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编号:10695413
胃癌D17S261和D17S799位点二核苷酸重复序列不稳定性的意义
http://www.100md.com 1998年4月15日 《世界华人消化杂志》 1998年第4期
     1解放军322医院内一科 山西省大同市 037006

    2第三军医大学西南医院消化科 重庆市 430038

    周晓东,男,1963-01-21生,汉族. 1985年第四军医大学毕业,学士,1997年第三军医大学消化内科硕士,消化内科主治医师,发表论文10篇.

    项目负责人
周晓东,037006,山西省大同市,解放军322医院内一科,山西省大同市新开南路2号.

    Correspondence to Xiao-Dong Zhou, Department of Gastroenterology, Chinese PLA 322 Hospital, 2 Xinkai Nanlu,Datong 037006, Shanxi Province, China
, http://www.100md.com
    Tel. +86·352·2023869-83025

    收稿日期 1997-12-10

    

    Clinical implication of dinucleotide repeat sequence instability in gastric cancer


    Xiao-Dong Zhou1 and Dian-Chun Fang2

    1Department of Gastroenterology, Chinese PLA 322 Hospital, Datong 037006, Shanxi Province, China
, 百拇医药
    2Department of Gastroenterology, Southwest Hospital, the Third Military Medical University, Chongqing 430038, China

    


    Abstract

    AIM
To investigate dinucleotide repeat sequence instability (DRSI) in the carcinogenesis of gastric cancer.

    METHODS
DRSI was detected in 50 surgically resected specimens of gastric cancer using the PCR method.
, http://www.100md.com
    RESULTS
DRSI was detected in 17 (34.0%) of the 50 gastric cancer specimens. The frequency of DRSI in well-differentiated gastric cancer (66.7%, 10/15) was significantly higher than that in poorly-differentiated one (19.4%,6/31) (P<0.01), and in intestinal type (55.6%,10/18) it was significantly higher than in diffused type (20%,6/30) (P<0.05). No significant correlation was found between DRSI and the size, location, lymphnode metastasis, serosal invasion and clinical stage of gastric cancer.
, 百拇医药
    CONCLUSION
DRSI may be an early molecular marker and may play an important role in carcinogenesis of gastric cancer.

    Subject headings
stomach neoplasms/genetics; adenocarcinoma/genetics; dinucleotide repeats/genetics

    Zhou XD, Fang DC. Clinical implication of dinucleotide repeat sequence instability at D17S261 and D17S799 in gastric cancer.

    Huaren Xiaohua Zazhi,1998;6(4):318-320
, http://www.100md.com
    

    摘要


    目的 研究二核苷酸重复序列不稳定性〔DRSI〕在胃癌发生中的作用及其临床意义.

    方法 采用PCR方法检测了D17S 261和D17S 799位点二核苷酸重复序列不稳定性.

    结果 胃癌总DRSI发生率为34%(17/?50),其中高中分化腺癌DRSI阳性率(66.7%,10/15)显著高于低分化癌(19.4%,6/31,P<0.01);肠型胃癌DRSI阳性率(55.6%,10/18)显著高于胃型胃癌(20%,6/30,P<0.05),DRSI与胃癌部位、大小、浸润、分期、淋巴结转移无显著相关.

, 百拇医药     结论 DRSI在胃癌的发生中可能起重要作用.

    主题词
胃肿瘤/遗传学;腺癌/遗传学;双核苷酸重复/遗传学;序列分析,RNA

    周晓东, 房殿春.胃癌D17S261和D17S799位点二核苷酸重复序列不稳定性的意义.华人消化杂志,1998;6(4):318-320

    

    0 引言


    胃癌的发生涉及到一系列的遗传改变,包括癌基因的激活及抑癌基因的失活等. 近期研究发现,二核苷重复序列不稳定性(Dinucleotide repeated sequence instability, DRSI)在肿瘤的发生中扮演重要角色[1,2]. 有关胃癌DRSI的研究国外已见报道[3-5],国内尚未见这方面的报道. 为了探讨DRSI在中国人胃癌发生中的作用,我们采用PCR方法检测了胃癌的DRSI.
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    1 材料和方法

    1.1 材料
我院1994-01/1996-07手术切除胃癌标本50例. 手术切下肿瘤后收集癌及切缘处正常组织,置-80℃冰箱保存备用. 早期胃癌3例,进展期胃癌47例;中-高分化腺癌15例,低发化腺癌31例,印戒细胞癌4例;肠型胃癌18例,胃型胃癌30例,混合型胃癌2例.

    1.2 方法 采用显微解剖技术收集癌及正常粘膜组织,以蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提法提取基因组DNA. 采用中科院上海细胞生物研究所合成引物扩增D17S261,位点二核苷酸重复序列[6],D17S799位点引物由Garden博士提供. 采用2400型PCR仪扩增DNA. 反应总体积20μl,含基因组DNA 100ng,10×Buffer 2μl,引物各10pmol,4×dNTP各0.2mmol, Taq DNA聚合酶2U. 循环参数94℃ 30s,56℃ 40s,72℃ 30s,32个循环后置72℃继续反应10min. 扩增产物在15g/L琼脂糖上电泳证实无杂带后,以首次扩增产物为模板,另加α-32pdCTP 0.8μl,进行第2次扩增. 取2次扩增产物5μl与等体积上样缓冲液(980g/L)甲酰胺,2.5g/L二甲苯蓝和溴酚蓝)混合,95℃变性5min后在100g/L聚丙烯酰胺凝胶上(含7mol/L尿素)电泳2h,干燥凝胶在-80℃下放射自显影. 和正常DNA等位片段比较,肿瘤组织有额外的DNA等位片段即为阳性结果.
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    统计学处理 以χ2或四表格确切概率法对相关数据进行统计学处理. P<0.05相差显著,P<0.01相差非常显著.

    2 结果

    2.1 胃癌DRSI检出率 胃癌50例中D17S261和D17S799位点各检出DRSI 12例,阳性率均为24.0%. 若将2个位点综合分析,共检出MRSI 17例,总阳性率为34.0%(图1),3例早期胃癌2例DRSI阳性,进展期胃癌DRSI阳性率为31.9%(15/47),二者之间无显著差异I(P>0.05).

    2.2 DRSI与胃癌临床病理参数 将50例胃癌按部位、大小、分化程度、淋巴结转移、浆膜浸润、分期及Lauren分型进行分组,可见中-高分化腺癌DRSI阳性率为66.7%(10/15),显著高于低分化腺癌(19.4%,6/31,P<0.01);肠型胃癌阳性率为55.6%(10/18),显著高于胃型胃癌(20%,6/30,P<0.05). DRSI与其他各项参数无显著相关(表1).
, 百拇医药
    1 胃癌组织D17S261,D17S799位点MSIN:正常组织 T:肿瘤组织

    2 胃癌组织(SP法×400)突变型P53蛋白表达

    1 胃癌DRSI与临床病理参数的关系
参数nDRSI(%)
部位
胃窦3010(33.3)
胃体114(36.4)
胃底93(33.3)
大小
≤5cm3213(40.6)
>5cm184(22.2)
分化程度
高-中1510(66.7)a
316(19.4)
印戒41(25.0)
淋巴结转移
256(24.0)
2511(44.0)
浆膜浸润
3011(36.7)
206(30.0)
分期
Ⅰ,Ⅱ2411(45.8)
Ⅲ,Ⅳ266(23.1)
Lauren分型
肠型1810(55.6)b
胃型306(20.0)
混合型21(50.0)

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    aP<0.01,bP<0.05.

    3 讨论

    D17S261和D17S799位点分别位于染色体17P 13.1-12和17P 12.1-11,该位点存在一种具有高度多态性的二核苷酸重复序列即微卫星DNA,当DNA发生频发的复制错误时,该重复序列可发生缺失和插入,导致不稳定性发生,即DRSI或微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI). 近期研究发现,DRSI参与了胃癌的发生,国外报道胃癌MSI发生率18%~38%[3-5],Nakashima et al[7]检测了25例胃癌的MSI,发现早期胃癌MSI发生率显著高于晚期胃癌,提示MSI是胃癌发生的早期事件. 本研究发现,胃癌MSI/DRSI检出率为34%,3例早期胃癌2例阳性,提示在胃癌发生的早期阶段即有DRSI的发生,因此DRSI可能是胃癌发生过程中的早期分子标志.
, 百拇医药
    MSI与胃癌分化程度的关系文献报告不尽一致. Han et al[3]发现低分化腺癌MSI发生率高于高分化腺癌. Semba et al[8]发现高分化腺癌MSI发生率高于低分化腺癌,而且肠化组织阳性率为33.3%. 本研究显示,中-高分化腺癌DRSI发生率显著高于低分化腺癌,肠型胃癌阳性率显著高于胃型胃癌,提示二核苷酸重复序列不稳定性在肠型胃癌的发生中起重要作用,DRSI阳性胃癌恶性程度可能低.

    Seroca et al[9]研究显示,MSI与胃癌发生部位,淋巴结转移有关,81.8%的MSI发生于胃窦部癌琈SI阳性胃癌淋巴结转移率显著低于MSI阴性胃癌,提示MSI阳性胃癌预后相对较好. 本研究未发现胃癌DRSI与淋巴结转移有关,亦未能证实与胃癌大小、浆膜浸润、部位、临床分期有显著相关.
, 百拇医药
    DRSI参与胃癌发生的机制目前还不清楚,但并不是通过引起p53基因突变而致癌[10],在这方面还有待进一步研究. 本研究提示,DRSI参与了胃癌的发生,可能是胃癌发生的一种新机制,检测DRSI可能有助于胃癌早期诊断和预后评估.

    4 参考文献

    1 Shridhar V, Siegfried J, Hunt J, MarAlonso M, Smith DI. Genetic instability of Microsatellite seguence in many

    non-small lung carcinomas. Cancer Res,1994;54(8):2084-2087

, 百拇医药     2 Yee CJ, Roodi N, Verrier CS, Parl FF. Microsatellite instability and loss of heterozygosity in breast cancer.

    Cancer Res, 1994;54(7):1641-1644

    3 Han HJ, Yanagicawa A, Kato Y, Park JG, Nakamura Y. Genetic instability in Pancreatic cancer and pooly differentiated type of

    gastric cancer. Cancer Res, 1993;53(23):5087-5089

    4 Chong JM, Fukayama M, Hayashi Y, Takizawa T, Koike M, Konishi M et al. Microsatellite instability in progression of gastric
, 百拇医药
    carcinoma. Cancer Res, 1994;54(17):4595-4597

    5 Tumura G, Sakata K, Maesawa C, Suzuki Y, Terashima M, Satoh K et al.Microsatellite alterations in adenoma and

    differentiated adenocarcinoma of the stomach. Cancer Res, 1995;55(9):1933-1936

    6 Weber JL, Kwitek AE, May PE. Dinucleotide repeat polymorphism at the 17S250 and D17S261 loci. Nucleic Acid Res,1990;18(14):4640
, 百拇医药
    7 Nakashima H, Inoue H, Mori M, Ueo H, IKeda M, Akiyoshi T. Microsatellite instability in Japanese gastric cancer.

    Cancer, 1995;75(6):1503-1507

    8 Semba S, Yokozaki H, Yamamoto S, Yaswi W, Tahara E. Microsatellite instability in precancerous lesions and carcinomas

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    9 Seroca R, Santos NR, David L, Constancia M, Barroca H, Carneico F et al. Sporadic gastric carcinomas with microsatellite

    instability display a particular clinicopathologic profile. Int J Cancer,1995;64(1):32-36

    10 Mironov N, Aguelon MAM, Potapova GI, Omori Y, Gorbunov OV, Klimenkov AA et al. Alterations of (CA)n,DNA repeats and

    tumor suppressor genes in human gastric cancer.Cancer Res,1994;54(1):41-44, http://www.100md.com(周晓东1 房殿春2)