诱发大鼠肝癌过程中IL-2，淋巴细胞转化率变化
1第一军医大学珠江医院 广东省广州市 510282
2第一军医大学南方医院全军消化研究所
项目负责人 毛华第一军医大学珠江医院 广东省广州市 510282
收稿日期 1998-09-16
Subject headings liver neoplasms; interleukin-2; lymphocyte transformation
主题词 肝肿瘤；白细胞介素-2；淋巴细胞转化
白介素2(IL-2)是体内一种重要的免疫活性因子，通过促进B细胞分裂、增殖以及NK细胞的活性作用，提高机体的免疫功能. 我们应用二甲基奶油黄(DAB)诱发大鼠肝癌模型，观察诱癌过程中IL-2与淋巴细胞转化率改变及其相互关系.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 60只♂ Wistar大鼠(第一军医大学实验动物中心提供，合格证号91003)，体重132.4g±20.9g，6wk～8wk. 随机分成对照、实验甲、乙、丙4组，每组15只，分笼喂养，一鼠一笼. 动物饲养房保持通风、干燥，室温在22℃～25℃，定期更换鼠笼垫料. 用二甲基奶油黄(DAB，广州化学试剂厂)拌染的颗粒饲料(黄粮)按要求喂养，实验组加DAB，对照组未加DAB. 实验甲组在喂养后4wk～6wk，实验乙组在10wk～12wk，实验丙组在喂养后14wk～16wk分批杀死. 观察肝脏大体形态，病变部位取材后置于10%福尔马林溶液中固定于HE染色.
1.2 方法 ①大鼠IL-2的产生与测定：无菌取大鼠脾脏，研磨后溶解红细胞，用10%小牛血清RPMI-1640液将细胞浓度调整为5×106/mL. ConA 终浓度10μg/mL，置于37℃, 5% CO2培养箱孵育48h后，离心10min，收集上清，置于-20℃储存待用. 采用鼠脾细胞增殖检测法测定大鼠IL-2活性[1]，IL-2标准品(1000u/mL)由第一军医大学生物技术中心王小宁博士惠赠. ②大鼠外周血淋巴细胞转化率测定：参照改良的吴氏法[2]进行. 调整大鼠脾淋巴细胞浓度为6×106/mL，ConA 终浓度为10μg/mL，96孔培养板每孔加入0.2mL淋巴细胞，置于37℃，5% CO2培养箱孵育42h后，每孔加入1μci[3H]TdR,继续培养6h，多头细胞收集仪收集细胞至玻璃纤维滤纸上，加入10%三氯醋酸溶液，烘干后置于盛有闪烁液的闪烁瓶中，β计数器测定脉冲数.
, 百拇医药
2 结果
实验各组 IL-2活性见表1，肝癌组大鼠淋巴细胞DNA合成能力比正常组降低10倍左右(表2)，正常组和肝癌组大鼠IL-2活性与淋巴细胞转化率呈正相关，r=0.78，P<0.05，肝炎组和肝癌组大鼠IL-2活性与淋巴细胞转化率无关(P>0.05).
表1 诱发大鼠肝癌过程中不同时期IL-2活性变化
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01，vs 正常组.
表2 各组淋巴细胞转化率改变
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01，vs 正常组.
3 讨论
肝癌发生、发展过程中，体内免疫机制受到严重损害，其中包括各种免疫杀伤细胞活性下降、IL-2活性受抑制，使肿瘤得以发展[3]. 白介素2通过增加细胞毒T细胞活性、促进NK细胞增殖并产生干扰素、促进B细胞产生免疫球蛋白而发挥抗肿瘤和抗感染作用[4]. 我们在用DAB诱发大鼠肝癌过程中动态检测IL-2活性结果表明，肝炎、肝硬变、肝癌组明显低于正常对照组(P<0.05或0.01)，肝癌组低于肝炎组(P<0.05). 提示癌变过程中，IL-2活性呈进行性下降，检测体内IL-2活性可以了解病情发展和机体免疫状态. 在肝炎期动态观察IL-2活性，如显著低于肝炎组水平时，应考虑出现肝癌的可能，为早期发现肝癌提供敏感指标. 在正常和癌变机体中IL-2活性随着淋巴细胞转化率降低而下降，但在非特异性炎症、肝硬变阶段，机体中IL-2活性与淋巴细胞转化率无明显相关，可能与辅助T淋巴细胞的数量减少有关[5].
, 百拇医药
诱发大鼠肝癌过程中，机体的免疫功能下降与IL-2活性和淋巴细胞转化率降低有关，提高大鼠机体IL-2活性，可以减少大鼠肝癌的发生[6]. 检测IL-2活性和淋巴细胞转化率，可以了解机体免疫状态和疾病的预后. 肝炎期IL-2活性显著降低，可能提示有肝癌发生. 因此，肝炎期检测IL-2活性测定，可能成为诊断早期肝癌一个重要指标.
4 参考文献
1 Kromer G, Smithe GF. Avlan lymphokine; an improved method for chicken IL-2 production and assay. A Con A-erythrocyte
complex induces higher T cell proliferation and IL-2 production than dose free mitogen. Immunol Rev Methods, 1984;73:273-277
, http://www.100md.com
2 吴梧桐. 淋巴细胞转化率的测定. 生物化学与生物物理学报，1988；20：21-24
3 Mason DW, Kromer G, Nakagana E, Hotergen G,Yonthr T. Function of T-lymphocyte subsets isotated by means of
monoclonal antibodies. Immol Rev, 1983;74:57-63
4 Blay JY, Gemlo BT. Cytokines in patients with metastatic cancer treated with recombine IL-2 and lymphokine actitated killed
cells. Cancer Res, 1988;48:5846-5851
5 宋卫生，毛华，徐明符. 中华麦饭石对肝癌大鼠免疫功能影响. 免疫学杂志，1997；13：176-178
6 宋卫生，毛华，徐明符. 中华麦饭石阻止DAB诱发大鼠肝癌研究. 肿瘤，1997；17：209-212, http://www.100md.com(毛 华1 赵敏芳1 冯建均1 袁爱力2)
2第一军医大学南方医院全军消化研究所
项目负责人 毛华第一军医大学珠江医院 广东省广州市 510282
收稿日期 1998-09-16
Subject headings liver neoplasms; interleukin-2; lymphocyte transformation
主题词 肝肿瘤；白细胞介素-2；淋巴细胞转化
白介素2(IL-2)是体内一种重要的免疫活性因子，通过促进B细胞分裂、增殖以及NK细胞的活性作用，提高机体的免疫功能. 我们应用二甲基奶油黄(DAB)诱发大鼠肝癌模型，观察诱癌过程中IL-2与淋巴细胞转化率改变及其相互关系.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 60只♂ Wistar大鼠(第一军医大学实验动物中心提供，合格证号91003)，体重132.4g±20.9g，6wk～8wk. 随机分成对照、实验甲、乙、丙4组，每组15只，分笼喂养，一鼠一笼. 动物饲养房保持通风、干燥，室温在22℃～25℃，定期更换鼠笼垫料. 用二甲基奶油黄(DAB，广州化学试剂厂)拌染的颗粒饲料(黄粮)按要求喂养，实验组加DAB，对照组未加DAB. 实验甲组在喂养后4wk～6wk，实验乙组在10wk～12wk，实验丙组在喂养后14wk～16wk分批杀死. 观察肝脏大体形态，病变部位取材后置于10%福尔马林溶液中固定于HE染色.
1.2 方法 ①大鼠IL-2的产生与测定：无菌取大鼠脾脏，研磨后溶解红细胞，用10%小牛血清RPMI-1640液将细胞浓度调整为5×106/mL. ConA 终浓度10μg/mL，置于37℃, 5% CO2培养箱孵育48h后，离心10min，收集上清，置于-20℃储存待用. 采用鼠脾细胞增殖检测法测定大鼠IL-2活性[1]，IL-2标准品(1000u/mL)由第一军医大学生物技术中心王小宁博士惠赠. ②大鼠外周血淋巴细胞转化率测定：参照改良的吴氏法[2]进行. 调整大鼠脾淋巴细胞浓度为6×106/mL，ConA 终浓度为10μg/mL，96孔培养板每孔加入0.2mL淋巴细胞，置于37℃，5% CO2培养箱孵育42h后，每孔加入1μci[3H]TdR,继续培养6h，多头细胞收集仪收集细胞至玻璃纤维滤纸上，加入10%三氯醋酸溶液，烘干后置于盛有闪烁液的闪烁瓶中，β计数器测定脉冲数.
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2 结果
实验各组 IL-2活性见表1，肝癌组大鼠淋巴细胞DNA合成能力比正常组降低10倍左右(表2)，正常组和肝癌组大鼠IL-2活性与淋巴细胞转化率呈正相关，r=0.78，P<0.05，肝炎组和肝癌组大鼠IL-2活性与淋巴细胞转化率无关(P>0.05).
表1 诱发大鼠肝癌过程中不同时期IL-2活性变化
| 组别 | n | IL-2(μ/mL) | F |
| 对照 | 15 | 24.54±4.82 | |
| 肝炎 | 15 | 19.82±2.54a | 4.19 |
| 肝硬变 | 12 | 15.00±2.73b | |
| 肝癌 | 14 | 4.52±1.748b |
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aP<0.05，bP<0.01，vs 正常组.
表2 各组淋巴细胞转化率改变
| 组别 | n | 淋巴细胞转化率 |
| 对照 | 15 | 11916.8±2077.36 |
| 肝炎 | 15 | 8209.55±1177.46a |
| 肝硬变 | 12 | 4631.9±554.54b |
| 肝癌 | 14 | 753.75±132.66b |
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aP<0.05，bP<0.01，vs 正常组.
3 讨论
肝癌发生、发展过程中，体内免疫机制受到严重损害，其中包括各种免疫杀伤细胞活性下降、IL-2活性受抑制，使肿瘤得以发展[3]. 白介素2通过增加细胞毒T细胞活性、促进NK细胞增殖并产生干扰素、促进B细胞产生免疫球蛋白而发挥抗肿瘤和抗感染作用[4]. 我们在用DAB诱发大鼠肝癌过程中动态检测IL-2活性结果表明，肝炎、肝硬变、肝癌组明显低于正常对照组(P<0.05或0.01)，肝癌组低于肝炎组(P<0.05). 提示癌变过程中，IL-2活性呈进行性下降，检测体内IL-2活性可以了解病情发展和机体免疫状态. 在肝炎期动态观察IL-2活性，如显著低于肝炎组水平时，应考虑出现肝癌的可能，为早期发现肝癌提供敏感指标. 在正常和癌变机体中IL-2活性随着淋巴细胞转化率降低而下降，但在非特异性炎症、肝硬变阶段，机体中IL-2活性与淋巴细胞转化率无明显相关，可能与辅助T淋巴细胞的数量减少有关[5].
, 百拇医药
诱发大鼠肝癌过程中，机体的免疫功能下降与IL-2活性和淋巴细胞转化率降低有关，提高大鼠机体IL-2活性，可以减少大鼠肝癌的发生[6]. 检测IL-2活性和淋巴细胞转化率，可以了解机体免疫状态和疾病的预后. 肝炎期IL-2活性显著降低，可能提示有肝癌发生. 因此，肝炎期检测IL-2活性测定，可能成为诊断早期肝癌一个重要指标.
4 参考文献
1 Kromer G, Smithe GF. Avlan lymphokine; an improved method for chicken IL-2 production and assay. A Con A-erythrocyte
complex induces higher T cell proliferation and IL-2 production than dose free mitogen. Immunol Rev Methods, 1984;73:273-277
, http://www.100md.com
2 吴梧桐. 淋巴细胞转化率的测定. 生物化学与生物物理学报，1988；20：21-24
3 Mason DW, Kromer G, Nakagana E, Hotergen G,Yonthr T. Function of T-lymphocyte subsets isotated by means of
monoclonal antibodies. Immol Rev, 1983;74:57-63
4 Blay JY, Gemlo BT. Cytokines in patients with metastatic cancer treated with recombine IL-2 and lymphokine actitated killed
cells. Cancer Res, 1988;48:5846-5851
5 宋卫生，毛华，徐明符. 中华麦饭石对肝癌大鼠免疫功能影响. 免疫学杂志，1997；13：176-178
6 宋卫生，毛华，徐明符. 中华麦饭石阻止DAB诱发大鼠肝癌研究. 肿瘤，1997；17：209-212, http://www.100md.com(毛 华1 赵敏芳1 冯建均1 袁爱力2)