丹参以移植小肠微循环的保护作用
南京军区南京总医院全军普通外科研究所 江苏省南京市 210002
李幼生，男，1963-07-05生，山东莱州市人，汉族. 1986年第二军医大学毕业，主治医师，主要从事小肠移植的研究，发表论文20篇.
项目负责人 李幼生,江苏省南京市中山东路305号.
Tel: 025-4403110.收搞日期 1996-12-16 接受日期 1997-01-25
The protective effect of Salvia miltiorrhiza on microcirculatory permeability of small bowel graft
You_Sheng Li, Jie_Shou Li, Ning Li and Zhi_Wei Jiang
, 百拇医药
Institute of General Surgery, PLA Jinling Hospital, Nanjing 210002, Jiangsu Province, China
Abstract
AIM To investigate the effect of Salvia miltiorrhiza (SM) on microcirculatory permeability of small bowel graft in a swine segmental small bowel autotransplantation model.
METHODS Twelve outbred pigs were divided into two groups. In control group (n=6), graft was preserved with Eurocollins (EC) solution; and in SM group (n=6), graft was preserved with EC solution containing compound SM in jection (20mg/L). The graft was autotransplanted for 24 hour storage at 4℃.Scores of tissue injury and mucosal containment of Evan (microcirculatory permeability) were studied.
, 百拇医药
RESULTS The recipient survival rates were 60% (control group) and 100% (SM group), respectively at 30min after reperfusion, and scores of tissue injury (3.20±0.42 vs 4.65±0.55，P<0.05) and microcirculatory permeability (in μg/g wet weight) 13.675±0.542 vs 20.406±0.459，P<0.01) in graft were significantly lower in SM group than that in control group.
CONCLUSION SM can attenuate endothelial cell injury of graft and reduce microcirculatory permeability.
, http://www.100md.com
Subject headings salvia miltiorrhiza/pharmacology;intestine, small/transplantation;\ intestine, small/blood supply;
microcirculation/drug effects
Li YS, Li JS, Li N,Jiang ZW.The protective effect of Salvia miltiorrhiza on microcirculatory permeability of small bowel graft.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(9):554-555
摘 要
, 百拇医药
目的 观察保存液中加入丹参对低温保存小肠微循环的保护作用.
方法 杂种猪12只，随机分成2组，对照组(n=6)，供肠采用Eurocolli ns(EC)液保存；丹参组(n=6),EC液中加入丹参注射液(20mg/L)，二组供肠均4℃保存24h后自体移植. 观察移植小肠组织损伤和肠粘膜伊文思蓝渗出量(微循环通透性).
结果 再灌注0.5h丹参组肠粘膜组织损伤评分低于对照组(3.20±0.42 vs 4.65±0.55，P<0.05)，微循环通透性(μg/g)较低(13.676±0.542 vs 20.406±0.459，P<0.01).
结论 丹参能有效地抑制低温保存小肠微循环通透性的增加，减轻血管内皮细胞损伤.
, 百拇医药
主题词 丹参/药理学；小肠/移植；小肠/血液供给；微循环/药物作用
李幼生,黎介寿,李宁,江志伟.丹参以移植小肠微循环的保护作用.新消化病学杂志,1997;5(9):554-555
血管内皮细胞完整性决定着低温保存器官移植术后的功能，降低内皮细胞损伤是当前器官保存研究的重点之一，移植器官微循环通透性的变化定量地反映了血管内皮细胞损伤程度. 本研究旨在了解低温保存微循环通透性变化及丹参对其影响.
1 材料和方法1.1 材料 白色杂种猪，体重18.5kg～22.5kg，雌雄不限，术前禁食24h，自由饮水，硫贲妥钠静脉麻醉.
, http://www.100md.com
1.2 方法 采用我们已建立的猪自体节段性小肠移植模型[1]. 解剖出支配回肠末端的肠系膜上动、静脉(SMA，SMV)主干，在SMA分出结肠动脉支后切断SMA，SMV，近端结孔，自SMA远端 插管灌洗4℃的Eurocollins(EC)液(内含肝素200mg/L)，灌洗压力10.8kPa，灌洗时间20min，灌洗液体400ml～500ml足以保证灌洗肠壁至苍白，静脉流出液体澄清. 肠腔以4℃的0.5%甲硝唑溶液灌洗. 切除灌洗不满意的两端肠袢，剩余小肠300cm保 存后行自体移植，供肠SMA，SMV分别与受休SMA，SMV端端吻合，测定微循环通透性后移植小 肠行Thiry_Vella造口. 残余小肠端端吻合. 12只动物随机分成对照组(n=6)和丹参组(n=6)，对照组供肠采用EC液体存24h，丹参组保存液为EC液+复方丹参液(200ml/L，上海第一制药厂)，保存时间为24h(表1). 保存后及再灌注0.5h分别剪 取肠粘膜，10%甲醛固定，石蜡包埋，以6μm厚度切片，HE染色. 采用Parks肠道损伤评分对移植小肠组织结构评分[2]. 移植小肠微循环通透性测定采用伊文思蓝(20mg/kg),血管再通后0.5h切取移植小肠远端(100cm)及其供应此段肠袢的SMA，SMV，经SMA插管灌注室温生理盐水，压力为10.8kPa，灌洗时间至少20min，剪取0.5cm长的肠壁3块，用滤纸吸干水份，称重后置入甲酰胺溶液中，100mg湿组织加1ml甲酰胺溶液. 50℃水浴中放置24h，测定甲酰胺溶液中伊文思蓝浸出量，小肠微循环通透性以肠壁中伊文思蓝漏出量(μg/g湿组织表示)[4]. 统计学处理 数据以x±s表示，t检验统计处理.
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2 结果2.1 受体生存率 对照组1只动物因血管吻合失败而不在继续研究之列.2组供肠保存时间无差异(P>0.05)，移植术后3周受体生存率分别为60%，100%(P>0.05，表1).
2.2 小肠组织学 保存后2组肠粘膜组织评分无差异，再灌注0.5h丹参组移植小肠组织损伤较轻(P<0.05，表2).
表1 小肠保存时间和受体生存率
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表2 小肠组织损伤评分(x±s)
aP<0.05，vs 丹参组.
2.3 小肠微循环通秀性 正常小肠微循环通透性(μg/g湿组织)为1.767±0.235，再灌注0.5h对照组和丹参移植小肠微循环通透性分别为正常的12倍(20.406±0.459，8倍(13.675±0.5)(P<0.01)，丹参组明显低于对照组.
, 百拇医药
3 讨论内皮细胞在器官保存中的作用已引起广泛重视，内皮细胞较实质细胞更易损伤，对缺血的耐受性差. Caldwell_Kenkel等[5]研究发现大鼠肝脏短时间缺血即可见到内皮细胞绒毛坏死，而实质细胞(肝细胞)结构正常，采用EC液保存至24h，移植术后肝脏不能存活，大部分肝细胞具有生存能力，而40%的内皮细胞不能生存，因此，移植肝脏的生存能力与内皮细胞的存活密切相关. Muller等[6]在小肠保存研究中证实血管内皮细胞损伤较肠粘膜上皮细胞损伤严重，但Muller等对如何减轻血管内皮细胞损伤未进行深入研究. 本研究证实猪小肠经4℃EC液保存24h后自体移植，再灌注0.5h肠粘膜微循环通透性是正常小肠的12倍，而在EC液中加入丹参注射液(20mg/L)，可使肠粘膜微循环通透性明显降低，仅为对照组的67%(P<0.01)，术后肠粘膜组织损伤较轻.缺血使血管内皮细胞能量消耗，细胞间连接遭到破坏，促使微循环通透性增加，再灌注时氧自由基会进一步加重血管内皮细胞损伤. Takahashi等[3]观察氧自由基对心脏内皮细胞的损伤作用，自动脉灌注保存液，收集静脉流出液中性粒细胞，血液中的OH- 20%～40%来自血管内皮细胞，在保存液中加入别嘌呤醇能凶制血管内皮细胞自由其生成，抑制中性粒细胞氧自由的释放.本研究证实，丹参具有抑制血管内皮细胞损伤，降低移植小肠微循环通透性的作用，与丹参抑制血小板和中性粒细胞粘附、聚集及氧自由基产生有关，我们既往的研究证实丹参具有维持低温保存小肠能量物质(如ATP)的作用，而ATP对于维持组织细胞完整性具有重要作用. 本研究结果表明，在保存液中加入丹参注射液可以有效地减轻低温保存小肠的组织损伤，抑制微循环通透性的增加.
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4 参考文献1 李幼生，黎介寿，李宁，等. 猪异位节段性小肠移植. 全陵医院学报，1994；7(3)：150-153
2 Park PO,Haglund U, Balkley GB, et al. The sequence of development of intestinal tissue injury after strangulation ischemia and
reperfusion. Surgery, 1990;107(5):574-580
3 Takahashi S, Suzuk S, Takeuchi K, et al. Rolo of endothelial for tissue damage by active oxygen radical in heart_lung transplantatiob.
, 百拇医药
Transplant Proc, 1993;25(1):1676-1677
4 李幼生，李宁，黎介寿，等. 伊文思蓝法测定肠粘膜微循环通透性. 微循环技术杂志，1994；2(1)：24-35
5 Cadwell-kenkel JC, Currin RT, Tanaka Y, et al. Reperfusion injury to endotherial cells following cold ischemic storage of rat liver.
Hepatology, 1989;10(3):292-299
6 Muller AR, Nulesnik M, Platz KP, et al. Evaluation of preservation condit ions and various solution for small bowel preservation.
Transplantation, 1994;57(5):649-655, 百拇医药
李幼生，男，1963-07-05生，山东莱州市人，汉族. 1986年第二军医大学毕业，主治医师，主要从事小肠移植的研究，发表论文20篇.
项目负责人 李幼生,江苏省南京市中山东路305号.
Tel: 025-4403110.收搞日期 1996-12-16 接受日期 1997-01-25
The protective effect of Salvia miltiorrhiza on microcirculatory permeability of small bowel graft
You_Sheng Li, Jie_Shou Li, Ning Li and Zhi_Wei Jiang
, 百拇医药
Institute of General Surgery, PLA Jinling Hospital, Nanjing 210002, Jiangsu Province, China
Abstract
AIM To investigate the effect of Salvia miltiorrhiza (SM) on microcirculatory permeability of small bowel graft in a swine segmental small bowel autotransplantation model.
METHODS Twelve outbred pigs were divided into two groups. In control group (n=6), graft was preserved with Eurocollins (EC) solution; and in SM group (n=6), graft was preserved with EC solution containing compound SM in jection (20mg/L). The graft was autotransplanted for 24 hour storage at 4℃.Scores of tissue injury and mucosal containment of Evan (microcirculatory permeability) were studied.
, 百拇医药
RESULTS The recipient survival rates were 60% (control group) and 100% (SM group), respectively at 30min after reperfusion, and scores of tissue injury (3.20±0.42 vs 4.65±0.55，P<0.05) and microcirculatory permeability (in μg/g wet weight) 13.675±0.542 vs 20.406±0.459，P<0.01) in graft were significantly lower in SM group than that in control group.
CONCLUSION SM can attenuate endothelial cell injury of graft and reduce microcirculatory permeability.
, http://www.100md.com
Subject headings salvia miltiorrhiza/pharmacology;intestine, small/transplantation;\ intestine, small/blood supply;
microcirculation/drug effects
Li YS, Li JS, Li N,Jiang ZW.The protective effect of Salvia miltiorrhiza on microcirculatory permeability of small bowel graft.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(9):554-555
摘 要
, 百拇医药
目的 观察保存液中加入丹参对低温保存小肠微循环的保护作用.
方法 杂种猪12只，随机分成2组，对照组(n=6)，供肠采用Eurocolli ns(EC)液保存；丹参组(n=6),EC液中加入丹参注射液(20mg/L)，二组供肠均4℃保存24h后自体移植. 观察移植小肠组织损伤和肠粘膜伊文思蓝渗出量(微循环通透性).
结果 再灌注0.5h丹参组肠粘膜组织损伤评分低于对照组(3.20±0.42 vs 4.65±0.55，P<0.05)，微循环通透性(μg/g)较低(13.676±0.542 vs 20.406±0.459，P<0.01).
结论 丹参能有效地抑制低温保存小肠微循环通透性的增加，减轻血管内皮细胞损伤.
, 百拇医药
主题词 丹参/药理学；小肠/移植；小肠/血液供给；微循环/药物作用
李幼生,黎介寿,李宁,江志伟.丹参以移植小肠微循环的保护作用.新消化病学杂志,1997;5(9):554-555
血管内皮细胞完整性决定着低温保存器官移植术后的功能，降低内皮细胞损伤是当前器官保存研究的重点之一，移植器官微循环通透性的变化定量地反映了血管内皮细胞损伤程度. 本研究旨在了解低温保存微循环通透性变化及丹参对其影响.
1 材料和方法1.1 材料 白色杂种猪，体重18.5kg～22.5kg，雌雄不限，术前禁食24h，自由饮水，硫贲妥钠静脉麻醉.
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1.2 方法 采用我们已建立的猪自体节段性小肠移植模型[1]. 解剖出支配回肠末端的肠系膜上动、静脉(SMA，SMV)主干，在SMA分出结肠动脉支后切断SMA，SMV，近端结孔，自SMA远端 插管灌洗4℃的Eurocollins(EC)液(内含肝素200mg/L)，灌洗压力10.8kPa，灌洗时间20min，灌洗液体400ml～500ml足以保证灌洗肠壁至苍白，静脉流出液体澄清. 肠腔以4℃的0.5%甲硝唑溶液灌洗. 切除灌洗不满意的两端肠袢，剩余小肠300cm保 存后行自体移植，供肠SMA，SMV分别与受休SMA，SMV端端吻合，测定微循环通透性后移植小 肠行Thiry_Vella造口. 残余小肠端端吻合. 12只动物随机分成对照组(n=6)和丹参组(n=6)，对照组供肠采用EC液体存24h，丹参组保存液为EC液+复方丹参液(200ml/L，上海第一制药厂)，保存时间为24h(表1). 保存后及再灌注0.5h分别剪 取肠粘膜，10%甲醛固定，石蜡包埋，以6μm厚度切片，HE染色. 采用Parks肠道损伤评分对移植小肠组织结构评分[2]. 移植小肠微循环通透性测定采用伊文思蓝(20mg/kg),血管再通后0.5h切取移植小肠远端(100cm)及其供应此段肠袢的SMA，SMV，经SMA插管灌注室温生理盐水，压力为10.8kPa，灌洗时间至少20min，剪取0.5cm长的肠壁3块，用滤纸吸干水份，称重后置入甲酰胺溶液中，100mg湿组织加1ml甲酰胺溶液. 50℃水浴中放置24h，测定甲酰胺溶液中伊文思蓝浸出量，小肠微循环通透性以肠壁中伊文思蓝漏出量(μg/g湿组织表示)[4]. 统计学处理 数据以x±s表示，t检验统计处理.
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2 结果2.1 受体生存率 对照组1只动物因血管吻合失败而不在继续研究之列.2组供肠保存时间无差异(P>0.05)，移植术后3周受体生存率分别为60%，100%(P>0.05，表1).
2.2 小肠组织学 保存后2组肠粘膜组织评分无差异，再灌注0.5h丹参组移植小肠组织损伤较轻(P<0.05，表2).
表1 小肠保存时间和受体生存率
| 分组 | 保存时间(h) | 受体生存率(%) |
| 对照组 | 24.10±0.30 | 3/5(60.0) |
| 丹参组 | 24.25±0.19 | 6/6(100.0) |
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表2 小肠组织损伤评分(x±s)
| 分组 | 保存后 | 再灌注0.5h |
| 对照组 | 2.5±0.55 | 4.6±0.55a |
| 丹参组 | 1.8±0.55 | 3.2±0.42 |
aP<0.05，vs 丹参组.
2.3 小肠微循环通秀性 正常小肠微循环通透性(μg/g湿组织)为1.767±0.235，再灌注0.5h对照组和丹参移植小肠微循环通透性分别为正常的12倍(20.406±0.459，8倍(13.675±0.5)(P<0.01)，丹参组明显低于对照组.
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3 讨论内皮细胞在器官保存中的作用已引起广泛重视，内皮细胞较实质细胞更易损伤，对缺血的耐受性差. Caldwell_Kenkel等[5]研究发现大鼠肝脏短时间缺血即可见到内皮细胞绒毛坏死，而实质细胞(肝细胞)结构正常，采用EC液保存至24h，移植术后肝脏不能存活，大部分肝细胞具有生存能力，而40%的内皮细胞不能生存，因此，移植肝脏的生存能力与内皮细胞的存活密切相关. Muller等[6]在小肠保存研究中证实血管内皮细胞损伤较肠粘膜上皮细胞损伤严重，但Muller等对如何减轻血管内皮细胞损伤未进行深入研究. 本研究证实猪小肠经4℃EC液保存24h后自体移植，再灌注0.5h肠粘膜微循环通透性是正常小肠的12倍，而在EC液中加入丹参注射液(20mg/L)，可使肠粘膜微循环通透性明显降低，仅为对照组的67%(P<0.01)，术后肠粘膜组织损伤较轻.缺血使血管内皮细胞能量消耗，细胞间连接遭到破坏，促使微循环通透性增加，再灌注时氧自由基会进一步加重血管内皮细胞损伤. Takahashi等[3]观察氧自由基对心脏内皮细胞的损伤作用，自动脉灌注保存液，收集静脉流出液中性粒细胞，血液中的OH- 20%～40%来自血管内皮细胞，在保存液中加入别嘌呤醇能凶制血管内皮细胞自由其生成，抑制中性粒细胞氧自由的释放.本研究证实，丹参具有抑制血管内皮细胞损伤，降低移植小肠微循环通透性的作用，与丹参抑制血小板和中性粒细胞粘附、聚集及氧自由基产生有关，我们既往的研究证实丹参具有维持低温保存小肠能量物质(如ATP)的作用，而ATP对于维持组织细胞完整性具有重要作用. 本研究结果表明，在保存液中加入丹参注射液可以有效地减轻低温保存小肠的组织损伤，抑制微循环通透性的增加.
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4 参考文献1 李幼生，黎介寿，李宁，等. 猪异位节段性小肠移植. 全陵医院学报，1994；7(3)：150-153
2 Park PO,Haglund U, Balkley GB, et al. The sequence of development of intestinal tissue injury after strangulation ischemia and
reperfusion. Surgery, 1990;107(5):574-580
3 Takahashi S, Suzuk S, Takeuchi K, et al. Rolo of endothelial for tissue damage by active oxygen radical in heart_lung transplantatiob.
, 百拇医药
Transplant Proc, 1993;25(1):1676-1677
4 李幼生，李宁，黎介寿，等. 伊文思蓝法测定肠粘膜微循环通透性. 微循环技术杂志，1994；2(1)：24-35
5 Cadwell-kenkel JC, Currin RT, Tanaka Y, et al. Reperfusion injury to endotherial cells following cold ischemic storage of rat liver.
Hepatology, 1989;10(3):292-299
6 Muller AR, Nulesnik M, Platz KP, et al. Evaluation of preservation condit ions and various solution for small bowel preservation.
Transplantation, 1994;57(5):649-655, 百拇医药