维拉帕米对实验性急性胰腺炎的保护作用
苏州医学院附属 1第一医院内科 2药理研究所 江苏省苏州市 215006
许春芳，男，1964-03-04生，江苏省宜兴市人，汉族.1987年苏州医学院医学系本科毕业，1993年获内科学医学硕士学位，主治医师、讲师，主 要从事消化临床及急性胰腺炎防治的研究，发表论文7篇.
项目负责人 许春芳，江苏省苏州市十梓街96号.
Tel: 0512-5306783收搞日期 1996-04-04 接受日期 1996-06-21
Protective effect of verapamil on experimental acute pancreatitis
, 百拇医药
Chun-Fang Xu1, Wen-Ping Jiang1, Yan-Lang Cai1, Yong-Kang Zhang1 and Shi-Zeng Liu21Department of Internal Medicine, First Affiliated Hospital and
2Department of Pharmacology, Suzhou Medical College, Suzhou 215006, Jiangsu Province, China
Abstract
AIM To evaluate the protective effect of verapamil on experimental acute pancreatitis (AP).
, 百拇医药
METHODS Twenty-two Wistar rats were randomly assigned into thr ee groups: pseudo-operation group (n=5), AP group (n=7) and verapamil- protection group (n=10). AP model was induced by injecting 2.0% sodium tauro cholate (0.1ml/100g) into the pancreatic-bile duct system in rats. Intrave nous verapamil (1.0mg/kg.h) was infused for 12 hours prior to induction of AP . The serum amylase levels were tested at the time of 0, 6, and 12 hours after i nduction of AP. The pancreatic lesions were evaluated by light and electron micr oscope.
, http://www.100md.com
RESULTS Serum amylase levels were much lower in verapamil-protection group than those in AP group at the time of 6 and 12 hours 〔2113±411 vs 2796±453, 1579±319 vs 2478±378 (IU/L), P<0.01〕. Verapamil treatment definitely improved pancreatic injury including edema (1.00±0.82 vs 3.14±0.69 in scores, P<0.01) and leucocyte infiltration (0.90±0.32 vs 3.00±0.58 in scores, P<0.05).
CONCLUSION Verapamil has a protective action on AP.
, http://www.100md.com
Subject headings Pancreatitis/drug therapy; Acute diseases; Verapamil; Disease models, animal
Xu CF, Jiang WP, Cai YL, Zhang YK, Liu SZ. Protective effect of verapamil on experimental acute pancreatitis.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1997;5(5):295-296
摘 要目的 探讨维拉帕米对实验性急性胰腺炎的保护作用.
, 百拇医药 方法 雄性Wistar大鼠22只，随机分为假手术组(n=5)、急性胰腺炎组(n=7)和维拉帕米保护组(n=10).用2.0%牛胆酸钠溶液0.1ml/100g逆行注入大 鼠胰管内诱导急性胰腺炎.保护组在实验前经颈静脉输注维拉帕米1.0mg/kg·h维持12h .在0，6及12h分别断尾取血1.0ml,测定血清淀粉酶活性.同时，在光镜和电镜下观察各 组胰组织的病理变化.
结果 急性胰腺炎组在6，12h的血清淀粉酶值分别为2796±453和2478±378(IU/L);其组织水肿和炎症细胞渗出评分分别为3.14±0.69和3.00±0.58.维拉帕米保护组在相应时间的血清淀粉酶值仅为2113±411和1579±319(IU/L)；其组织水肿和炎症细胞渗出评分分别为1.00±0.82和0.90±0.32.两组比较，有显著统计学差异(P<0.05或0.01).同时，前者电镜下见线粒体肿胀，内质网囊池扩大，自噬泡增加，而后者各细胞器基本正常.
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结论 维拉帕米对实验性急性胰腺炎具有保护作用.
主题词 胰腺炎/药物疗法 急性病 维拉帕米/治疗应用 疾病模型，动物
许春芳, 蒋文平, 蔡衍郎, 张泳康, 刘世增.维拉帕米对实验性急性胰腺炎的保护作用.新消化病学杂志,1997;5(5):295-296
钙通道阻滞剂维拉帕米对急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)的影响仅见个别报道，且多未涉及作用机制[1].本实验在AP动物模型基础上观察维拉帕米对水肿型AP的保护作用，并对其作用机制作初步探讨.
1 材料和椒1.1 材料 ①动物：雄性Wistar大鼠22只，体重180g～260g，由苏州医学院实验动物中心提供.②试剂：牛胆酸钠系美国Sigma公司产品.实验前用0.9%氯化钠溶液配制成2.0%牛胆酸钠溶液.维拉帕米系德国Knoll产品，临用前用0.9%氯化钠溶液稀释成0.2mg/ml.
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1.2 方法 AP模型制备：大鼠实验前禁食12h，允许饮水.3.0%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹 腔内注射麻醉.参照Aho等[2]的方法，作腹正中切口，用4号头皮针经十二指肠壁 插入胰管开口处，向内逆行注入2.0%牛胆酸钠溶液0.1ml/100g诱导AP.将大鼠随机分成3组.第1组为假手术组(n=5)：剖腹后仅暴露并轻轻翻动胰腺；第2组为AP组(n=7)；第3组为维拉 帕米保护组(n=10)：在诱导AP前经颈静脉输注维拉帕米1.0mg/kg·h维持12h.第1，2组在相应时间输注同容量0.9%氯化 钠溶液.观察指标：各组动物分别在诱导AP前，诱导AP后6、12h，经断尾取血1.0ml.离心(3000r/min)5min后分离血清，-30℃保存，酶法测定血淀粉酶值. 动物在12h后处死，先大体观察胰腺及周围组织有无异常改变，然后取胰组织固定于10%福尔马林中，石蜡包埋，4μm厚切片，HE染色，采用单盲法由病理专家在光镜下统一评定组织水肿程度，中性白细胞渗出数量等.病变分为0～5共6级.另在AP组和维拉帕米保护组中各1例，取小块胰组织用4%冷戊二醛固定，超薄切片，蜡酸铀-枸橼酸铅双重染色，H6000透射电镜观察细胞器的超微结构.
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2 结果
2.1 血清淀粉酶变化 各实验组在诱导AP前，血清淀粉酶接近.诱导AP后6h，血清淀粉酶显著升高，至12h已稍有下降.维拉帕米保护组与AP组比较，其血清淀粉酶有明显下降(表1).
2.2 胰腺病理形态 大体观察：假手术组外观正常.AP组胰腺外观肿胀，质地偏硬.维拉帕米组大致正常.光镜观 察：AP组间质水肿增宽，血管充血和炎症细胞广泛浸润，偶见腺泡有点状坏死.维拉帕米组 胰腺病理改变有明显减轻(表1).电镜观察：AP组胰腺细胞线粒体肿胀，内嵴模糊，内质网囊 池扩大，可见少量自噬囊泡，而保护组其细胞器结构大致正常.
表1 各组血清淀粉酶值和组织评分 (x-±s)
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01，与AP组比较.
3 讨论近年一些学者把AP研究重点放在细胞内变化，尤其是细胞内Ca2+超负荷在AP病理生理 中的作用受到普遍重视.在各种致病因子作用下，细胞膜的完整性受到损害，细胞外Ca 2+可在电化学梯度趋势下，经异常开放的Ca2+通道大量流入细胞，造成胞内Ca 2+超负荷.通过动态观察胰组织中Ca2+含量的变化，发现在AP早期胰组织中就有Ca2+异常积聚现象，并随AP的发展而加重[3]，证实了上述机制的存在. Ca2+病理性内流致细胞损伤机制与Ca2+依赖性磷脂酶A2(PLA2)过分活化有 关[4].PLA2通过降解膜磷脂生成具有细胞毒性的溶血卵磷脂，后者可引起膜结 构排列紊乱和功能障碍.当胰腺细胞内的溶酶体膜受损或破裂时可释出一种蛋白水解酶cathepsin B，该酶可在细胞内直接激活胰蛋白酶原，后者再激活其他酶原引起细胞自身消 化[5].可见，Ca2+超负荷参与了AP的病理生理机制.鉴于胞外Ca2+进 入细胞大多需经膜上的钙通道，因此，钙通道阻滞剂通过阻断Ca2+内流，稳定细胞内Ca2+的微环境，理论上应能减轻细胞损伤.给小鼠连续4d腹腔内注射维拉帕米70μg,140μg或280μg，显示AP胰腺损伤随维拉帕米剂量的增加而依 次减轻.但该药对胆汁反流性AP的影响尚缺乏实验依据.本结果表明，维拉帕米能有效抑制血淀粉酶活性，改善胰腺组织水肿和炎症细胞浸润，保护细胞器免受损伤，呈现良好的细胞-器官保护作用. 维拉帕米的保护机制除能拮抗Ca2+内流外，与其抗缺血效应也有关.AP时胰血流量下降可导致胰血循P又能促进炎症发展[6].维拉 帕米通过直接扩张胰血管和/或稳定前列腺素代谢产物TXA2/PGI2比值，改善了局部微循 环，增加了膜稳定性[7].目前，至少在三种不同的AP模型上[1，7]，维拉帕米等钙阻滞剂均显示了良好的保护作用.由此认为，不同方法诱发AP的最后共同通路可能是Ca2+的异常跨膜内流.因此，早期使用钙阻滞剂，在AP防治中可能具有普遍意 义.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 Regalado-Pareja RI, Pardo-Correcher JM, Diez-Miralles M, et al.The effect of verapamil in experimental acute pancreatitis in the rat.
Rev Esp Enferm Dig, 1992;82(1):35-40
2 Aho HJ, Koskensalo SML, Nevalainen TJ. Experimental pancreatitis in the rat: sodium taurocholate-induced acute hemorrhagic
pancreatitis. Scand J Gastroenterol,1980;15(4):411-416
, http://www.100md.com
3 Rattner DW, Napolitano LM, Corsetti J, et al. Hypocalcemia in experimental pancreatitis occurs independently of changes in serum
nonesterified fatty acid levels. Int J Pancreatol, 1990;6(4):249-262
4 Farber JL. The role of calcium ions in toxic cell injury. Environ Health Perspect, 1990;84(1):107-111
5 Gumaste VV. Role of cathepsin B in the pathogenesis of acute pancreatitis. Gastroenterology, 1994;106(4):1123-1125
6 Kyogoku T, Manabe T, Tobe T. Role of ischemia in acute pancreatitis: Hemorrhagic shock converts edematous pancreatitis to
hemorrhagic pancreatitis in rats. Dig Dis Sci, 1992;37(9):1409-1417
7 沈骥，赵蜀英，滕彩华，等.异搏定对急性胰腺炎大鼠胰腺血流量、血浆血栓素和前列腺素的影响.中华医学杂志，1991；71(9)：488-491, http://www.100md.com(许春芳 蒋文平 蔡衍郎 张泳康 刘世增)
许春芳，男，1964-03-04生，江苏省宜兴市人，汉族.1987年苏州医学院医学系本科毕业，1993年获内科学医学硕士学位，主治医师、讲师，主 要从事消化临床及急性胰腺炎防治的研究，发表论文7篇.
项目负责人 许春芳，江苏省苏州市十梓街96号.
Tel: 0512-5306783收搞日期 1996-04-04 接受日期 1996-06-21
Protective effect of verapamil on experimental acute pancreatitis
, 百拇医药
Chun-Fang Xu1, Wen-Ping Jiang1, Yan-Lang Cai1, Yong-Kang Zhang1 and Shi-Zeng Liu21Department of Internal Medicine, First Affiliated Hospital and
2Department of Pharmacology, Suzhou Medical College, Suzhou 215006, Jiangsu Province, China
Abstract
AIM To evaluate the protective effect of verapamil on experimental acute pancreatitis (AP).
, 百拇医药
METHODS Twenty-two Wistar rats were randomly assigned into thr ee groups: pseudo-operation group (n=5), AP group (n=7) and verapamil- protection group (n=10). AP model was induced by injecting 2.0% sodium tauro cholate (0.1ml/100g) into the pancreatic-bile duct system in rats. Intrave nous verapamil (1.0mg/kg.h) was infused for 12 hours prior to induction of AP . The serum amylase levels were tested at the time of 0, 6, and 12 hours after i nduction of AP. The pancreatic lesions were evaluated by light and electron micr oscope.
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RESULTS Serum amylase levels were much lower in verapamil-protection group than those in AP group at the time of 6 and 12 hours 〔2113±411 vs 2796±453, 1579±319 vs 2478±378 (IU/L), P<0.01〕. Verapamil treatment definitely improved pancreatic injury including edema (1.00±0.82 vs 3.14±0.69 in scores, P<0.01) and leucocyte infiltration (0.90±0.32 vs 3.00±0.58 in scores, P<0.05).
CONCLUSION Verapamil has a protective action on AP.
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Subject headings Pancreatitis/drug therapy; Acute diseases; Verapamil; Disease models, animal
Xu CF, Jiang WP, Cai YL, Zhang YK, Liu SZ. Protective effect of verapamil on experimental acute pancreatitis.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1997;5(5):295-296
摘 要目的 探讨维拉帕米对实验性急性胰腺炎的保护作用.
, 百拇医药 方法 雄性Wistar大鼠22只，随机分为假手术组(n=5)、急性胰腺炎组(n=7)和维拉帕米保护组(n=10).用2.0%牛胆酸钠溶液0.1ml/100g逆行注入大 鼠胰管内诱导急性胰腺炎.保护组在实验前经颈静脉输注维拉帕米1.0mg/kg·h维持12h .在0，6及12h分别断尾取血1.0ml,测定血清淀粉酶活性.同时，在光镜和电镜下观察各 组胰组织的病理变化.
结果 急性胰腺炎组在6，12h的血清淀粉酶值分别为2796±453和2478±378(IU/L);其组织水肿和炎症细胞渗出评分分别为3.14±0.69和3.00±0.58.维拉帕米保护组在相应时间的血清淀粉酶值仅为2113±411和1579±319(IU/L)；其组织水肿和炎症细胞渗出评分分别为1.00±0.82和0.90±0.32.两组比较，有显著统计学差异(P<0.05或0.01).同时，前者电镜下见线粒体肿胀，内质网囊池扩大，自噬泡增加，而后者各细胞器基本正常.
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结论 维拉帕米对实验性急性胰腺炎具有保护作用.
主题词 胰腺炎/药物疗法 急性病 维拉帕米/治疗应用 疾病模型，动物
许春芳, 蒋文平, 蔡衍郎, 张泳康, 刘世增.维拉帕米对实验性急性胰腺炎的保护作用.新消化病学杂志,1997;5(5):295-296
钙通道阻滞剂维拉帕米对急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)的影响仅见个别报道，且多未涉及作用机制[1].本实验在AP动物模型基础上观察维拉帕米对水肿型AP的保护作用，并对其作用机制作初步探讨.
1 材料和椒1.1 材料 ①动物：雄性Wistar大鼠22只，体重180g～260g，由苏州医学院实验动物中心提供.②试剂：牛胆酸钠系美国Sigma公司产品.实验前用0.9%氯化钠溶液配制成2.0%牛胆酸钠溶液.维拉帕米系德国Knoll产品，临用前用0.9%氯化钠溶液稀释成0.2mg/ml.
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1.2 方法 AP模型制备：大鼠实验前禁食12h，允许饮水.3.0%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹 腔内注射麻醉.参照Aho等[2]的方法，作腹正中切口，用4号头皮针经十二指肠壁 插入胰管开口处，向内逆行注入2.0%牛胆酸钠溶液0.1ml/100g诱导AP.将大鼠随机分成3组.第1组为假手术组(n=5)：剖腹后仅暴露并轻轻翻动胰腺；第2组为AP组(n=7)；第3组为维拉 帕米保护组(n=10)：在诱导AP前经颈静脉输注维拉帕米1.0mg/kg·h维持12h.第1，2组在相应时间输注同容量0.9%氯化 钠溶液.观察指标：各组动物分别在诱导AP前，诱导AP后6、12h，经断尾取血1.0ml.离心(3000r/min)5min后分离血清，-30℃保存，酶法测定血淀粉酶值. 动物在12h后处死，先大体观察胰腺及周围组织有无异常改变，然后取胰组织固定于10%福尔马林中，石蜡包埋，4μm厚切片，HE染色，采用单盲法由病理专家在光镜下统一评定组织水肿程度，中性白细胞渗出数量等.病变分为0～5共6级.另在AP组和维拉帕米保护组中各1例，取小块胰组织用4%冷戊二醛固定，超薄切片，蜡酸铀-枸橼酸铅双重染色，H6000透射电镜观察细胞器的超微结构.
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2 结果
2.1 血清淀粉酶变化 各实验组在诱导AP前，血清淀粉酶接近.诱导AP后6h，血清淀粉酶显著升高，至12h已稍有下降.维拉帕米保护组与AP组比较，其血清淀粉酶有明显下降(表1).
2.2 胰腺病理形态 大体观察：假手术组外观正常.AP组胰腺外观肿胀，质地偏硬.维拉帕米组大致正常.光镜观 察：AP组间质水肿增宽，血管充血和炎症细胞广泛浸润，偶见腺泡有点状坏死.维拉帕米组 胰腺病理改变有明显减轻(表1).电镜观察：AP组胰腺细胞线粒体肿胀，内嵴模糊，内质网囊 池扩大，可见少量自噬囊泡，而保护组其细胞器结构大致正常.
表1 各组血清淀粉酶值和组织评分 (x-±s)
| 组别 | n | 血清淀粉酶(IU/L) | 评分 | ||||
| 0h | 6h | 12h | 水肿 | 白细胞渗出 | 坏死 | ||
| 假手术组 | 5 | 1069±145 | 1145±91 | 997±140 | 0.00±0.00 | 0.00±0.00 | 0.00±0.00 |
| AP组 | 7 | 1100±117 | 2796±453 | 2478±378 | 3.14±0.69 | 3.00±0.58 | 0.43±0.65 |
| 保护组 | 10 | 1041±111 | 2113±411b | 1579±319b | 1.00±0.82b | 0.90±0.32 a | 0.00±0.00 |
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01，与AP组比较.
3 讨论近年一些学者把AP研究重点放在细胞内变化，尤其是细胞内Ca2+超负荷在AP病理生理 中的作用受到普遍重视.在各种致病因子作用下，细胞膜的完整性受到损害，细胞外Ca 2+可在电化学梯度趋势下，经异常开放的Ca2+通道大量流入细胞，造成胞内Ca 2+超负荷.通过动态观察胰组织中Ca2+含量的变化，发现在AP早期胰组织中就有Ca2+异常积聚现象，并随AP的发展而加重[3]，证实了上述机制的存在. Ca2+病理性内流致细胞损伤机制与Ca2+依赖性磷脂酶A2(PLA2)过分活化有 关[4].PLA2通过降解膜磷脂生成具有细胞毒性的溶血卵磷脂，后者可引起膜结 构排列紊乱和功能障碍.当胰腺细胞内的溶酶体膜受损或破裂时可释出一种蛋白水解酶cathepsin B，该酶可在细胞内直接激活胰蛋白酶原，后者再激活其他酶原引起细胞自身消 化[5].可见，Ca2+超负荷参与了AP的病理生理机制.鉴于胞外Ca2+进 入细胞大多需经膜上的钙通道，因此，钙通道阻滞剂通过阻断Ca2+内流，稳定细胞内Ca2+的微环境，理论上应能减轻细胞损伤.给小鼠连续4d腹腔内注射维拉帕米70μg,140μg或280μg，显示AP胰腺损伤随维拉帕米剂量的增加而依 次减轻.但该药对胆汁反流性AP的影响尚缺乏实验依据.本结果表明，维拉帕米能有效抑制血淀粉酶活性，改善胰腺组织水肿和炎症细胞浸润，保护细胞器免受损伤，呈现良好的细胞-器官保护作用. 维拉帕米的保护机制除能拮抗Ca2+内流外，与其抗缺血效应也有关.AP时胰血流量下降可导致胰血循P又能促进炎症发展[6].维拉 帕米通过直接扩张胰血管和/或稳定前列腺素代谢产物TXA2/PGI2比值，改善了局部微循 环，增加了膜稳定性[7].目前，至少在三种不同的AP模型上[1，7]，维拉帕米等钙阻滞剂均显示了良好的保护作用.由此认为，不同方法诱发AP的最后共同通路可能是Ca2+的异常跨膜内流.因此，早期使用钙阻滞剂，在AP防治中可能具有普遍意 义.
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4 参考文献1 Regalado-Pareja RI, Pardo-Correcher JM, Diez-Miralles M, et al.The effect of verapamil in experimental acute pancreatitis in the rat.
Rev Esp Enferm Dig, 1992;82(1):35-40
2 Aho HJ, Koskensalo SML, Nevalainen TJ. Experimental pancreatitis in the rat: sodium taurocholate-induced acute hemorrhagic
pancreatitis. Scand J Gastroenterol,1980;15(4):411-416
, http://www.100md.com
3 Rattner DW, Napolitano LM, Corsetti J, et al. Hypocalcemia in experimental pancreatitis occurs independently of changes in serum
nonesterified fatty acid levels. Int J Pancreatol, 1990;6(4):249-262
4 Farber JL. The role of calcium ions in toxic cell injury. Environ Health Perspect, 1990;84(1):107-111
5 Gumaste VV. Role of cathepsin B in the pathogenesis of acute pancreatitis. Gastroenterology, 1994;106(4):1123-1125
6 Kyogoku T, Manabe T, Tobe T. Role of ischemia in acute pancreatitis: Hemorrhagic shock converts edematous pancreatitis to
hemorrhagic pancreatitis in rats. Dig Dis Sci, 1992;37(9):1409-1417
7 沈骥，赵蜀英，滕彩华，等.异搏定对急性胰腺炎大鼠胰腺血流量、血浆血栓素和前列腺素的影响.中华医学杂志，1991；71(9)：488-491, http://www.100md.com(许春芳 蒋文平 蔡衍郎 张泳康 刘世增)