扶正抗癌冲剂对体外胃癌细胞的抑制作用研究
1上海第二医科大学附属瑞金医院消化内科 上海市 200025
2上海市第六人民医院内科
3上海第二医科大学上海市免疫研究所
王冠庭，男，江苏省建湖县人，汉族.1958年8月于青岛医学 院(原山东大学医学院)医疗系毕业，现任上海瑞金医院消化内科教授、主任医师，主要从事 消化内科疑难疾病诊治和中西医结合治疗胃癌的临床与实验研究.发表论文80篇，主编《中西医结合实用消化病学》、《中西医结合实用消化系肿瘤学》和《肿瘤药膳》三部.参编《临床胃肠病学》等10部.
项目负责人:王冠庭，上海市瑞金二路197号
Tel:021-64370045，Fax:021-64829017
, http://www.100md.com
收稿日期:1995-09-10 接受日期:1996-03-05
Studies on suppressive effects of Fu Zheng anti-cancer infusion on gastric cancer cells in vitro
Guan-Ting Wang1, Jin-Shui Zhu2, Wen-Yu Xu3 and Yong Wang3
1Department of Digestive Medicine, Rui Jin Hospital, Shanghai, 2nd Medical University, Shanghai 200025, China
2Department of Medicine, Shanghai Municipal 6th People′s Hospital, Shanghai
, 百拇医药
3The Institute of Immunology, Shanghai Second Medical University
Abstract
AIM To evaluate the suppressive and killing effects of Fu Zh eng anti-cancer infusion on gastric cancer cells in vitro.
METHODS The suppressive effects of Fu Zheng anti-cancer infusi on on three gastric cancer cell lines, MKN-45 (poorly differentiated), MKN-28 (highly differentiated) and SGC-7901 were formulated. Mitomycin C suppressive group and culture fluid plus normal saline group served as controls.
, 百拇医药
RESULTS Fu Zheng anti-cancer infusion had some suppressive eff ects in three gastric cancer cell lines, and the most obvious suppressive effect was found in MKN45 group. The suppression was strongest in 48 hours with a 1 ∶2 diluted solution. The suppressive effect reached 74.7%, even 120 hours late r, which was still maintained at 71.0%. The suppressive effect was less than that of mitomycin C, but statistical difference was significant as compared with the control group (P<0.05). No statistical difference was found in MKN-28 and SGC-7901 groups, even though th e suppressive effect existed, due to the changes of the cancer cell structure, because in MKN-45 cancer cell lines swelling mitochondria, fatty vacuolation in plasma and shrunk nucleus were observed under electric microscope.
, 百拇医药
CONCLUSION Fu Zheng anti-cancer infusion has a strong suppressive and killing effect in MKN-45 poorly differentiated gastric cancer cells in vitro by means of changing the cancer cell structure.
Subject headings Stomach neoplasms/zhong yi yao liao fa;Antipyretic_detoxicate drugs/therapeutic use;Antineoplastic agents (TCD)therapeutic use; Tumor cells, cultured/drug effects
摘要
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目的 研究中药扶正抗癌冲剂对体外胃癌细胞有无直接抑制或杀伤作用.
方法 采用体外培养的MKN-45，MKN-28及SGC-7901三种胃癌细胞株，以扶正抗癌冲剂配制药液(161.5mg/ml含量)的不同稀释度，对3种胃癌细胞体外作用观察， 并设丝裂霉素阳性对照组及单纯培养液加生理盐水阴性对照组.
结果 扶正抗癌冲剂对3种胃癌细胞株均有一定抑制作用，对低分化MKN-4 5胃癌细胞抑制作用最明显，在1:2稀释度48h抑制作用最强，抑制率达74.7%，持续到120h抑制率仍在71.0%，与正常对照组比较有显著差异(P<0.05).在电镜下观察被抑制的MKN-45胃癌细胞发生线粒体肿胀、内质网水肿、胞浆脂肪空泡样变性、核仁缩小等变化.
结论 扶正抗癌冲剂对MKN-45低分化胃癌细胞有较强的抑制和杀伤作用， 并能使胃癌细胞结构改变.
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主题词 胃肿瘤/中医药疗法;清热解毒药/治疗应用;抗肿瘤药[剂](中药)/治疗应用;肿瘤细胞，培养的/药物作用
王冠庭,朱金水,徐文玉,王易.扶正抗癌冲剂对体外胃癌细胞的抑制作用研究.新消化病学杂志, 1997；5(3)：148-149
扶正抗癌冲剂系由中药扶正培本与清热解毒抗癌药物所组成，经10余年临床实践，证明 该药对胃癌有较好疗效[1]，特别是能提高胃癌患者细胞免疫功能和细胞免疫调节 因子水平，增强机体抗癌能力[2-3]，对SGC-7901胃癌细胞的裸鼠动物模型示有明显的抑制作用.为了进一步证实扶正抗癌冲剂对胃癌的疗效及研究其作用机理，鄄於晕赴赴有无直接抑制或杀伤作用.为此，作者采用体外培养的MKN-45，MKN-28及SGC-7901三种胃癌细胞株，以扶正抗癌冲剂药液不同稀释度，进行对3种胃癌细胞体外作用观察，并设丝裂霉素阳性对照组，单纯细胞培养液和细胞培养液加生理盐水为阴性对照组，以观察对胃癌细胞的直接作用，并探讨其作用机理.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 ①胃癌细胞株：3种胃癌细胞株为MKN_45(低分化)，MKN-28(高分化)，由日本引进；SGC-790 1(中分化)，由上海市肿瘤病研究所提供，均为贴壁生长胃癌细胞.癌细胞培养液：RP MI1640(日本株式会社产品)另加Hepes(美国sigma公司产品)10mmol， 谷氨酰胺2mmol，青霉素100U/ml， 链霉素100U/ml.并按15%比例加 入灭活新小牛血清(上海高教所产品)制成.
1.2 方法 在无菌条件下，分别将3株胃癌细胞以1×106/ml细胞密度移入培养瓶，置37℃，5% CO2 的孵箱中培养72h；每隔72h换细胞培养液1次，以接代传递繁殖进行体外抑制试验.扶正抗癌冲剂药液配制：经上海第二医科大学传统医药研究中心制成无菌等渗透明药 液，采用等渗生理盐水配制，含原冲剂浓度为161.5mg/100ml，渗透压为286m osm/L， 经加热100℃煮沸、过滤、消毒制成.实验在96孔培养板上进行，待癌细胞株生长至 (2～3)×106/ml密度时，分别加入96培养板孔内100μl，起始癌细胞数为每孔1×104 ，培养24h后，癌细胞成倍生长，然后分别加入扶正抗癌冲剂药液(161.5mg/100ml含 量)100μl，观察对胃癌细胞的直接作用；丝裂霉素(Mitomycin_C)0.1mg/ml 100μl, 作为阳性对照组；RPMI 1640培养液组(即正常癌细胞生长组)100μl及RPMI 1640加生理盐水100μl作为阴性对照组.每组分别为5孔×4次，最后取4次 的细胞平均数.在37℃，5% CO2孵箱培养至120h，观察各孔不同癌细胞生长情况， 和不同浓度的扶正抗癌药液对癌细胞抑制作用，并以电子显微镜观察癌细胞结构变化.
, 百拇医药
2 结果 (图1，2，3)
结果表明，扶正抗癌冲剂药液对MKN-45，MKN-28及SGC-7901 3株胃癌细胞作用强度不同 ，均有一定抑制作用，但对低分化MKN-45癌细胞株抑制作用最明显，在1:2稀释度，48h抑制作用为最强，抑制率达74.7%，持续至120h抑制率仍在71.0%.与丝裂霉 素组比较抑制作用虽没有那样明显，但与培养液对照组及培养液加生理盐水组比较 有显著差异(P<0.05).扶正抗癌配制液1:2浓度对MKN-28, SGC-7901 二株胃癌细胞虽有一定抑制作用，但无统计学意义.在电镜下观察被抑制的MKN-45胃癌细胞发生线粒体肿胀 、内质网水肿、胞浆脂肪空泡样变性及核仁缩小等结构变化.
图1 不同稀释度的扶正抗癌冲剂对体外MKN-45细胞生长抑制作用
图2 不同稀释度的扶正抗癌冲剂对体外MKN-45细胞生长抑制作用
, 百拇医药
图3 不同稀释度的扶正抗癌冲剂对体外MKN-45细胞生长的影响
3 讨论
本实验表明，扶正抗癌冲剂配制液对体外胃癌细胞有直接抑制作用，对MKN.45低分化胃癌 细胞作用最强，与对照组比较有显著差异.在实验过程中，由于原扶正抗癌冲剂配制液的pH值为6.2，不能 直接加入癌细胞培养液中，培养条件要求pH为7.2～7.4环境，故其稀释度从1:2开始至 1:32，从不同稀释度扶正抗癌冲剂药液对MKN-48抑制作用来看，以1:2稀释度作用最强，在48h抑制率达74.7%，持续到120h抑制率仍在71.0%，然而 随着其稀释浓度逐渐减少至1:32时，则抑制率减弱至27.9%，说明扶正抗癌冲剂药液的抑癌作用与不同浓度有关，在浓度较高时作用明显.扶正抗癌冲剂药液是以等渗生理盐水配 制，为了排除生理盐水对癌细胞生长影响，故设正常细胞培养加生理盐水阴性对照组，结果 说明该药的体外抑癌作用也排除生理盐水因素.此外，看到不同浓度(1:2～1:32)的抑癌 作用，开始时抑制作用较明显，但随着培养时间延长(24h～120h)，癌细胞生长有逐渐回升趋势，这可能扶正抗癌冲剂药液中有些扶正固本药物含有糖甙、蛋白、氨基酸等成分，当抗癌有效成分作用减弱时，可能有利于癌细胞在体外培养液中复活繁殖，而这 些药物在体内主要能增强机体免疫功能，提高机体抗癌能力，在体外试验中这一作用则不可 能实现.特别有兴趣的是扶正抗癌冲剂药液对3种胃癌细胞株抑制作用不同，其中对恶性程度 最高的低分化胃癌细胞MKN_45抑制作用最强，对高分化MKN-28和中分化的SGC-7901胃癌细 胞作用较弱，说明该药对不同类型的胃癌细胞作用不一，而在临床上低分化型的胃癌较分 化好的胃癌恶性程度高，预后差，该药对低分化癌效果好，更有利于临床用于低分化胃癌患 者的治疗.从被抑制的MKN-45胃癌细胞在电子显微镜下观察其结构来看，显示胃癌细胞出现线粒体肿胀、内质网水肿，胞浆脂肪空泡样变性及核仁缩小等变化，但未见癌细胞坏死，破坏现象，说明该药能使癌细胞结构发生改变，从而起到直接抑制和杀伤作用.作者曾以“扶正抗癌方”对小鼠移植性艾氏腹水瘤作用观察，以流式细胞仪检测腹水中瘤细胞的性质和数量变化，结果治疗组腹水中细胞多转为正常细胞，而对照组腹水中多为 异常瘤细胞，说明该药对正常细胞有一定保护和促进生长作用，并有抑制或杀灭肿瘤细胞作 用.本实验在体外直接观察到使胃癌细胞发生结构改变，为此，作者提出设想，该药对胃癌细胞除有直接抑制作用外，有可能诱导或促使癌细胞DNA和基因的变化，向正常细胞逆转作用，这是值得进一步深 入研究的课题.
4 参考文献1 王冠庭，张霭梅，矫桂穑，等.扶正抗癌方为主结合化疗对158例术后晚期胃癌的治疗及实验研究.
中西医结合杂志，1990；12(10)：712-716
2 王冠庭，朱金水，徐家裕.晚期胃癌患者外周血T细胞亚群.NK细胞和干扰素活性检测.上海医学，1995：12(2)：109-110
3 朱金水，徐家裕，王冠庭.细胞水平与晚期胃癌患者治疗及预后相关研究.中华微生物学和免疫学杂志，1995；15(1)：49-52, 百拇医药
2上海市第六人民医院内科
3上海第二医科大学上海市免疫研究所
王冠庭，男，江苏省建湖县人，汉族.1958年8月于青岛医学 院(原山东大学医学院)医疗系毕业，现任上海瑞金医院消化内科教授、主任医师，主要从事 消化内科疑难疾病诊治和中西医结合治疗胃癌的临床与实验研究.发表论文80篇，主编《中西医结合实用消化病学》、《中西医结合实用消化系肿瘤学》和《肿瘤药膳》三部.参编《临床胃肠病学》等10部.
项目负责人:王冠庭，上海市瑞金二路197号
Tel:021-64370045，Fax:021-64829017
, http://www.100md.com
收稿日期:1995-09-10 接受日期:1996-03-05
Studies on suppressive effects of Fu Zheng anti-cancer infusion on gastric cancer cells in vitro
Guan-Ting Wang1, Jin-Shui Zhu2, Wen-Yu Xu3 and Yong Wang3
1Department of Digestive Medicine, Rui Jin Hospital, Shanghai, 2nd Medical University, Shanghai 200025, China
2Department of Medicine, Shanghai Municipal 6th People′s Hospital, Shanghai
, 百拇医药
3The Institute of Immunology, Shanghai Second Medical University
Abstract
AIM To evaluate the suppressive and killing effects of Fu Zh eng anti-cancer infusion on gastric cancer cells in vitro.
METHODS The suppressive effects of Fu Zheng anti-cancer infusi on on three gastric cancer cell lines, MKN-45 (poorly differentiated), MKN-28 (highly differentiated) and SGC-7901 were formulated. Mitomycin C suppressive group and culture fluid plus normal saline group served as controls.
, 百拇医药
RESULTS Fu Zheng anti-cancer infusion had some suppressive eff ects in three gastric cancer cell lines, and the most obvious suppressive effect was found in MKN45 group. The suppression was strongest in 48 hours with a 1 ∶2 diluted solution. The suppressive effect reached 74.7%, even 120 hours late r, which was still maintained at 71.0%. The suppressive effect was less than that of mitomycin C, but statistical difference was significant as compared with the control group (P<0.05). No statistical difference was found in MKN-28 and SGC-7901 groups, even though th e suppressive effect existed, due to the changes of the cancer cell structure, because in MKN-45 cancer cell lines swelling mitochondria, fatty vacuolation in plasma and shrunk nucleus were observed under electric microscope.
, 百拇医药
CONCLUSION Fu Zheng anti-cancer infusion has a strong suppressive and killing effect in MKN-45 poorly differentiated gastric cancer cells in vitro by means of changing the cancer cell structure.
Subject headings Stomach neoplasms/zhong yi yao liao fa;Antipyretic_detoxicate drugs/therapeutic use;Antineoplastic agents (TCD)therapeutic use; Tumor cells, cultured/drug effects
摘要
, http://www.100md.com
目的 研究中药扶正抗癌冲剂对体外胃癌细胞有无直接抑制或杀伤作用.
方法 采用体外培养的MKN-45，MKN-28及SGC-7901三种胃癌细胞株，以扶正抗癌冲剂配制药液(161.5mg/ml含量)的不同稀释度，对3种胃癌细胞体外作用观察， 并设丝裂霉素阳性对照组及单纯培养液加生理盐水阴性对照组.
结果 扶正抗癌冲剂对3种胃癌细胞株均有一定抑制作用，对低分化MKN-4 5胃癌细胞抑制作用最明显，在1:2稀释度48h抑制作用最强，抑制率达74.7%，持续到120h抑制率仍在71.0%，与正常对照组比较有显著差异(P<0.05).在电镜下观察被抑制的MKN-45胃癌细胞发生线粒体肿胀、内质网水肿、胞浆脂肪空泡样变性、核仁缩小等变化.
结论 扶正抗癌冲剂对MKN-45低分化胃癌细胞有较强的抑制和杀伤作用， 并能使胃癌细胞结构改变.
, http://www.100md.com
主题词 胃肿瘤/中医药疗法;清热解毒药/治疗应用;抗肿瘤药[剂](中药)/治疗应用;肿瘤细胞，培养的/药物作用
王冠庭,朱金水,徐文玉,王易.扶正抗癌冲剂对体外胃癌细胞的抑制作用研究.新消化病学杂志, 1997；5(3)：148-149
扶正抗癌冲剂系由中药扶正培本与清热解毒抗癌药物所组成，经10余年临床实践，证明 该药对胃癌有较好疗效[1]，特别是能提高胃癌患者细胞免疫功能和细胞免疫调节 因子水平，增强机体抗癌能力[2-3]，对SGC-7901胃癌细胞的裸鼠动物模型示有明显的抑制作用.为了进一步证实扶正抗癌冲剂对胃癌的疗效及研究其作用机理，鄄於晕赴赴有无直接抑制或杀伤作用.为此，作者采用体外培养的MKN-45，MKN-28及SGC-7901三种胃癌细胞株，以扶正抗癌冲剂药液不同稀释度，进行对3种胃癌细胞体外作用观察，并设丝裂霉素阳性对照组，单纯细胞培养液和细胞培养液加生理盐水为阴性对照组，以观察对胃癌细胞的直接作用，并探讨其作用机理.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 ①胃癌细胞株：3种胃癌细胞株为MKN_45(低分化)，MKN-28(高分化)，由日本引进；SGC-790 1(中分化)，由上海市肿瘤病研究所提供，均为贴壁生长胃癌细胞.癌细胞培养液：RP MI1640(日本株式会社产品)另加Hepes(美国sigma公司产品)10mmol， 谷氨酰胺2mmol，青霉素100U/ml， 链霉素100U/ml.并按15%比例加 入灭活新小牛血清(上海高教所产品)制成.
1.2 方法 在无菌条件下，分别将3株胃癌细胞以1×106/ml细胞密度移入培养瓶，置37℃，5% CO2 的孵箱中培养72h；每隔72h换细胞培养液1次，以接代传递繁殖进行体外抑制试验.扶正抗癌冲剂药液配制：经上海第二医科大学传统医药研究中心制成无菌等渗透明药 液，采用等渗生理盐水配制，含原冲剂浓度为161.5mg/100ml，渗透压为286m osm/L， 经加热100℃煮沸、过滤、消毒制成.实验在96孔培养板上进行，待癌细胞株生长至 (2～3)×106/ml密度时，分别加入96培养板孔内100μl，起始癌细胞数为每孔1×104 ，培养24h后，癌细胞成倍生长，然后分别加入扶正抗癌冲剂药液(161.5mg/100ml含 量)100μl，观察对胃癌细胞的直接作用；丝裂霉素(Mitomycin_C)0.1mg/ml 100μl, 作为阳性对照组；RPMI 1640培养液组(即正常癌细胞生长组)100μl及RPMI 1640加生理盐水100μl作为阴性对照组.每组分别为5孔×4次，最后取4次 的细胞平均数.在37℃，5% CO2孵箱培养至120h，观察各孔不同癌细胞生长情况， 和不同浓度的扶正抗癌药液对癌细胞抑制作用，并以电子显微镜观察癌细胞结构变化.
, 百拇医药
2 结果 (图1，2，3)
结果表明，扶正抗癌冲剂药液对MKN-45，MKN-28及SGC-7901 3株胃癌细胞作用强度不同 ，均有一定抑制作用，但对低分化MKN-45癌细胞株抑制作用最明显，在1:2稀释度，48h抑制作用为最强，抑制率达74.7%，持续至120h抑制率仍在71.0%.与丝裂霉 素组比较抑制作用虽没有那样明显，但与培养液对照组及培养液加生理盐水组比较 有显著差异(P<0.05).扶正抗癌配制液1:2浓度对MKN-28, SGC-7901 二株胃癌细胞虽有一定抑制作用，但无统计学意义.在电镜下观察被抑制的MKN-45胃癌细胞发生线粒体肿胀 、内质网水肿、胞浆脂肪空泡样变性及核仁缩小等结构变化.
图1 不同稀释度的扶正抗癌冲剂对体外MKN-45细胞生长抑制作用
图2 不同稀释度的扶正抗癌冲剂对体外MKN-45细胞生长抑制作用
, 百拇医药
图3 不同稀释度的扶正抗癌冲剂对体外MKN-45细胞生长的影响
3 讨论
本实验表明，扶正抗癌冲剂配制液对体外胃癌细胞有直接抑制作用，对MKN.45低分化胃癌 细胞作用最强，与对照组比较有显著差异.在实验过程中，由于原扶正抗癌冲剂配制液的pH值为6.2，不能 直接加入癌细胞培养液中，培养条件要求pH为7.2～7.4环境，故其稀释度从1:2开始至 1:32，从不同稀释度扶正抗癌冲剂药液对MKN-48抑制作用来看，以1:2稀释度作用最强，在48h抑制率达74.7%，持续到120h抑制率仍在71.0%，然而 随着其稀释浓度逐渐减少至1:32时，则抑制率减弱至27.9%，说明扶正抗癌冲剂药液的抑癌作用与不同浓度有关，在浓度较高时作用明显.扶正抗癌冲剂药液是以等渗生理盐水配 制，为了排除生理盐水对癌细胞生长影响，故设正常细胞培养加生理盐水阴性对照组，结果 说明该药的体外抑癌作用也排除生理盐水因素.此外，看到不同浓度(1:2～1:32)的抑癌 作用，开始时抑制作用较明显，但随着培养时间延长(24h～120h)，癌细胞生长有逐渐回升趋势，这可能扶正抗癌冲剂药液中有些扶正固本药物含有糖甙、蛋白、氨基酸等成分，当抗癌有效成分作用减弱时，可能有利于癌细胞在体外培养液中复活繁殖，而这 些药物在体内主要能增强机体免疫功能，提高机体抗癌能力，在体外试验中这一作用则不可 能实现.特别有兴趣的是扶正抗癌冲剂药液对3种胃癌细胞株抑制作用不同，其中对恶性程度 最高的低分化胃癌细胞MKN_45抑制作用最强，对高分化MKN-28和中分化的SGC-7901胃癌细 胞作用较弱，说明该药对不同类型的胃癌细胞作用不一，而在临床上低分化型的胃癌较分 化好的胃癌恶性程度高，预后差，该药对低分化癌效果好，更有利于临床用于低分化胃癌患 者的治疗.从被抑制的MKN-45胃癌细胞在电子显微镜下观察其结构来看，显示胃癌细胞出现线粒体肿胀、内质网水肿，胞浆脂肪空泡样变性及核仁缩小等变化，但未见癌细胞坏死，破坏现象，说明该药能使癌细胞结构发生改变，从而起到直接抑制和杀伤作用.作者曾以“扶正抗癌方”对小鼠移植性艾氏腹水瘤作用观察，以流式细胞仪检测腹水中瘤细胞的性质和数量变化，结果治疗组腹水中细胞多转为正常细胞，而对照组腹水中多为 异常瘤细胞，说明该药对正常细胞有一定保护和促进生长作用，并有抑制或杀灭肿瘤细胞作 用.本实验在体外直接观察到使胃癌细胞发生结构改变，为此，作者提出设想，该药对胃癌细胞除有直接抑制作用外，有可能诱导或促使癌细胞DNA和基因的变化，向正常细胞逆转作用，这是值得进一步深 入研究的课题.
4 参考文献1 王冠庭，张霭梅，矫桂穑，等.扶正抗癌方为主结合化疗对158例术后晚期胃癌的治疗及实验研究.
中西医结合杂志，1990；12(10)：712-716
2 王冠庭，朱金水，徐家裕.晚期胃癌患者外周血T细胞亚群.NK细胞和干扰素活性检测.上海医学，1995：12(2)：109-110
3 朱金水，徐家裕，王冠庭.细胞水平与晚期胃癌患者治疗及预后相关研究.中华微生物学和免疫学杂志，1995；15(1)：49-52, 百拇医药