activator;plasminogen activator inhibitor;Tissu e engineering 心血管人工移植物临床应用的主要问题是血栓形成和钙化，在人工移植物表面单独种植内皮细胞(endothelial cells,EC)后由于其抗血栓能力较弱并不能取得满意的结果。在体条件下，与EC相邻的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)对EC的形态结构和生理功能有积极的影响及调节作用[1]。如果改变EC种植技术，将EC和VSMC联合种植，可能增强人工种植内皮的功能特性，使其抗血栓能力增强。
许多临床研究和动物实验表明，纤溶酶原活性下降是血栓形成的主要原因，而组织纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)是一对纤溶程度的调节剂，对血栓的形成与溶解起着重要的作用。血液中t-PA和PAI-1主要来源于EC，因此对EC分泌t-PA和PAI-1的研究具有十分重要的意义。国外已在切应力对单独培养的EC分泌t-PA和PAI-1的影响方面以及静态条件下其他类型的细胞对EC分泌PAI-1的影响进行了研究[2，3]。但在切应力作用下对与VSMC联合培养的EC分泌t-PA及PAI-1的变化尚未见报道。我们旨在探讨切应力作用下VSMC对联合培养的EC抗血栓能力的影响，为阐明动脉粥样硬化和血栓形成的机制提供一些实验依据。
, 百拇医药
材料和方法
1.内皮细胞和平滑肌细胞的原代培养及鉴定
取新生小牛胸主动脉，用0.1%胶原酶和0.125%胰酶的混合液(1：4)消化EC，用0.125%胰蛋白酶(Sigama公司)消化VSMC，所得的细胞悬液用含20%新生牛血清的DMEM培养基种植于培养瓶中，2～3d换液1次。分别用兔抗人vWF(von willebrand factor)多克隆抗体、SABC试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)和鼠抗人α-肌动蛋白单克隆抗体、ABC试剂盒(美国Vector公司)对EC特有的vWF和VSMC特异的α-肌动蛋白进行免疫细胞化学检测，阳性着色者分别为EC和VSMC。
图1 流体应力测试系统模式图
Fig.1 Diagram of fluid stress testing system
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2.内皮细胞与平滑肌细胞的联合培养[4]
传代2～6代的EC经胰酶消化，调整细胞浓度到1×105个/ml，种植于PET膜的外面，3-4h后细胞贴壁完全，将膜翻转，在膜的内面以同样的浓度种植2～6代的VSMC，然后将PET膜插入配套的6孔培养板中，进行联合培养，每2d换液1次，EC形成单层后用于实验。
3.用于内皮细胞与平滑肌细胞联合培养模型的力学系统[5]
本系统主要由3个部分组成：(1)平行平板流动腔；(2)液体灌流系统；(3)温度及pH值控制装置。整个装置的核心部分为平行平板流动腔，它是专门为上述联合培养模型设计的，液体流动时作用于EC的力为稳定层流切应力。实验时，整个装置置于37℃生化培养箱内以维持温度恒定。液体pH值的恒定有赖于二元混合气体的维持(图1)。
, 百拇医药
4.内皮细胞t-PA和PAI-1活性的发色底物法检测。
实验组为联合培养的EC受40dyn/cm2的切应力作用，对照组为静态条件下单独培养的EC和联合培养的EC。取样时间点为6、12、18和24h。收集的样本离心后，置于-80℃冰箱保存。标本收集齐后，分别用t-PA和PAI-1活性检测试剂盒(上实医大生物工程有限公司)，XL800型酶标仪(美国 Bio-tex仪器公司)检测待测样品t-PA和PAI-1和活性。
5.数据处理
以A405对t-PA和PAI-1标准品活性作标准曲线，待测样品t-PA和PAI-1活性从标准曲线上求算，乘上稀释倍数。将所得数据进行统计处理，组与组之间用t检验。
结 果
1.t-PA活性的变化
, 百拇医药
静态条件下，联合培养的EC和单独培养EC的t-PA活性在24h内均逐渐增加，但联合培养EC的t-PA活性增加幅度快，两者之间从18h开始有显著性差异(P<0.05)。40dyn/cm2切应力作用下，联合培养EC的t-PA分泌量进一步增多，切应力作用6h开始就有非常显著差异P <0.01)(图2，表1)。
图2 内皮细胞t-PA活性标准曲线
Fig.2 t-PA activity standard curve of EC表1 内皮细胞的t-PA活性的检测(×10-2IU/ml，
±s，n=3)Table l t-PA activity determination of EC 组别
, 百拇医药
group
时间点(小时)time(hours)
0
6
12
18
24
SC
0
0.57±0.20
1.15±0.06
1.95±0.20*
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4.09±0.02**
CC
0
1.19±0.06＃＃
1.54±0.18＃＃
2.65±0.21＃＃
5.47±0.10＃＃
SS
0
3.12±0.09
5.68±0.27△△
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7.71±1.20※※
11.88±1.05※※
注：SC：单独培养的EC组，CC：联合培养的EC组，SS：联合培养的EC受切应力作用组(以下同)
*(SC vs CC P<0.05)，**(SC vs CC P<0.01)，＃＃(SS vs CC P<0.05)，△△(12 vs 6 P<0.01)，※※(18 vs 12 P<0.01 24 vs 18 P<0.01)
Note：SC：ECs cultured alone，CC：Co-cultured ECs，SS：Co-cultured ECs under shear stress
*(SC vs CC P<0.05)，**(SC vs CC P<0.01)，＃＃(SS vs CC P<0.05)，△△(12 vs 6 P<0.01)，※※(18 vs 12 P<0.01 24 vs 18 P<0.01)
, 百拇医药
2.PAI-1活性的变化
静态条件下，联合培养EC和单独培养EC的PAI-1活性在24h内均逐渐增加，但联合培养EC的PAI-1活性增加的幅度较慢，两者之间从12h开始有显著性差异(P<0.05)。40dyn/cm2切应力作用下，PAI-1的活性在整个切应力作用过程中与对照组没有明显的变化(图3，表2)
图3内皮细胞PAI-1活性标准曲线
Fig.3 PAI-1 activity standard curve of EC
表2 内皮细胞的PAI-1活性的检测(AU/ml,
±s n=3), 百拇医药
Table 2 PAI-1 activity determination of EC 组别
group
时间点(小时)time(hours)
0
6
12
18
24
SC
0
2.18±0.04
2.40±0.05
, 百拇医药
2.48±0.01
2.52±0.02
CC
0
2.13±0.05
2.30±0.03*
2.39±0.05*
2.47±0.02*
SS
0
2.13±0.03
, 百拇医药 2.29±0.01
2.40±0.08
2.49±0.01
*SC vs C C P<0.05
讨 论
血管EC是合成和释放t-PA的主要部位，t-PA是体内重要的活化物之一，它可与纤维蛋白结合，增强t-PA对纤溶酶原激活的催化能力，形成的纤溶酶作用于纤维蛋白,促进形成的血栓溶解。血管EC也能合成释放PAI-1，PAI-1通过1∶1化学计量快速形成酶/抑制物复合物，抑制t-PA的活性。因此t-PA和PAI-1是一对纤溶程度的调节剂，对血栓的形成与溶解起着重要作用。
本实验结果显示，静态条件下，与单独培养的EC相比，与VSMC联合培养EC的t-PA分泌量增多，PAI-1的分泌量减少，在24h内t-PA和PAI-1的分泌量均与时间呈正相关。切应力作用下，联合培养的EC分泌t-PA的能力进一步增强，从6h开始就存在显著性差异。由此可见，VSMC可刺激EC分泌t-PA，切应力使这一作用进一步增强。在整个切应力作用过程中，PAI-1的分泌没有明显的变化，可见VSMC抑制EC分泌PAI-1，但切应力对PAI-1的分泌无抑制作用。
, http://www.100md.com
国外研究者们在切应力对单独培养的EC分泌t-PA和PAI-1的影响及其机制方面作了一些研究工作，他们的研究结果证实，切实力作用下EC的t-PA分泌增多是由于切应力作用引起的[6～8]。Diamond等[2]的研究表明，单独培养的ECs在动脉的切应力作用6h后t-PA的分泌量与对照组之间没有显著差异。而本实验结果显示，与平滑肌联合培养的EC，在静态条件下培养12h和切应力作用6h开始，t-PA的分泌量与对照组之间均存在显著差异。我们认为，产生这种差别的原因是本实验中加入了VSMC对EC的影响。虽然切应力对联合培养EC的PAI-1分泌没有影响，但静态条件下联合培养EC的PAI-1分泌减少，说明VSMC抑制EC合成和释放PAI-1。也就是说，单独培养的EC分泌高水平的PAI-1可能其部分原因是缺少血管VSMC的抑制作用。但对于VSMC是通过何种途径影响EC的t-PA mRNA转录及PAI-1的合成与释放的机制仍不清楚，是否通过分泌可溶性因子调节EC的t-PA和PAI-1生物合成，还有待于今后的进一步研究。
, http://www.100md.com
虽然目前关于流体动力学对血管EC抗血栓能力的影响的研究资料有限，但本实验结果提示，VSMC通过直接或间接的途径影响EC的t-PA和PAI-1合成和释放，使切应力作用下与VSMC联合培养的EC抗血栓能力增强。这一结果为血管组织工程研究带来新的理论和实验依据。同时，也为阐明动脉粥样硬化和血栓形成的机制提供了一些新的资料。
【基金项目】国家自然科学基金资助项目(39670200)；全军“九五”医药 卫生科研基金资助项目(96M068)
【作者简介】李玉泉(1967-)，女(汉族)，安微太湖人，医学博士，讲师
参考文献
[1] Mark F F，Lawrence N S，Jack L C，et al. Co-culture of endothelial cells and smooth muscle cells in bilayer and conditioned media[J].J Surg Res，1997 ，67 (2)：167-178.
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【收稿日期】2000-06-15 【修回日期】2000-08-01, http://www.100md.com