幽门螺杆菌Ⅰ型与Ⅱ型感染的血清学
1北京军区总医院消化内科 北京市 100700
2中国医学科学院病毒研究所
项目负责人 韩英北京军区总医院消化内科 北京市 100700
收稿日期 1998-04-20
Subject headings Helicobacter infections/diagnosis; Helicobacter pylori/isolation & purification; peptic ulcer/microbiology; stomach ulcer/microbiology; antibodies, bacterial/analysis
, 百拇医药
主题词 螺杆菌感染/诊断；螺杆菌，幽门/分离和提纯；消化性溃疡/微生物学；胃炎/微生物学；抗体，细菌/分析
1 对象和方法
1.1 对象 1997-10/1998-02我院消化科门诊及住院的部分患者，共计111例. 其中消化性溃疡(PU)77例，胃炎29例，肿瘤5例. 所有患者的血清均同时进行幽门螺杆菌尿素酶(HpU)抗体及Ⅰ型和Ⅱ型Hp抗体的检测.
1.2 方法 HpU抗体酶标法诊断试剂盒(协和医药集团)，按说明书进行检测. Ⅰ型和Ⅱ型Hp抗体检测系中国医学科学院病毒研究所与德国麦克莱金公司合作，利用基因克隆技术，将Cag-A(Ⅰ型)和HSP58(Ⅱ型)基因的优势表位克隆和表达，经纯化的抗原混合包被，建立ELISA法. 判定标准：①阳性对照OD值≥1.0；阴性对照OD值≤0.05. ②临界值(cutoff值)计算：临界值=阴性对照孔平均OD值+0.17. ③结果判定：OD值>临界值为Hp抗体阳性；OD值≤临界值为Hp抗体阴性.
, 百拇医药
2 结果
2.1 ELISA检测方法验证 将ELISA试剂指标与其他几项指标进行了比较，其结果表1.
表1 ELISA(抗Hp-IgG)与其他几项指标阳性率的比较
, 百拇医药
* W.b免疫蛋白印迹法 #酶联免疫吸附试验
以上结果显示，ELISA法敏感性、特异性均优于其他几种方法.
2.2 两种抗体检测结果的比较 两种抗体检测方法的 阳性率有较大差异；Ⅰ，Ⅱ型抗体检测法的敏感性明显高于HpU法，表2.
表2 HpU抗体及Ⅰ，Ⅱ型Hp抗体检测的阳性率比较
, 百拇医药
上述结果表明，应用经纯化的基因工程表达的Hp的Cag-A(Ⅰ型)和HsP-58(Ⅱ型)抗原，采用间接ELISA方法检测待检血清中的抗体，灵敏性，特异性均优于尿素酶法.
3 讨论
Hp的基因型和表现型在一定程度上都存在着多态性，依据其分泌毒素的情况不同，可以将其分为产毒素和非产毒素两大类；依据其Cag-A和VacA基因及其相应蛋白表达的有无，将Hp菌分为两型：Ⅰ型，含有CagA基因，表达CagA蛋白和VacA蛋白；Ⅱ型，不含CagA基因，不表达CagA蛋白和VacA蛋白. Ⅰ型Hp有较强的毒性，与胃十二指肠溃疡及胃癌的发生密切相关；Ⅱ型Hp菌株的毒性较小，感染后一般只引起慢性浅表性胃炎[1].
目前国内外已有多种Hp抗体检测试剂盒上市，其中大多用培养的Hp菌体抽提物作为抗原，检测人血清中的Hp总抗体，其特异性和敏感性均不理想，主要用于检测人群中的Hp感染率.采用基因工程表达的CagA蛋白制备的产细胞毒素Hp抗体酶免疫检测试剂盒(CagA-Hp)仅能检测出Ⅰ型感染的患者，而对Ⅱ型感染的患者则可造成漏检.
, 百拇医药
免疫吸附(ELISA)方法是临床常用的检测Hp感染的方法，具有高度的敏感性和特异性[2]. ELISA技术的Hp抗原依据其纯度可分为纯化抗原，部分纯化抗原和粗制抗原. 本研究的检测方法是采用高新的基因克隆技术将Ⅰ型和Ⅱ型Hp基因的优势表位克隆和表达，并将Cag-A和HsP-58两种优势表位抗原混合，作为特异性诊断抗原，检测血清中的相应抗体，克服了其他菌体蛋白质所造成的假阳性，提高了检测的特异性和敏感性，即可检测产细胞毒素CagA的Ⅰ型菌珠，又可检出毒力较低的Ⅱ型菌株，具有一定的临床及科研价值，且操作简便，适于推广应用.
4 参考文献
1 Xiang ZY, Censini S, Bayeli PF, Telford JL, Figura N, Rappuole R et al. Analysis of expression of CagA and VacA virulence factors
, 百拇医药
in 43 strains of Helicobacter pylori reveals that clinical isolates can be divided into two major types and that CagA is
not necessary for expression of the vacuolating cytotoxin. Infect Immun, 1995;63(1):94-98
2 Ching CK, Wong BCY, Kwok E, Ong L, Covacci A, Lam SK et al. Prevalence of CagA-bearing Helicobacter pylori
strains detected by the anti-CagA assay in patients with peptic ulcer disease and in controls. Am J Gastroenterol,
1996;91(5):949-953, 百拇医药(韩 英1 武子涛1 李世荣1 皮国华2)
2中国医学科学院病毒研究所
项目负责人 韩英北京军区总医院消化内科 北京市 100700
收稿日期 1998-04-20
Subject headings Helicobacter infections/diagnosis; Helicobacter pylori/isolation & purification; peptic ulcer/microbiology; stomach ulcer/microbiology; antibodies, bacterial/analysis
, 百拇医药
主题词 螺杆菌感染/诊断；螺杆菌，幽门/分离和提纯；消化性溃疡/微生物学；胃炎/微生物学；抗体，细菌/分析
1 对象和方法
1.1 对象 1997-10/1998-02我院消化科门诊及住院的部分患者，共计111例. 其中消化性溃疡(PU)77例，胃炎29例，肿瘤5例. 所有患者的血清均同时进行幽门螺杆菌尿素酶(HpU)抗体及Ⅰ型和Ⅱ型Hp抗体的检测.
1.2 方法 HpU抗体酶标法诊断试剂盒(协和医药集团)，按说明书进行检测. Ⅰ型和Ⅱ型Hp抗体检测系中国医学科学院病毒研究所与德国麦克莱金公司合作，利用基因克隆技术，将Cag-A(Ⅰ型)和HSP58(Ⅱ型)基因的优势表位克隆和表达，经纯化的抗原混合包被，建立ELISA法. 判定标准：①阳性对照OD值≥1.0；阴性对照OD值≤0.05. ②临界值(cutoff值)计算：临界值=阴性对照孔平均OD值+0.17. ③结果判定：OD值>临界值为Hp抗体阳性；OD值≤临界值为Hp抗体阴性.
, 百拇医药
2 结果
2.1 ELISA检测方法验证 将ELISA试剂指标与其他几项指标进行了比较，其结果表1.
表1 ELISA(抗Hp-IgG)与其他几项指标阳性率的比较
| 检测项目 | n | 阳性例数 | 阳性率(%) |
| 组织/细菌培养 | 92 | 54 | 59 |
| 细菌裂解物W.b* | 92 | 50 | 54 |
| Cag-A W.b* | 92 | 46 | 50 |
| ELISA# | 92 | 61 | 66 |
, 百拇医药
* W.b免疫蛋白印迹法 #酶联免疫吸附试验
以上结果显示，ELISA法敏感性、特异性均优于其他几种方法.
2.2 两种抗体检测结果的比较 两种抗体检测方法的 阳性率有较大差异；Ⅰ，Ⅱ型抗体检测法的敏感性明显高于HpU法，表2.
表2 HpU抗体及Ⅰ，Ⅱ型Hp抗体检测的阳性率比较
| 疾患 | n | HpU阳性 n(%) | Ⅰ,Ⅱ型阳性n(%) | 两项阳性n(%) |
| PU | 77 | 16(20.8) | 44(57.1) | 13(16.9) |
| 胃炎 | 29 | 3(10.3) | 9(31.0) | 0 ( 0.0) |
| 肿瘤 | 5 | 2(40.0) | 2(40.0) | 0 ( 0.0) |
| 总计 | 111 | 21(18.9) | 55(49.5) | 13(11.7) |
, 百拇医药
上述结果表明，应用经纯化的基因工程表达的Hp的Cag-A(Ⅰ型)和HsP-58(Ⅱ型)抗原，采用间接ELISA方法检测待检血清中的抗体，灵敏性，特异性均优于尿素酶法.
3 讨论
Hp的基因型和表现型在一定程度上都存在着多态性，依据其分泌毒素的情况不同，可以将其分为产毒素和非产毒素两大类；依据其Cag-A和VacA基因及其相应蛋白表达的有无，将Hp菌分为两型：Ⅰ型，含有CagA基因，表达CagA蛋白和VacA蛋白；Ⅱ型，不含CagA基因，不表达CagA蛋白和VacA蛋白. Ⅰ型Hp有较强的毒性，与胃十二指肠溃疡及胃癌的发生密切相关；Ⅱ型Hp菌株的毒性较小，感染后一般只引起慢性浅表性胃炎[1].
目前国内外已有多种Hp抗体检测试剂盒上市，其中大多用培养的Hp菌体抽提物作为抗原，检测人血清中的Hp总抗体，其特异性和敏感性均不理想，主要用于检测人群中的Hp感染率.采用基因工程表达的CagA蛋白制备的产细胞毒素Hp抗体酶免疫检测试剂盒(CagA-Hp)仅能检测出Ⅰ型感染的患者，而对Ⅱ型感染的患者则可造成漏检.
, 百拇医药
免疫吸附(ELISA)方法是临床常用的检测Hp感染的方法，具有高度的敏感性和特异性[2]. ELISA技术的Hp抗原依据其纯度可分为纯化抗原，部分纯化抗原和粗制抗原. 本研究的检测方法是采用高新的基因克隆技术将Ⅰ型和Ⅱ型Hp基因的优势表位克隆和表达，并将Cag-A和HsP-58两种优势表位抗原混合，作为特异性诊断抗原，检测血清中的相应抗体，克服了其他菌体蛋白质所造成的假阳性，提高了检测的特异性和敏感性，即可检测产细胞毒素CagA的Ⅰ型菌珠，又可检出毒力较低的Ⅱ型菌株，具有一定的临床及科研价值，且操作简便，适于推广应用.
4 参考文献
1 Xiang ZY, Censini S, Bayeli PF, Telford JL, Figura N, Rappuole R et al. Analysis of expression of CagA and VacA virulence factors
, 百拇医药
in 43 strains of Helicobacter pylori reveals that clinical isolates can be divided into two major types and that CagA is
not necessary for expression of the vacuolating cytotoxin. Infect Immun, 1995;63(1):94-98
2 Ching CK, Wong BCY, Kwok E, Ong L, Covacci A, Lam SK et al. Prevalence of CagA-bearing Helicobacter pylori
strains detected by the anti-CagA assay in patients with peptic ulcer disease and in controls. Am J Gastroenterol,
1996;91(5):949-953, 百拇医药(韩 英1 武子涛1 李世荣1 皮国华2)