食管鳞癌中HPV-16E6与p53的表达相关性
1 兰州军区乌鲁木齐总医院病理科 新疆乌鲁木齐 830000
2中国协和医科大学基础医学研究所生物物理研究室
Subject headings esophageal neoplasms/virology; carcinoma, squamous cell/virology; papillomavirus, huamn/genetics; genes, viral; protein p53/metabolism
主题词 食管肿瘤/病毒学；癌，鳞状细胞/病毒学；乳头状瘤病毒，人/遗传学；基因，病毒；蛋白质p53/代谢
中国图书资料分类号 R735.1
, 百拇医药
在病毒与人类肿瘤的关系中，人乳头瘤病毒(HPV)与鳞状细胞癌的密切关系已逐步得到证明，食管鳞状细胞癌中高危HPV16型早期基因E6与p53蛋白的关系尚不清楚，现将研究结果报道如下.
1 材料和方法
1.1 材料 对食管鳞状细胞癌的病理活检或切除组织人乳头瘤病毒多重引物PCR检测阳性的53例标本进行免疫组织化学检测. HPVE6蛋白(HPV-C1P5)、p53蛋白抗体(DO1)以 及ABC-Ki t 试剂盒均购于北京中山生物公司.
1.2 方法 将经PCR检 测HPV阳性的食管鳞状细胞癌标本，常规固定石蜡切片3张，一张HE染色，病理诊断分型. 另2张进行免疫组化E6蛋白和p53蛋白检测. 先进行抗原修复，然后进行微波ABC免疫组化法检测. 光镜观察：以胞核内出现棕黄色颗粒计为阳性，设正常胎儿食管粘膜和非癌食管组织为阴性对照.
, 百拇医药
2 结果
53例多重引物PCR检测HPV阳性的食管鳞癌中，HPV-16型为49.1%，HPV-18型5.6%，HPV-6/11型7.5%；16型和18型DNA同时阳性者20.8%，18和6/11型11.3%，16、18和6/11三者同时阳性5.5%；两个或三个类型的混合感染占37.7%. HPVE6癌基因蛋白免疫组化检测：阳性45例(84.9%)，其中高分化鳞癌4.4%，中分化鳞癌40%，低分化鳞癌55.6%；其表达特征为：阳性颗粒位于胞核内，呈点灶、或全层性分布，以低分化鳞癌的表达强度最高. 正常胎儿和非癌食管鳞状上皮呈阴性. p53蛋白免疫组化检测：阳性37例(69.8%)，其中高分化鳞癌2例，中分化鳞癌14例，低分化鳞癌21例，其表达特征与E6蛋白基本相同，相互间无显著性差异(P>0.05).
3 讨论
, http://www.100md.com
人乳头瘤病毒是一种具有异质性的致瘤病毒，高危组HPV16或18参与鳞状细胞癌发生发展过程. 在HPV16DNA读码框架早期区列的亚基因片段中，E6是致癌的转化基因，编码的核蛋白，属于肿瘤早期特异转化蛋白，具有病毒癌蛋白的生物活性. 我国研究已经证实，88.9%的HPV-16DNA阳性宫颈癌中可以检出E6基因. 在HPV-16导致宫颈癌的过程中，E6基因多位点整合在宿主细胞基因组DNA上，始终完整保留并活跃转录，从而构成宫颈鳞状细胞转化为癌的关键因素[1]. 我国李茵的实验研究已经证实，食管癌组织中HPV以整合状态存在，且整合过程中可能发生某些基因片段的丢失[2]. 本组食管鳞癌组织中，HPVE6蛋白有明显的表达，表明HPVE6基因存在于食管鳞癌细胞核内，并进行复制，参与食管鳞癌的发生发展过程.
近年在对p53蛋白表达的研究中认 为，野生型p53蛋白与一些DNA肿瘤病毒蛋白结合，可以造成p53蛋白的稳定性增加，在细胞内聚集，从而出现免疫组化的高表达；并发现HPV-16/18DNA中的肿瘤基因E6蛋白通过与p53的结合，导致p53出现相反的调节功能[2，3]. 我们在HPV阳性的食管鳞癌中发现p53蛋白和HPVE6蛋白均具有较高的表达率，尤其是二者在低分化鳞癌细胞核内相似的表达特性，显示HPVE6蛋白与p53在食管鳞癌中具有十分紧密的关系. 提示在食管鳞状细胞的恶性转化过程中，HPV-16/18DNAE6蛋白与鳞状上皮细胞内p53蛋白结合，导致p53丧失抑癌功能，获得致癌能力，二者的协同作用引起细胞内正常功能丧失，最终导致细胞癌变. 由此可能存在病毒感染→病毒癌蛋白与抑癌基因蛋白相互作用→抑癌基因功能转换→细胞癌变的结构模式.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 司静懿，李昆. 宫颈癌病毒病因癌变原理的研究. 中华病理学杂志，1993；22(6)：373-375
2 李茵，黄光琦，肖恒怡，等. 食管癌及癌旁组织中人乳头状瘤病毒DNA的存在状态. 华西医科大学学报，1991；22(3)：157-160
3 Scheffner M, Werness BA, Huibregtse JM, et al. The E6 oncoprotein encoded by human papilloma virus type 16 and 18
promotes the degradation of p53. Cell, 1990;63(6):1129-1136
4 Greenblatt MS, Bennett WP, Hollstein M, et al. Mutations in p53 tumor suppressou gene: clues to cancer and etiology
and molecular patholenesis. Cancer Res, 1994;54(9):4855-4878(收稿 1997-04-17 修回 1997-06-15), http://www.100md.com(邹赛英1 唐新萍1 刘旭明1 司静懿2 )
2中国协和医科大学基础医学研究所生物物理研究室
Subject headings esophageal neoplasms/virology; carcinoma, squamous cell/virology; papillomavirus, huamn/genetics; genes, viral; protein p53/metabolism
主题词 食管肿瘤/病毒学；癌，鳞状细胞/病毒学；乳头状瘤病毒，人/遗传学；基因，病毒；蛋白质p53/代谢
中国图书资料分类号 R735.1
, 百拇医药
在病毒与人类肿瘤的关系中，人乳头瘤病毒(HPV)与鳞状细胞癌的密切关系已逐步得到证明，食管鳞状细胞癌中高危HPV16型早期基因E6与p53蛋白的关系尚不清楚，现将研究结果报道如下.
1 材料和方法
1.1 材料 对食管鳞状细胞癌的病理活检或切除组织人乳头瘤病毒多重引物PCR检测阳性的53例标本进行免疫组织化学检测. HPVE6蛋白(HPV-C1P5)、p53蛋白抗体(DO1)以 及ABC-Ki t 试剂盒均购于北京中山生物公司.
1.2 方法 将经PCR检 测HPV阳性的食管鳞状细胞癌标本，常规固定石蜡切片3张，一张HE染色，病理诊断分型. 另2张进行免疫组化E6蛋白和p53蛋白检测. 先进行抗原修复，然后进行微波ABC免疫组化法检测. 光镜观察：以胞核内出现棕黄色颗粒计为阳性，设正常胎儿食管粘膜和非癌食管组织为阴性对照.
, 百拇医药
2 结果
53例多重引物PCR检测HPV阳性的食管鳞癌中，HPV-16型为49.1%，HPV-18型5.6%，HPV-6/11型7.5%；16型和18型DNA同时阳性者20.8%，18和6/11型11.3%，16、18和6/11三者同时阳性5.5%；两个或三个类型的混合感染占37.7%. HPVE6癌基因蛋白免疫组化检测：阳性45例(84.9%)，其中高分化鳞癌4.4%，中分化鳞癌40%，低分化鳞癌55.6%；其表达特征为：阳性颗粒位于胞核内，呈点灶、或全层性分布，以低分化鳞癌的表达强度最高. 正常胎儿和非癌食管鳞状上皮呈阴性. p53蛋白免疫组化检测：阳性37例(69.8%)，其中高分化鳞癌2例，中分化鳞癌14例，低分化鳞癌21例，其表达特征与E6蛋白基本相同，相互间无显著性差异(P>0.05).
3 讨论
, http://www.100md.com
人乳头瘤病毒是一种具有异质性的致瘤病毒，高危组HPV16或18参与鳞状细胞癌发生发展过程. 在HPV16DNA读码框架早期区列的亚基因片段中，E6是致癌的转化基因，编码的核蛋白，属于肿瘤早期特异转化蛋白，具有病毒癌蛋白的生物活性. 我国研究已经证实，88.9%的HPV-16DNA阳性宫颈癌中可以检出E6基因. 在HPV-16导致宫颈癌的过程中，E6基因多位点整合在宿主细胞基因组DNA上，始终完整保留并活跃转录，从而构成宫颈鳞状细胞转化为癌的关键因素[1]. 我国李茵的实验研究已经证实，食管癌组织中HPV以整合状态存在，且整合过程中可能发生某些基因片段的丢失[2]. 本组食管鳞癌组织中，HPVE6蛋白有明显的表达，表明HPVE6基因存在于食管鳞癌细胞核内，并进行复制，参与食管鳞癌的发生发展过程.
近年在对p53蛋白表达的研究中认 为，野生型p53蛋白与一些DNA肿瘤病毒蛋白结合，可以造成p53蛋白的稳定性增加，在细胞内聚集，从而出现免疫组化的高表达；并发现HPV-16/18DNA中的肿瘤基因E6蛋白通过与p53的结合，导致p53出现相反的调节功能[2，3]. 我们在HPV阳性的食管鳞癌中发现p53蛋白和HPVE6蛋白均具有较高的表达率，尤其是二者在低分化鳞癌细胞核内相似的表达特性，显示HPVE6蛋白与p53在食管鳞癌中具有十分紧密的关系. 提示在食管鳞状细胞的恶性转化过程中，HPV-16/18DNAE6蛋白与鳞状上皮细胞内p53蛋白结合，导致p53丧失抑癌功能，获得致癌能力，二者的协同作用引起细胞内正常功能丧失，最终导致细胞癌变. 由此可能存在病毒感染→病毒癌蛋白与抑癌基因蛋白相互作用→抑癌基因功能转换→细胞癌变的结构模式.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 司静懿，李昆. 宫颈癌病毒病因癌变原理的研究. 中华病理学杂志，1993；22(6)：373-375
2 李茵，黄光琦，肖恒怡，等. 食管癌及癌旁组织中人乳头状瘤病毒DNA的存在状态. 华西医科大学学报，1991；22(3)：157-160
3 Scheffner M, Werness BA, Huibregtse JM, et al. The E6 oncoprotein encoded by human papilloma virus type 16 and 18
promotes the degradation of p53. Cell, 1990;63(6):1129-1136
4 Greenblatt MS, Bennett WP, Hollstein M, et al. Mutations in p53 tumor suppressou gene: clues to cancer and etiology
and molecular patholenesis. Cancer Res, 1994;54(9):4855-4878(收稿 1997-04-17 修回 1997-06-15), http://www.100md.com(邹赛英1 唐新萍1 刘旭明1 司静懿2 )