乙型肝炎肝组织细胞粘附分子-1表达的免疫组化研究
山东医科大学 1传染病教研室 2病理学教研室 山东省济南市 250012 3解放军148医院 4济南市传染病院
余永胜，男，1966-11-28生，安徽省宁国县人.1990年皖南医学院医疗系本科毕业，现为山东医科大学硕士研究生，主要从事肝病研究.
项目负责人 250012, 山东省济南市, 山东医科大学传染病教研室. 收搞日期 1995-05-15 接收日期 1995-06-19
Immunohistochemical study of ICAM-1 on liver in patients with hepatitis B
, 百拇医药
Yong-Sheng Yu 1, Ying-Yong Hou2, Rui-Yun Zhang3, Bao-Yu Zhang3, Qin-Gang Zhang4 and Pei-EngPan1
1Department of Infectious Diseases, 2Department of Pathology, Shangdong Medical University, Jinan 250012 China 3Chinese PLA 148 Hospital 4Jinan Municipal Infectious Diseases Hospital
Abstract
, 百拇医药
AIMS To explore the relationship between the expression of liver intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) and hepatocyte injury in patients with hepatitis B.
METHODS An immunohistochemical method (labelled straptavidin biotin method) was performed on 113 cases of liver biopsy specimens including acute or chronic hepatitis B and 10 cases of normal liver specimens.
RESULTS Enhanced expression of ICAM-1 on hepatocyte membrane or cytoplasm was observed in patients with acute hepatitis, chronic active hepatitis with moderate to severe activity and active cirrhosis compared to normal liver tissue ( P <0.01). The positive rate of ICAM-1 in the group of HBeAb+, HBeAg- was higher(92.7%) than that in the group of HBeAb-, HBeAg+(75.7%, P <0.05).
, http://www.100md.com
CONCLUSIONS The expression of ICAM-1 plays an important role in the mechanism of hepatocyte injury and may contribute to the clearance of HBV.
Keywords hepatitis B cell adhesion molecule immunchemistry
Yu YS, Hou YY, Zhang RY, Zhang BY, Zhang QG, Pan PE. Immunohistochemical study of ICAM-1 on liver in patients with hepatitis B.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1996；4(1)：30-32
, 百拇医药
摘要
目的 探讨细胞粘附分子-1(ICAM-1)在乙型肝炎肝组织内的表达与肝细胞损伤的关系。
方法 用免疫组织化学技术，标记的链菌素亲生物蛋白法检测113例急、慢性乙型肝炎，10例正常肝组织标本内ICAM-1抗原表达情况。
结果 中、重度CAH、活动性肝硬变肝细胞ICAM-1表达较急性肝炎、轻度CAH显著增强(P<0.01)；急性肝炎、轻度CAH较CPH、ASC、正常肝组织显著增强(P<0.01)。HBV低复制组(HBeAg-, HBeAb+)中，肝细胞表达ICAM-1阳性率(92.7%)，高于HBeAg+，HBeAb-组(75.7%，P<0.05)。
结论 ICAM-1肝细胞膜表达与乙型肝炎肝细胞损伤有关，在HBV清除过程中可能起着重要作用。
, 百拇医药
关键词 乙型肝炎; 细胞粘附分子; 免疫化学
余永胜, 侯英勇, 张瑞云, 张宝玉, 张琴冈, 潘沛恩.乙型肝炎肝组织细胞粘附分子-1表达的免疫组化研究.
新消化病学杂志，1996；4(1)：30-32
HBV感染肝细胞后并非直接起损伤肝细胞，而是通过机体免疫反应所致.细胞毒T淋巴细胞(CTL)在肝细胞损伤的免疫反应中起重要作用[1].细胞粘附分子-1(ICAM-1)是T细胞与靶细胞起作用的一种粘附分子[2].ICAM-1在肝内表达与乙型肝炎发病关系渐引起人们重视[3].作者用免疫组化技术，标记的链菌素亲生物蛋白(LSAB)法检测乙型肝炎肝组织内ICAM-1抗原表达，探讨其发病作用.
, 百拇医药
1对象和方法
1.1 对象 113例乙型肝炎标本为1989-1994年济南市传染病院，解放军148医院住院患者肝穿组织.10例正常肝组织为山东医科大学尸检存档标本.肝炎分类参照我国1990年制定的分类标准[4].在113例乙型肝炎标本中，无症状携带者(ASC)9例，急性肝炎14例，慢性迁延性肝炎(CPH)21例，慢性活动性肝炎(CAH)53例，活动性肝硬变16例.所有标本除常规病理检查外，另制切片进行免疫组化检测.
1.2 试剂 鼠抗人ICAM-1单克隆抗体由美国波斯顿血液研究中心Collins教授馈赠；生物素标记羊抗鼠IgG，LSAB试剂为Dako公司产品；二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)为Sigma公司产品.
, 百拇医药
1.3 方法 ①切片脱蜡至蒸馏水；②0.1%胰蛋白酶消化切片10 min；③3% H2O2作用5 min；④滴加正常血清30 min；⑤滴加一抗,4℃孵育过夜；⑥滴加二抗，37℃孵箱30 min；⑦滴加LSAB复合物，37℃孵箱30 min；以上各步均以PBS洗；⑧DAB显色，复染，封片.对照设置：①实验阳性片为阳性对照；②不加一抗为阴性对照.在排除非特性着异色的情况下，光镜见棕黄色颗粒为阳性.染色强度分级参照Chu等[5]：无肝细胞着色为-，肝细胞着色<10%为+，10%-50%为++，>50%为+++.
1.4 统计学方法 秩和检验.
, 百拇医药
2结果
2.1 ICAM-1表达 正常肝组织内，肝窦内皮、Kuffer细胞和血管内皮细胞有ICAM-1不同程度的表达，肝细胞无ICAM-1表达.HBV感染的肝组织内，肝细胞出现不同程度ICAM-1的表达，且肝窦内皮、血管内皮细胞ICAM-1表达增强.阳性表达位于肝细胞膜上，有的伴有胞浆着色.阳性肝细胞多分布在汇管区周围、肝小叶内炎细胞浸润区和坏死灶内(图1，2).在各类肝炎，肝细胞表达差异明显(表1).9例ASC，2例伴有轻微病变，其中有1例出现ICAM-1弱表达，余均为阴性.在104例急性、慢性乙型肝炎中，88例阳性表达，阳性率为84.6%，主要见于CAH、活动性肝硬变、急性肝炎.中、重型CAH、活动性肝硬变与正常组、ASC、急性肝炎、CPH、轻度CAH相比，肝细胞膜ICAM-1表达显著增强( P <0.01)；急性肝炎、轻型CAH与正常组、ASC、CPH相比，肝细胞膜ICAM-1表达显著增强( P <0.01).
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表1 ICAM-1在乙型肝炎细胞中的表达
, 百拇医药
2.2 ICAM-1表达与血清学的关系 104例乙型肝炎中，HBeAg+，HBeAb-组49例，37例肝细胞ICAM-1表达阳性，阳性率为75.5%；HBeAg-、HBeAb+或HBeAb-组55例，51例肝细胞ICAM-1表达阳性，阳性率为92.7%，卡方检验，二组阳性率差异有显著性( P <0.01).
图1 慢性活动性肝炎ICAM-1阳性 定位于细胞膜，坏死灶区明显；窦内皮细胞表达增强 LSAB×800
图2 急性肝炎 ICAM-1阳性 伴胞浆着色 LSAB×660
3 讨论
, 百拇医药
在乙型肝炎发病中，细胞毒T细胞对肝细胞损伤起重要作用[1].T淋巴细胞在识别靶细胞杀伤靶细胞过程中除受MHC限制外，必须有粘附分子参与，而在免疫反应中，ICAM-1是细胞与细胞接触过程中起中心作用的一种粘附分子[5].CTL在发挥其细胞毒功能时，其细胞膜上的淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)与靶细胞膜上的ICAM-1的结合是不可缺少的过程[2].在正常肝组织、肝细胞无ICAM-1抗原表达，当肝细胞病变时，ICAM-1在肝细胞表达增强[7].本结果显示，正常肝细胞无ICAM-1抗原表达，无症状携带者，除1例伴有轻微病变病例有ICAM-1少量表达外，余均为阴性，而急、慢性乙型肝炎，肝细胞中出现ICAM-1表达，且随着病变程度的加重，表达增强.阳性表达多位于汇管区周围、坏死灶区，常伴有炎细胞浸润.因此，ICAM-1抗原在肝细胞膜上的表达与乙型肝炎发病有关，在肝细胞损伤中起重要作用.当肝细胞膜表达ICAM-1时，CTL通过ICAM-1/LFA-1，对肝细胞杀伤敏感性增强，缺乏ICAM-1表达时，CTL不能有效地对HBV感染肝细胞进行杀伤，可能为HBV持续感染而不能被清除的原因之一.
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在正常肝组织内，窦内皮细胞、血管内皮细胞有不同程度ICAM-1抗原表达，而在急、慢性乙型肝炎时，窦内皮细胞、血管内皮细胞ICAM-1表达增强，与Volpes等[7]观察一致.ICAM-1在肝窦内皮及血管内皮表达增强有助于淋巴细胞粘附血管内皮，并向肝组织中浸润，而淋巴细胞由血管内向组织中浸润是免疫反应中极其重要的一步.
血清中HBeAg和HBeAb的存在情况在一定程度上反映着病毒复制和机体免疫的不同状态.在HBeAg+、HBeAb-组肝细胞膜上ICAM-1抗原检出率较HBeAg-、HBeAb+或HBeAb-组低，故认为： ①ICAM-1在肝细胞中表达增强CTL对HBV感染肝细胞的杀伤，有利于病毒清除；②肝细胞膜ICAM-1表达，使肝细胞可能具有抗原递呈功能[8，9]，活化辅助T细胞，激起体液免疫反应，因而，有助于HBV特异性抗体产生.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Feirari C, Penna A, Degliantion A, et al. Cellular immune response to hepatitis B virus antigen: An overview.
J Hepatol, 1988;7(1):21-23
2 Makgoba MW, Sanders ME, Luce GEG, et al. Functional evidence that intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) is a ligand
for LFA-1 dependent adhesion in T cell-mediated cytotoxity. Eur J Immunol, 1988;18(4):637-640
, http://www.100md.com
3 Volpes R, van den Oord TT, Desmet VJ. Hepatic expression of intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) in viral
hepatitis B. Hepatology, 1990;12(1): 148-154
4 全国病毒性肝炎专题学术会议.病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，1991；9(1)：52-60
5 Chu CM, Liaw YF. Coexpression of intercellular adhesion molecule-1 and class Ⅰ major histocompatibility complex antigens
on hepatocyte membrane in chronic viral hepatitis. J Clin Pathol, 1993;46(11):1004-1008
, http://www.100md.com
6 Boyd AW, Wawryk SO, Burns GF, et al. Intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) has a central role in cell-cell
contact-mediated immune mechanisms. Proc natl Acad Sci USA, 1988;85(9):3095-3099
7 Volpes R, van den Oord TT, Desmet VJ. Immunohistochemical study of adhesion molecules in liver inflammation.
Hepatology, 1990;12(1):59-658 Dang LH, Michalek MT, Takeif, et al. Role of ICAM-1 in antigen presentation
demonstrated by ICAM-1 defective mutants. J Immunol, 1990;144(11):4082-4091, 百拇医药(余永胜1 侯英勇2 张瑞云3 张宝玉3 张琴冈4 潘沛恩1)
余永胜，男，1966-11-28生，安徽省宁国县人.1990年皖南医学院医疗系本科毕业，现为山东医科大学硕士研究生，主要从事肝病研究.
项目负责人 250012, 山东省济南市, 山东医科大学传染病教研室. 收搞日期 1995-05-15 接收日期 1995-06-19
Immunohistochemical study of ICAM-1 on liver in patients with hepatitis B
, 百拇医药
Yong-Sheng Yu 1, Ying-Yong Hou2, Rui-Yun Zhang3, Bao-Yu Zhang3, Qin-Gang Zhang4 and Pei-EngPan1
1Department of Infectious Diseases, 2Department of Pathology, Shangdong Medical University, Jinan 250012 China 3Chinese PLA 148 Hospital 4Jinan Municipal Infectious Diseases Hospital
Abstract
, 百拇医药
AIMS To explore the relationship between the expression of liver intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) and hepatocyte injury in patients with hepatitis B.
METHODS An immunohistochemical method (labelled straptavidin biotin method) was performed on 113 cases of liver biopsy specimens including acute or chronic hepatitis B and 10 cases of normal liver specimens.
RESULTS Enhanced expression of ICAM-1 on hepatocyte membrane or cytoplasm was observed in patients with acute hepatitis, chronic active hepatitis with moderate to severe activity and active cirrhosis compared to normal liver tissue ( P <0.01). The positive rate of ICAM-1 in the group of HBeAb+, HBeAg- was higher(92.7%) than that in the group of HBeAb-, HBeAg+(75.7%, P <0.05).
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CONCLUSIONS The expression of ICAM-1 plays an important role in the mechanism of hepatocyte injury and may contribute to the clearance of HBV.
Keywords hepatitis B cell adhesion molecule immunchemistry
Yu YS, Hou YY, Zhang RY, Zhang BY, Zhang QG, Pan PE. Immunohistochemical study of ICAM-1 on liver in patients with hepatitis B.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1996；4(1)：30-32
, 百拇医药
摘要
目的 探讨细胞粘附分子-1(ICAM-1)在乙型肝炎肝组织内的表达与肝细胞损伤的关系。
方法 用免疫组织化学技术，标记的链菌素亲生物蛋白法检测113例急、慢性乙型肝炎，10例正常肝组织标本内ICAM-1抗原表达情况。
结果 中、重度CAH、活动性肝硬变肝细胞ICAM-1表达较急性肝炎、轻度CAH显著增强(P<0.01)；急性肝炎、轻度CAH较CPH、ASC、正常肝组织显著增强(P<0.01)。HBV低复制组(HBeAg-, HBeAb+)中，肝细胞表达ICAM-1阳性率(92.7%)，高于HBeAg+，HBeAb-组(75.7%，P<0.05)。
结论 ICAM-1肝细胞膜表达与乙型肝炎肝细胞损伤有关，在HBV清除过程中可能起着重要作用。
, 百拇医药
关键词 乙型肝炎; 细胞粘附分子; 免疫化学
余永胜, 侯英勇, 张瑞云, 张宝玉, 张琴冈, 潘沛恩.乙型肝炎肝组织细胞粘附分子-1表达的免疫组化研究.
新消化病学杂志，1996；4(1)：30-32
HBV感染肝细胞后并非直接起损伤肝细胞，而是通过机体免疫反应所致.细胞毒T淋巴细胞(CTL)在肝细胞损伤的免疫反应中起重要作用[1].细胞粘附分子-1(ICAM-1)是T细胞与靶细胞起作用的一种粘附分子[2].ICAM-1在肝内表达与乙型肝炎发病关系渐引起人们重视[3].作者用免疫组化技术，标记的链菌素亲生物蛋白(LSAB)法检测乙型肝炎肝组织内ICAM-1抗原表达，探讨其发病作用.
, 百拇医药
1对象和方法
1.1 对象 113例乙型肝炎标本为1989-1994年济南市传染病院，解放军148医院住院患者肝穿组织.10例正常肝组织为山东医科大学尸检存档标本.肝炎分类参照我国1990年制定的分类标准[4].在113例乙型肝炎标本中，无症状携带者(ASC)9例，急性肝炎14例，慢性迁延性肝炎(CPH)21例，慢性活动性肝炎(CAH)53例，活动性肝硬变16例.所有标本除常规病理检查外，另制切片进行免疫组化检测.
1.2 试剂 鼠抗人ICAM-1单克隆抗体由美国波斯顿血液研究中心Collins教授馈赠；生物素标记羊抗鼠IgG，LSAB试剂为Dako公司产品；二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)为Sigma公司产品.
, 百拇医药
1.3 方法 ①切片脱蜡至蒸馏水；②0.1%胰蛋白酶消化切片10 min；③3% H2O2作用5 min；④滴加正常血清30 min；⑤滴加一抗,4℃孵育过夜；⑥滴加二抗，37℃孵箱30 min；⑦滴加LSAB复合物，37℃孵箱30 min；以上各步均以PBS洗；⑧DAB显色，复染，封片.对照设置：①实验阳性片为阳性对照；②不加一抗为阴性对照.在排除非特性着异色的情况下，光镜见棕黄色颗粒为阳性.染色强度分级参照Chu等[5]：无肝细胞着色为-，肝细胞着色<10%为+，10%-50%为++，>50%为+++.
1.4 统计学方法 秩和检验.
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2结果
2.1 ICAM-1表达 正常肝组织内，肝窦内皮、Kuffer细胞和血管内皮细胞有ICAM-1不同程度的表达，肝细胞无ICAM-1表达.HBV感染的肝组织内，肝细胞出现不同程度ICAM-1的表达，且肝窦内皮、血管内皮细胞ICAM-1表达增强.阳性表达位于肝细胞膜上，有的伴有胞浆着色.阳性肝细胞多分布在汇管区周围、肝小叶内炎细胞浸润区和坏死灶内(图1，2).在各类肝炎，肝细胞表达差异明显(表1).9例ASC，2例伴有轻微病变，其中有1例出现ICAM-1弱表达，余均为阴性.在104例急性、慢性乙型肝炎中，88例阳性表达，阳性率为84.6%，主要见于CAH、活动性肝硬变、急性肝炎.中、重型CAH、活动性肝硬变与正常组、ASC、急性肝炎、CPH、轻度CAH相比，肝细胞膜ICAM-1表达显著增强( P <0.01)；急性肝炎、轻型CAH与正常组、ASC、CPH相比，肝细胞膜ICAM-1表达显著增强( P <0.01).
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表1 ICAM-1在乙型肝炎细胞中的表达
| 类型 | n | 染色强度 | |||
| - | + | ++ | +++ | ||
| 正 常 肝 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
| 无症状携带者 | 9 | 8 | 1 | 0 | 0 |
| 急 性 肝 炎 | 14 | 1 | 7 | 5 | 1 |
| 慢性迁延性肝炎 | 21 | 13 | 6 | 2 | 0 |
| 慢性活动性肝炎 | |||||
| 轻型 | 19 | 2 | 10 | 7 | 0 |
| 中重型 | 34 | 0 | 1 | 23 | 10 |
| 活动性肝硬变 | 16 | 0 | 0 | 12 | 4 |
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2.2 ICAM-1表达与血清学的关系 104例乙型肝炎中，HBeAg+，HBeAb-组49例，37例肝细胞ICAM-1表达阳性，阳性率为75.5%；HBeAg-、HBeAb+或HBeAb-组55例，51例肝细胞ICAM-1表达阳性，阳性率为92.7%，卡方检验，二组阳性率差异有显著性( P <0.01).
图1 慢性活动性肝炎ICAM-1阳性 定位于细胞膜，坏死灶区明显；窦内皮细胞表达增强 LSAB×800
图2 急性肝炎 ICAM-1阳性 伴胞浆着色 LSAB×660
3 讨论
, 百拇医药
在乙型肝炎发病中，细胞毒T细胞对肝细胞损伤起重要作用[1].T淋巴细胞在识别靶细胞杀伤靶细胞过程中除受MHC限制外，必须有粘附分子参与，而在免疫反应中，ICAM-1是细胞与细胞接触过程中起中心作用的一种粘附分子[5].CTL在发挥其细胞毒功能时，其细胞膜上的淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)与靶细胞膜上的ICAM-1的结合是不可缺少的过程[2].在正常肝组织、肝细胞无ICAM-1抗原表达，当肝细胞病变时，ICAM-1在肝细胞表达增强[7].本结果显示，正常肝细胞无ICAM-1抗原表达，无症状携带者，除1例伴有轻微病变病例有ICAM-1少量表达外，余均为阴性，而急、慢性乙型肝炎，肝细胞中出现ICAM-1表达，且随着病变程度的加重，表达增强.阳性表达多位于汇管区周围、坏死灶区，常伴有炎细胞浸润.因此，ICAM-1抗原在肝细胞膜上的表达与乙型肝炎发病有关，在肝细胞损伤中起重要作用.当肝细胞膜表达ICAM-1时，CTL通过ICAM-1/LFA-1，对肝细胞杀伤敏感性增强，缺乏ICAM-1表达时，CTL不能有效地对HBV感染肝细胞进行杀伤，可能为HBV持续感染而不能被清除的原因之一.
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在正常肝组织内，窦内皮细胞、血管内皮细胞有不同程度ICAM-1抗原表达，而在急、慢性乙型肝炎时，窦内皮细胞、血管内皮细胞ICAM-1表达增强，与Volpes等[7]观察一致.ICAM-1在肝窦内皮及血管内皮表达增强有助于淋巴细胞粘附血管内皮，并向肝组织中浸润，而淋巴细胞由血管内向组织中浸润是免疫反应中极其重要的一步.
血清中HBeAg和HBeAb的存在情况在一定程度上反映着病毒复制和机体免疫的不同状态.在HBeAg+、HBeAb-组肝细胞膜上ICAM-1抗原检出率较HBeAg-、HBeAb+或HBeAb-组低，故认为： ①ICAM-1在肝细胞中表达增强CTL对HBV感染肝细胞的杀伤，有利于病毒清除；②肝细胞膜ICAM-1表达，使肝细胞可能具有抗原递呈功能[8，9]，活化辅助T细胞，激起体液免疫反应，因而，有助于HBV特异性抗体产生.
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4 参考文献
1 Feirari C, Penna A, Degliantion A, et al. Cellular immune response to hepatitis B virus antigen: An overview.
J Hepatol, 1988;7(1):21-23
2 Makgoba MW, Sanders ME, Luce GEG, et al. Functional evidence that intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) is a ligand
for LFA-1 dependent adhesion in T cell-mediated cytotoxity. Eur J Immunol, 1988;18(4):637-640
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3 Volpes R, van den Oord TT, Desmet VJ. Hepatic expression of intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) in viral
hepatitis B. Hepatology, 1990;12(1): 148-154
4 全国病毒性肝炎专题学术会议.病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，1991；9(1)：52-60
5 Chu CM, Liaw YF. Coexpression of intercellular adhesion molecule-1 and class Ⅰ major histocompatibility complex antigens
on hepatocyte membrane in chronic viral hepatitis. J Clin Pathol, 1993;46(11):1004-1008
, http://www.100md.com
6 Boyd AW, Wawryk SO, Burns GF, et al. Intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) has a central role in cell-cell
contact-mediated immune mechanisms. Proc natl Acad Sci USA, 1988;85(9):3095-3099
7 Volpes R, van den Oord TT, Desmet VJ. Immunohistochemical study of adhesion molecules in liver inflammation.
Hepatology, 1990;12(1):59-658 Dang LH, Michalek MT, Takeif, et al. Role of ICAM-1 in antigen presentation
demonstrated by ICAM-1 defective mutants. J Immunol, 1990;144(11):4082-4091, 百拇医药(余永胜1 侯英勇2 张瑞云3 张宝玉3 张琴冈4 潘沛恩1)