胆囊癌组织及胆汁中厌氧菌谱检测的研究报告
西安医科大学第一临床医学院肝胆外科研究室 陕西省西安市 710061
项目负责人 石景森西安医科大学第一临床医学院肝胆外科研究室 陕西省西安市 710061
收稿日期 1998-09-10 接收日期 1998-12-09
Subject headings gallbladder neoplasms; bile; bacteria, anaerobic
主题词 胆囊肿瘤；胆汁；细菌,厌氧
本文对我院1996-02-1998-04 29例胆囊癌患者胆汁及胆囊癌组织行厌氧培养，报告如下.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 因胆囊癌行手术患者29例. 男11例，女18例. 年龄19岁～63岁(平均38.5岁). 其中行“U”型管引流术11例，行左右肝管引流术6例，行胆囊癌根治术9例，行胆囊造瘘术3例. 实验仪器：①BACT/ALERT 120微生物自动检测系统(美国ORGANON TEKNIKA). ②SCEPTOR微生物鉴定系统(美国BECTON DICKINSON).
1.2 方法 ①标本采集：术中用一次性无菌注射器穿刺病变胆囊，取胆汁5mL～10mL，1min内注入厌氧增菌瓶. 然后放入恒温振荡培养箱中自动培养1d～6d，底部感应器显示为阳性者根据其微生物生长曲线，于对数生长期取出做转种. 培养6d仍为阴性者，视为厌氧菌阴性. 胆囊癌组织从瘤体中央切取标本，大小约0.6cm×0.5cm×0.5cm. 将所取标本剪碎，与胆汁同样方法培养；②培养及鉴定：将两种标本快速接种到厌氧琼脂板后，置厌氧罐孵育，48h后取出，制备10/mL标准厌氧菌菌悬液，取10μL放入10mL增菌管内，转种到SCEPTOR厌氧板. 厌氧培养48h后，直接在SCEPTOR微生物鉴定仪中确定厌氧菌种，厌氧菌培养同时行需氧菌培养.
, 百拇医药
2 结果
29例胆囊癌患者胆囊组织及胆汁经厌氧及需氧培养后，均为兼性厌氧. 胆汁中厌氧菌阳性检出率为65.5%(19/29)，胆囊组织中厌氧菌阳性检出率为55.6%(5/9). 29例胆汁中细菌培养共分离到细菌48株. 其中厌氧菌21株，需氧菌27株(表1). 9例胆囊癌组织中分离到产气荚膜梭菌4株，占厌氧菌株总数的80%(4/5)(表2).
表1 29例胆囊癌患者胆汁厌氧培养细菌结果
, 百拇医药
表2 9例胆囊癌组织中厌氧培养细菌结果
3 讨论
有关胆囊癌发病原因，流行病学显示与结石性胆囊炎密切相关. 目前一般认为胆囊癌的发病过程是胆石症或胆囊炎引起胆囊粘膜上皮增生或不典型增生，导致原位癌或浸润癌. 研究证实在胆汁代谢过程中，鹅去氧胆酸的产物石胆酸为一重要的致癌物质，在胆囊癌患者中石胆酸的含量明显升高，从而对胆囊粘膜长期刺激引起癌变. 本组55.6%(5/9)新鲜胆囊癌组织中培养出厌氧菌6株，其中4株为产气荚膜梭菌，该型厌氧菌可使胆酸彻底脱氧化，转化为去氧胆酸及石胆酸，二者除刺激胆囊粘膜外还通过参与多环芳香碳氢化物而导致致癌作用. 此外，各型产气荚膜梭菌均能产生具有细胞毒性、溶血性及致死性的强毒素-α毒素，α毒素依靠其具有的磷脂酶C和鞘磷酶两种酶的活性，水解细胞膜的主要成分-膜磷脂，从而破坏细胞膜的完整性，导致细胞裂解、凋亡. 若不能启动正确的凋亡机制，也会导致肿瘤的发生., 百拇医药(石景森 卢 云 卓健生 韩文胜)
项目负责人 石景森西安医科大学第一临床医学院肝胆外科研究室 陕西省西安市 710061
收稿日期 1998-09-10 接收日期 1998-12-09
Subject headings gallbladder neoplasms; bile; bacteria, anaerobic
主题词 胆囊肿瘤；胆汁；细菌,厌氧
本文对我院1996-02-1998-04 29例胆囊癌患者胆汁及胆囊癌组织行厌氧培养，报告如下.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 因胆囊癌行手术患者29例. 男11例，女18例. 年龄19岁～63岁(平均38.5岁). 其中行“U”型管引流术11例，行左右肝管引流术6例，行胆囊癌根治术9例，行胆囊造瘘术3例. 实验仪器：①BACT/ALERT 120微生物自动检测系统(美国ORGANON TEKNIKA). ②SCEPTOR微生物鉴定系统(美国BECTON DICKINSON).
1.2 方法 ①标本采集：术中用一次性无菌注射器穿刺病变胆囊，取胆汁5mL～10mL，1min内注入厌氧增菌瓶. 然后放入恒温振荡培养箱中自动培养1d～6d，底部感应器显示为阳性者根据其微生物生长曲线，于对数生长期取出做转种. 培养6d仍为阴性者，视为厌氧菌阴性. 胆囊癌组织从瘤体中央切取标本，大小约0.6cm×0.5cm×0.5cm. 将所取标本剪碎，与胆汁同样方法培养；②培养及鉴定：将两种标本快速接种到厌氧琼脂板后，置厌氧罐孵育，48h后取出，制备10/mL标准厌氧菌菌悬液，取10μL放入10mL增菌管内，转种到SCEPTOR厌氧板. 厌氧培养48h后，直接在SCEPTOR微生物鉴定仪中确定厌氧菌种，厌氧菌培养同时行需氧菌培养.
, 百拇医药
2 结果
29例胆囊癌患者胆囊组织及胆汁经厌氧及需氧培养后，均为兼性厌氧. 胆汁中厌氧菌阳性检出率为65.5%(19/29)，胆囊组织中厌氧菌阳性检出率为55.6%(5/9). 29例胆汁中细菌培养共分离到细菌48株. 其中厌氧菌21株，需氧菌27株(表1). 9例胆囊癌组织中分离到产气荚膜梭菌4株，占厌氧菌株总数的80%(4/5)(表2).
表1 29例胆囊癌患者胆汁厌氧培养细菌结果
| 厌氧菌 | 株数 | 需氧菌 | 株数 |
| 脆弱类杆菌(G-) | 7 | 大肠埃希菌(G-) | 11 |
| 痤疮丙酸杆菌(G+) | 2 | 肺炎克雷白菌(G-) | 4 |
| 产气荚膜梭菌(G+) | 11 | 费氏枸橼酸杆菌(G-) | 2 |
| 厌氧性链球菌(G+) | 1 | 绿脓假单胞菌(G-) | 2 |
| 产气肠杆菌(G-) | 2 | ||
| 金黄色葡萄球菌(G+) | 5 | ||
| 肠球菌(G+) | 1 | ||
| 合计 | 21 | 27 |
, 百拇医药
表2 9例胆囊癌组织中厌氧培养细菌结果
| 编号 | 厌氧菌 | 需氧菌 |
| 1 | 产气荚膜梭菌 | 大肠埃希菌 |
| 2 | 产气荚膜梭菌 | 肠链球菌 |
| 3 | 产气荚膜梭菌 | 大肠埃希菌 |
| 4 | 产气荚膜梭菌 | 大肠埃希菌 |
| 5 | 痤疮丙酸杆菌 | 绿脓假单胞菌 |
3 讨论
有关胆囊癌发病原因，流行病学显示与结石性胆囊炎密切相关. 目前一般认为胆囊癌的发病过程是胆石症或胆囊炎引起胆囊粘膜上皮增生或不典型增生，导致原位癌或浸润癌. 研究证实在胆汁代谢过程中，鹅去氧胆酸的产物石胆酸为一重要的致癌物质，在胆囊癌患者中石胆酸的含量明显升高，从而对胆囊粘膜长期刺激引起癌变. 本组55.6%(5/9)新鲜胆囊癌组织中培养出厌氧菌6株，其中4株为产气荚膜梭菌，该型厌氧菌可使胆酸彻底脱氧化，转化为去氧胆酸及石胆酸，二者除刺激胆囊粘膜外还通过参与多环芳香碳氢化物而导致致癌作用. 此外，各型产气荚膜梭菌均能产生具有细胞毒性、溶血性及致死性的强毒素-α毒素，α毒素依靠其具有的磷脂酶C和鞘磷酶两种酶的活性，水解细胞膜的主要成分-膜磷脂，从而破坏细胞膜的完整性，导致细胞裂解、凋亡. 若不能启动正确的凋亡机制，也会导致肿瘤的发生., 百拇医药(石景森 卢 云 卓健生 韩文胜)