胃癌及癌前病变组织中c_erbB_2癌基因产物的表达
洛阳医学专科学校 1附属医院病理科
2组胚教研室 河南省洛阳市471003
3上海医科 大学肿瘤医院
米建强，男，1962-03-09生，河北省邱县人，汉族.1992年上海医科大学肿瘤病理硕士研究生毕业，病理科副主任医师.主要从事胃癌及胃癌前 病变发病机理及防治研究，发表论文20篇
Telephone:0379-4901440 -2247
项目负责人：米建强.河南省洛阳市景华路24号.
收稿日期： 1996-02-26 接受日期： 1996-08-12
, http://www.100md.com
The expression of c-erbB-2 proto-oncogene product in gastric carcinoma and precancerous lesions
MI JianQiang, YANG ShiQiang and SHEN MingChang
Department of Pathology, Affiliated Hospital of Luoyang Medical School, Luoyang 471003, Henan Province, China
AbstractAIM To study the relationship of expression of c-erbB-2 proto-oncogene product with gastric mucosal carcinogenesis and behavior of gastric carcinoma.
, 百拇医药
METHODS Nine normal gastric mucosas, 23 gastric mucosal dysplasias (included 10 slight,6 moderate and severe dysplasias), 18 early gastric carcinomas and 30 advanced gastric carcinomas were marked with the monoclonal antibody to P185 by using immunohistochemical ABC method. The r elations of P185 expression with the histologic type, the size and the lymph node metastasis of gastric carcinoma were analysed in the study.
RESULTS Normal gastric mucosa was negative for P185, only a few cells in the neck region of mucosal glands were very weak positive. Relat ively high positive rates were found in slight, moderate and severe dysplasia (50%, 83.3% and 85.7%, respectively). A 22.2% positive rate was found in ear ly gastric carcinoma and 56.7% positive rate in advanced gastric carcinoma. Statistically, the rate s in severe dysplasia and advanced gastric carcinoma were significantly higher t han that in early gastric carcinoma (P<0.05). The rate of group with lymp h node metastasis was significantly higher than that of the group without lymph node metastasis (59.3% vs 23.8%, P<0.05), but the expression of P185 was not related to histological type and size of gastric carcinoma.
, http://www.100md.com
CONCLUSION c-erbB-2 proto-oncogene might participate in the process of gastric mucosal proliferation, renovation and carcinogenesis, and th e gastric carcinoma with the expression of P185 might have a stronger abil ity of infiltration and metastasis.
Subject headings Stomach neoplasms/genetics\ \ Precancerous co nditions/genetics\ \ Proto_oncogene proteins c_erbB_2/metabolism
摘 要目的 探讨c-erbB-2癌基因产物的表达与胃癌发生及胃癌生 物学行为的关系.
, 百拇医药
方法 应用抗c-erbB-2癌基因蛋白(P185)的单克隆抗体，采用 免疫组化ABC方法对正常胃粘膜(n=9)、各级胃粘膜异型增生(轻度n=10,中度n= 6，重度n=7)、早期胃癌(n=18)及进展期胃癌(n=30)进行研究，并与胃癌类型 、大小、有无淋巴结转移等作了比较分?
结果 正常胃粘膜为阴性，仅在腺体颈部偶见P185蛋白的弱阳性表 达.在异型增生病变中则有较高的表达率，并随异型增生程度的增加，表达率逐渐升高，轻 、中、重度异型增生表达率分别为50%，83.3%，85.7%.P185蛋白在早期及进展期胃癌中的表达率分别为22.2%和56.7%.重度异型增生表达率显著高于早期胃癌(P<0.05),进展期胃癌表达率显著高于早期胃癌(P<0.05)，淋巴结转移组的表达率高于淋巴结未转移组(59.3% vs 23.8%，P<0.05)， 但P185蛋白的表达与胃癌组织学类型及胃癌肿块大小无相关性(P>0.05).
, 百拇医药
结论 c-erbB-2癌基因有可能参与正常胃粘膜的增殖、修复及癌变过程 ，P185蛋白阳性的肿瘤可能具有更强的浸润及转移能力.
主题词 胃肿瘤/遗传学;癌前状态/遗传学;原癌基因蛋白质C_erbB_2类/代谢
c_erbB_2癌基因(也称HER_2或neu)的表达产物是一种分子量为185 000的细胞膜受体，简称P185蛋白.研究发现，在许多肿瘤组织中都有此基因的扩增及过度表达[1-2].对胃癌前病变组织中c_erbB_2基因表达的研究报道不多.本研究采用免疫组化ABC方法检测正常胃粘膜、各级胃粘膜异型增生、早期及进展期胃癌组织中P185蛋白的表达，进一步探讨c_erbB_2癌基因产物的表达在胃癌发生及胃癌生物学行为中的意义.
, http://www.100md.com 1 材料和方法
1.1 材料 收集上海医科大学肿瘤医院胃切除标本80例，其中正常胃粘膜9例，胃粘膜轻度异型增生10 例，中度异型增生6例，重度异型增生7例，早期胃癌18例，进展期胃癌30例.所有标本均为10%甲醛固定，常规石蜡包埋.
1.2 方法 采用免疫组化ABC法，第1抗体为美国Oncogene Scince公司提供的抗P185蛋白的单克 隆抗体.具体步骤如下：5μm厚石蜡切片常规脱蜡及水化；0.05%胰蛋白酶消化 20min；TBS洗涤3次；6%正常马血清保护20 min；抗P185蛋白单抗 (工作浓度1.40)孵育30 min后，放入4冰箱过夜；TBS洗涤3次；羊抗鼠IgG血清(工作浓度1:200)孵育60 min；TBS洗涤3次；ABC试剂(浓度1:100)孵育60min；B10 TBS洗涤3次；B11 0.04% DAB显色；B12流水洗涤；B13苏木素复染、常规分化、脱水、透明及封固.用TBS替代P185蛋白单抗作为空白对照.阳性细胞标准：胞膜及胞浆中出现棕黄色颗粒.
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2 结果在正常胃粘膜腺体增殖区-腺体颈部偶见P185蛋白的弱阳性表达，为阴性；在轻、 中、重度异型增生中的阳性率分别为50%，83.3%及85.7%；在早期及进展期胃癌中的阳性率分别为22.2%和56.7%.经统计学分析，三级异型增生阳性 率之间的差异无显著性意义(P>0.05)；重度异型增生阳性率与早期胃癌相比，差异有显著性(P<0.05)；进展期胃癌的阳性率显高于早期胃著癌(P<0.05，表1).在组织学类型上，根据Lauren分型，将胃癌分为肠型胃癌及弥漫 型胃癌两型，两者的阳性率分别为51.9%(14/27)和33.3%(7/21)，两者相比无显著性差异(P>0.05).将胃癌有无淋巴结转移分为两组，分别为59.3%(16/27)和23.8%(5/21) ，淋巴结转移组的阳性率高于淋巴结未转移组，差异有显著性意义(P <0.05).按胃癌肿块最大直径<5 cm或≥5 cm分为两组，P185蛋白在后一组中的阳性率高于前一组，分别为32.0%(8/25)和56.5%(13/23)，但统计学差异 无显著性意义(P>0.05).在分布上，P185蛋白在异型增生中主要定位于细胞浆 ，胞膜上也见少量表达，且分布有一定极性，即主要分布于腺体的腔缘侧胞浆及胞膜中.而早期及进展期胃癌主要为胞膜强阳性表达，且分布无一定极性.
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表1 P185蛋白在正常胃粘膜及其病变中的阳性表达
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aP<0.05 vs .6.
3 讨论
3.1 P185蛋白表达与胃癌发生 P185蛋白为一种分布于细胞膜上的受体，由细胞外区、跨膜区及细胞内区3部分组成 .研究发现，P185蛋白与EGF_R(表皮生长因子受体)有高度的同源性，已发现EGF_R与肿瘤的产生密切相关[1-3].P185蛋白的作用机制尚未阐明，它可能与未知的配体结合后，通过增加蛋白激酶的活性而促进细胞的分裂、增殖及转化.本研究发现，在正常胃粘膜的腺体增殖区(颈部)有P185蛋白的弱阳性表达，提示 c_erbB_2癌基因可能参与正常胃粘膜的增殖、修复过程；在癌前病变中，P185蛋白的 表 达率随病变的进展呈上升趋势，至重度异型增生达到顶峰.而当胃粘膜发生癌变后，表达率 降至最低点，后随胃癌病变的进展，表达率又有所回升.这一动态变化似乎表明c_erbB_2癌基因与胃粘膜癌变过程有关，在胃粘膜异型增生及胃癌形成中充当一定 角色.重度异型增生的P185表达率明显高于早期胃癌，两者差异有显著性意义，提示P185蛋白可作为对胃粘膜癌前病变进展的监测指标，一旦发现其表达水平下降，提 示有可能已进入癌变阶段，以利于早期胃癌的发现.
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3.2 P185蛋白表达与胃癌生物学行为 研究结果表明，P185蛋白的表达与肿瘤的生物学行为有一定相关性，P185蛋白 表达的肿瘤具有更强的浸润性，更高的淋巴结转移率及更短的生存期.而另一些学者的研究 与之有所不同[2-6].我们的研究结果与前者相似，进展期胃癌的表达率显著高于早期胃癌，差异有显著性意义；淋巴结转移组的表达率显著高于淋巴结未转移组，差异也具有显著性，提示P185蛋白表达的肿瘤可能具有更强的增殖、浸润及转移能力，患者的预后较差，测定肿瘤组织中P185蛋白的表达可作为判断患者预后的一个有用指标.
4 参考文献1 Tal M, Wetzler M, Josefberg Z, et al. Sporadic amplification of t he HER/neu protooncogene in adenocarcinomas of various tissues. Cancer Res, 1988;48(6):1517-1520
, 百拇医药
2 Yonemura Y, Ninomiya I, Ohoyame S, et al. Expression of c_erbB_2 oncoprot ein in gastric carcinoma. Cancer, 1991;67(11):2914-2918
3 Kameda T, Yasui W, Yoshida K, et al. Expression of c_erbB_2 in human gas tric carcinoma: relationship between P185 erbB_2 expression and the gene amplification. Cancer Res, 1990;50(4):8002-8009
4 Jain S, Slamon DJ, Clark GM, et al. c_erbB_2 proto_oncogene expression and its relationship to survival in gastric carcinoma: an immunohistochemical study on archival material. Int J Cancer, 1991;48(2):668-671
, 百拇医药
5 Falck VG, Gullick W. c_erbB_2 oncogene product staining in gastric adenocarci noma: an immunohistochemical study. J Pathol, 1989;159(6):107-111
6 Yonemura Y, Ninomiya I, Yamaguchi A, et al. Evaluation of immunoreactivi ty for c_erbB_2 protein as a marker of poor short term prognosis in gastric canc er. Cancer Res, 1991;51(2):1034-1038, http://www.100md.com(米建强1 杨石强2 沈铭昌3)
2组胚教研室 河南省洛阳市471003
3上海医科 大学肿瘤医院
米建强，男，1962-03-09生，河北省邱县人，汉族.1992年上海医科大学肿瘤病理硕士研究生毕业，病理科副主任医师.主要从事胃癌及胃癌前 病变发病机理及防治研究，发表论文20篇
Telephone:0379-4901440 -2247
项目负责人：米建强.河南省洛阳市景华路24号.
收稿日期： 1996-02-26 接受日期： 1996-08-12
, http://www.100md.com
The expression of c-erbB-2 proto-oncogene product in gastric carcinoma and precancerous lesions
MI JianQiang, YANG ShiQiang and SHEN MingChang
Department of Pathology, Affiliated Hospital of Luoyang Medical School, Luoyang 471003, Henan Province, China
AbstractAIM To study the relationship of expression of c-erbB-2 proto-oncogene product with gastric mucosal carcinogenesis and behavior of gastric carcinoma.
, 百拇医药
METHODS Nine normal gastric mucosas, 23 gastric mucosal dysplasias (included 10 slight,6 moderate and severe dysplasias), 18 early gastric carcinomas and 30 advanced gastric carcinomas were marked with the monoclonal antibody to P185 by using immunohistochemical ABC method. The r elations of P185 expression with the histologic type, the size and the lymph node metastasis of gastric carcinoma were analysed in the study.
RESULTS Normal gastric mucosa was negative for P185, only a few cells in the neck region of mucosal glands were very weak positive. Relat ively high positive rates were found in slight, moderate and severe dysplasia (50%, 83.3% and 85.7%, respectively). A 22.2% positive rate was found in ear ly gastric carcinoma and 56.7% positive rate in advanced gastric carcinoma. Statistically, the rate s in severe dysplasia and advanced gastric carcinoma were significantly higher t han that in early gastric carcinoma (P<0.05). The rate of group with lymp h node metastasis was significantly higher than that of the group without lymph node metastasis (59.3% vs 23.8%, P<0.05), but the expression of P185 was not related to histological type and size of gastric carcinoma.
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CONCLUSION c-erbB-2 proto-oncogene might participate in the process of gastric mucosal proliferation, renovation and carcinogenesis, and th e gastric carcinoma with the expression of P185 might have a stronger abil ity of infiltration and metastasis.
Subject headings Stomach neoplasms/genetics\ \ Precancerous co nditions/genetics\ \ Proto_oncogene proteins c_erbB_2/metabolism
摘 要目的 探讨c-erbB-2癌基因产物的表达与胃癌发生及胃癌生 物学行为的关系.
, 百拇医药
方法 应用抗c-erbB-2癌基因蛋白(P185)的单克隆抗体，采用 免疫组化ABC方法对正常胃粘膜(n=9)、各级胃粘膜异型增生(轻度n=10,中度n= 6，重度n=7)、早期胃癌(n=18)及进展期胃癌(n=30)进行研究，并与胃癌类型 、大小、有无淋巴结转移等作了比较分?
结果 正常胃粘膜为阴性，仅在腺体颈部偶见P185蛋白的弱阳性表 达.在异型增生病变中则有较高的表达率，并随异型增生程度的增加，表达率逐渐升高，轻 、中、重度异型增生表达率分别为50%，83.3%，85.7%.P185蛋白在早期及进展期胃癌中的表达率分别为22.2%和56.7%.重度异型增生表达率显著高于早期胃癌(P<0.05),进展期胃癌表达率显著高于早期胃癌(P<0.05)，淋巴结转移组的表达率高于淋巴结未转移组(59.3% vs 23.8%，P<0.05)， 但P185蛋白的表达与胃癌组织学类型及胃癌肿块大小无相关性(P>0.05).
, 百拇医药
结论 c-erbB-2癌基因有可能参与正常胃粘膜的增殖、修复及癌变过程 ，P185蛋白阳性的肿瘤可能具有更强的浸润及转移能力.
主题词 胃肿瘤/遗传学;癌前状态/遗传学;原癌基因蛋白质C_erbB_2类/代谢
c_erbB_2癌基因(也称HER_2或neu)的表达产物是一种分子量为185 000的细胞膜受体，简称P185蛋白.研究发现，在许多肿瘤组织中都有此基因的扩增及过度表达[1-2].对胃癌前病变组织中c_erbB_2基因表达的研究报道不多.本研究采用免疫组化ABC方法检测正常胃粘膜、各级胃粘膜异型增生、早期及进展期胃癌组织中P185蛋白的表达，进一步探讨c_erbB_2癌基因产物的表达在胃癌发生及胃癌生物学行为中的意义.
, http://www.100md.com 1 材料和方法
1.1 材料 收集上海医科大学肿瘤医院胃切除标本80例，其中正常胃粘膜9例，胃粘膜轻度异型增生10 例，中度异型增生6例，重度异型增生7例，早期胃癌18例，进展期胃癌30例.所有标本均为10%甲醛固定，常规石蜡包埋.
1.2 方法 采用免疫组化ABC法，第1抗体为美国Oncogene Scince公司提供的抗P185蛋白的单克 隆抗体.具体步骤如下：5μm厚石蜡切片常规脱蜡及水化；0.05%胰蛋白酶消化 20min；TBS洗涤3次；6%正常马血清保护20 min；抗P185蛋白单抗 (工作浓度1.40)孵育30 min后，放入4冰箱过夜；TBS洗涤3次；羊抗鼠IgG血清(工作浓度1:200)孵育60 min；TBS洗涤3次；ABC试剂(浓度1:100)孵育60min；B10 TBS洗涤3次；B11 0.04% DAB显色；B12流水洗涤；B13苏木素复染、常规分化、脱水、透明及封固.用TBS替代P185蛋白单抗作为空白对照.阳性细胞标准：胞膜及胞浆中出现棕黄色颗粒.
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2 结果在正常胃粘膜腺体增殖区-腺体颈部偶见P185蛋白的弱阳性表达，为阴性；在轻、 中、重度异型增生中的阳性率分别为50%，83.3%及85.7%；在早期及进展期胃癌中的阳性率分别为22.2%和56.7%.经统计学分析，三级异型增生阳性 率之间的差异无显著性意义(P>0.05)；重度异型增生阳性率与早期胃癌相比，差异有显著性(P<0.05)；进展期胃癌的阳性率显高于早期胃著癌(P<0.05，表1).在组织学类型上，根据Lauren分型，将胃癌分为肠型胃癌及弥漫 型胃癌两型，两者的阳性率分别为51.9%(14/27)和33.3%(7/21)，两者相比无显著性差异(P>0.05).将胃癌有无淋巴结转移分为两组，分别为59.3%(16/27)和23.8%(5/21) ，淋巴结转移组的阳性率高于淋巴结未转移组，差异有显著性意义(P <0.05).按胃癌肿块最大直径<5 cm或≥5 cm分为两组，P185蛋白在后一组中的阳性率高于前一组，分别为32.0%(8/25)和56.5%(13/23)，但统计学差异 无显著性意义(P>0.05).在分布上，P185蛋白在异型增生中主要定位于细胞浆 ，胞膜上也见少量表达，且分布有一定极性，即主要分布于腺体的腔缘侧胞浆及胞膜中.而早期及进展期胃癌主要为胞膜强阳性表达，且分布无一定极性.
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表1 P185蛋白在正常胃粘膜及其病变中的阳性表达
| 组织类型 | n | 阳性例数 | 阳性率(%) |
| 1.正常胃粘膜 | 9 | 0 | 0.0 |
| 2.轻度异型增生 | 10 | 5 | 50.0 |
| 3.中度异型增生 | 6 | 5 | 83.3 |
| 4.重度异型增生 | 7 | 6 | 85.7a |
| 5.早期胃癌 | 18 | 4 | 22.2 |
| 6.进展期胃癌 | 30 | 17 | 56.7a |
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aP<0.05 vs .6.
3 讨论
3.1 P185蛋白表达与胃癌发生 P185蛋白为一种分布于细胞膜上的受体，由细胞外区、跨膜区及细胞内区3部分组成 .研究发现，P185蛋白与EGF_R(表皮生长因子受体)有高度的同源性，已发现EGF_R与肿瘤的产生密切相关[1-3].P185蛋白的作用机制尚未阐明，它可能与未知的配体结合后，通过增加蛋白激酶的活性而促进细胞的分裂、增殖及转化.本研究发现，在正常胃粘膜的腺体增殖区(颈部)有P185蛋白的弱阳性表达，提示 c_erbB_2癌基因可能参与正常胃粘膜的增殖、修复过程；在癌前病变中，P185蛋白的 表 达率随病变的进展呈上升趋势，至重度异型增生达到顶峰.而当胃粘膜发生癌变后，表达率 降至最低点，后随胃癌病变的进展，表达率又有所回升.这一动态变化似乎表明c_erbB_2癌基因与胃粘膜癌变过程有关，在胃粘膜异型增生及胃癌形成中充当一定 角色.重度异型增生的P185表达率明显高于早期胃癌，两者差异有显著性意义，提示P185蛋白可作为对胃粘膜癌前病变进展的监测指标，一旦发现其表达水平下降，提 示有可能已进入癌变阶段，以利于早期胃癌的发现.
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3.2 P185蛋白表达与胃癌生物学行为 研究结果表明，P185蛋白的表达与肿瘤的生物学行为有一定相关性，P185蛋白 表达的肿瘤具有更强的浸润性，更高的淋巴结转移率及更短的生存期.而另一些学者的研究 与之有所不同[2-6].我们的研究结果与前者相似，进展期胃癌的表达率显著高于早期胃癌，差异有显著性意义；淋巴结转移组的表达率显著高于淋巴结未转移组，差异也具有显著性，提示P185蛋白表达的肿瘤可能具有更强的增殖、浸润及转移能力，患者的预后较差，测定肿瘤组织中P185蛋白的表达可作为判断患者预后的一个有用指标.
4 参考文献1 Tal M, Wetzler M, Josefberg Z, et al. Sporadic amplification of t he HER/neu protooncogene in adenocarcinomas of various tissues. Cancer Res, 1988;48(6):1517-1520
, 百拇医药
2 Yonemura Y, Ninomiya I, Ohoyame S, et al. Expression of c_erbB_2 oncoprot ein in gastric carcinoma. Cancer, 1991;67(11):2914-2918
3 Kameda T, Yasui W, Yoshida K, et al. Expression of c_erbB_2 in human gas tric carcinoma: relationship between P185 erbB_2 expression and the gene amplification. Cancer Res, 1990;50(4):8002-8009
4 Jain S, Slamon DJ, Clark GM, et al. c_erbB_2 proto_oncogene expression and its relationship to survival in gastric carcinoma: an immunohistochemical study on archival material. Int J Cancer, 1991;48(2):668-671
, 百拇医药
5 Falck VG, Gullick W. c_erbB_2 oncogene product staining in gastric adenocarci noma: an immunohistochemical study. J Pathol, 1989;159(6):107-111
6 Yonemura Y, Ninomiya I, Yamaguchi A, et al. Evaluation of immunoreactivi ty for c_erbB_2 protein as a marker of poor short term prognosis in gastric canc er. Cancer Res, 1991;51(2):1034-1038, http://www.100md.com(米建强1 杨石强2 沈铭昌3)