定位检测HCV不同编码区抗体的临床意义
河北医科大学第三医院 1传染科 2免疫室 河北省石家庄市 050051
项目负责人 南月敏河北医科大学第三医院 1传染科
收稿日期 1999-04-28
Subject headings hepatitis C virus; antibody, viral; hepatitis C
主题词 丙型肝炎病毒;抗体，病毒/分析；肝炎，丙型
第三代试剂盒虽然提高了HCV抗体检出率，但仍存在假阳性及假阴性. 我们采用合成肽及基因重组抗原对相应的核壳蛋白和非结构区抗体进行检测，为丙肝的诊治提供依据.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 根据1995年北京全国传染病与寄生虫病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》[1]诊断标准，病例选自我院1992-05/1998-05传染科住院患者，抗-HCV阳性或伴HCV RNA阳性结合流行病学资料及临床表现确诊的丙型肝炎75例，男50例，女25例. 年龄10岁～68岁，平均44岁. 其中急性肝炎33例，慢性肝炎轻度16例，中度11例，重度11例，肝炎肝硬变4例. 另选30例健康体检者作对照.
1.2 方法 采用HCV核壳蛋白合成肽抗原CP9，CP10及非结构区(NS4)基因重组抗原C100，5-1-1分别包被的微量板孔试剂盒(由北京高达生物制品研究所供给)，用ELISA法，每份重复检测2遍，按说明书操作及判断结果，并结合正常对照进行分析. 对急性病例留取病后3d～6mo血清，1次/2wk，13例随访7mo～2a，慢性病例连续随访1a～6a，同时检测HCV RNA (RT-PCR)，抗-HCV(第三代试剂盒，ELISA)及ALT.
, 百拇医药
统计学处理 POMS 2.00版，χ2检验，t检验.
2 结果
对75例患者共检测128次，均为抗-HCV阳性血清，HCV RNA检出率为71.9%. 抗-CP9，抗-CP10，抗-C100，抗-5-1-1总检出率依次为72.7%，78.9%，50.8%，76.6%. 33例急性丙型肝炎均有输血或应用血制品史，42例慢性肝炎、肝硬变者36例既往有输血、应用血制品史或光量子治疗史，6例感染途径不详. 急性丙型肝炎共检测52份，各抗体检出率见表1，其中0.5a～2a随访13例. 慢性丙型肝炎各抗体、HCV RNA检出率及其与ALT水平的关系见表2. 不同编码区抗体联合检测结果及其与HCV RNA，ALT的关系见表3.
表1 急性丙型肝炎不同编码区抗体和HCV RNA检出率(n=52)
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aP<0.05，bP<0.01，vs .
表2 慢性丙肝不同编码区抗体、HCV RNA检出率与ALT水平
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01，vs .
表3 不同编码区抗体联合检测结果及其与HCV RNA，ALT的关系
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01.
3 讨论
丙型肝炎病毒不同编码区抗体的出现与病毒的复制、病情活动程度、病程及预后密切相关. 本结果显示，急性丙型肝炎发病后1wk～2wk抗-CP9，抗-CP10，抗-C100，抗-5-1-1均可检出，但发病早期以抗-CP9，抗-CP10检出率为高，于8wk～12wk达78.6%，85.7%，仅约15.2%于12wk～20wk阴转，同时出现抗-C100及/或抗-5-1-1，患者可逐渐康复. 对13例患者随访8mo～2a，其中10例抗-CP9，抗-CP10持续或间断阳性或伴抗-5-1-1阳性者HCV RNA及ALT反复异常，病情趋于慢性化. 与文献报告相近[2]，表明抗-CP9，抗-CP10，抗-C100持续或反复阳性的慢性丙型肝炎患者病情重、预后差. 而抗-5-1-1阳性只能说明HCV慢性感染，不能说明感染后的病情及病期.
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HCV核心区基因具有高度的保守性，应用核心区合成肽CP9，CP10检测其相应抗体，其特异性及敏感性均较非结构区抗体明显提高. 抗-CP9，抗-CP10于HCV感染后出现早，检出率高，伴随ALT高峰其检出率最高[3]，在急性自限性肝炎随病情的好转检出率逐渐降低；若持续或反复阳性则病情慢性化. 5-1-1为NS4区抗原，将5-1-1与之重叠的3个克隆联结起来即构成了C100抗原，其相应抗体于HCV感染后出现时间变化较大，仅1/3患者可于早期出现，多数患者于发病后，4wk～32wk出现，平均15wk，最长可达1a以上，出现后可持续1a～2a或更长. 而在慢性丙型肝炎可持续或间断阳性，并与病情轻重有关，病情重则检出率高，本研究中以慢性肝炎重度检出率最高，达94.1%. 通过对四种抗体联合检测的结果和其与HCV RNA，ALT关系的综合分析发现：①抗-CP9，抗-CP10或伴抗-C100，抗-5-1-1阳性提示急性HCV感染或慢性HCV感染病毒复制及病情活动；②仅抗-C100及(或)抗-5-1-1阳性提示急性丙型肝炎康复或慢性丙型肝炎病情缓解[2]. 我们还发现约18.1%的患者血清中经随访观察未出现抗-C100，但可检出抗-CP9，抗-CP10，抗-5-1-1，故不同编码区抗体的联合检测可提高丙型肝炎的确诊率，有助于指导临床治疗[1].
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4 参考文献
1 病毒性肝炎防治方案(试行). 中华传染病杂志，1995；13：241
2 Nagayama R, Miyake K, Tsuda F. IgM antibody to a hepatitis C virus core peptide(C14) for monitoring activity of liver disease in
patients with acute or chronic hepatitis C. J Med Virol, 1994;43:311
3 郝飞，李梦东. 输血后丙型肝炎早期抗体应答规律的观察. 中华内科杂志，1994；33：593, http://www.100md.com(南月敏1 张进贵2 谢永富2 刘金星1 李兵顺1 王麟士1)
项目负责人 南月敏河北医科大学第三医院 1传染科
收稿日期 1999-04-28
Subject headings hepatitis C virus; antibody, viral; hepatitis C
主题词 丙型肝炎病毒;抗体，病毒/分析；肝炎，丙型
第三代试剂盒虽然提高了HCV抗体检出率，但仍存在假阳性及假阴性. 我们采用合成肽及基因重组抗原对相应的核壳蛋白和非结构区抗体进行检测，为丙肝的诊治提供依据.
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1 材料和方法
1.1 材料 根据1995年北京全国传染病与寄生虫病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》[1]诊断标准，病例选自我院1992-05/1998-05传染科住院患者，抗-HCV阳性或伴HCV RNA阳性结合流行病学资料及临床表现确诊的丙型肝炎75例，男50例，女25例. 年龄10岁～68岁，平均44岁. 其中急性肝炎33例，慢性肝炎轻度16例，中度11例，重度11例，肝炎肝硬变4例. 另选30例健康体检者作对照.
1.2 方法 采用HCV核壳蛋白合成肽抗原CP9，CP10及非结构区(NS4)基因重组抗原C100，5-1-1分别包被的微量板孔试剂盒(由北京高达生物制品研究所供给)，用ELISA法，每份重复检测2遍，按说明书操作及判断结果，并结合正常对照进行分析. 对急性病例留取病后3d～6mo血清，1次/2wk，13例随访7mo～2a，慢性病例连续随访1a～6a，同时检测HCV RNA (RT-PCR)，抗-HCV(第三代试剂盒，ELISA)及ALT.
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统计学处理 POMS 2.00版，χ2检验，t检验.
2 结果
对75例患者共检测128次，均为抗-HCV阳性血清，HCV RNA检出率为71.9%. 抗-CP9，抗-CP10，抗-C100，抗-5-1-1总检出率依次为72.7%，78.9%，50.8%，76.6%. 33例急性丙型肝炎均有输血或应用血制品史，42例慢性肝炎、肝硬变者36例既往有输血、应用血制品史或光量子治疗史，6例感染途径不详. 急性丙型肝炎共检测52份，各抗体检出率见表1，其中0.5a～2a随访13例. 慢性丙型肝炎各抗体、HCV RNA检出率及其与ALT水平的关系见表2. 不同编码区抗体联合检测结果及其与HCV RNA，ALT的关系见表3.
表1 急性丙型肝炎不同编码区抗体和HCV RNA检出率(n=52)
| 抗体种类 | 阳性数 | 阳性率(%) |
| 抗-CP9 | 38 | 73.1b |
| 抗-CP10 | 40 | 76.9b |
| 抗-C100 | 19 | 36.5ab |
| 抗-5-1-1 | 32 | 61.5a |
| HCV RNA | 32 | 61.5 |
| 抗-HCV | 52 | 100.0 |
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aP<0.05，bP<0.01，vs .
表2 慢性丙肝不同编码区抗体、HCV RNA检出率与ALT水平
| 慢性肝炎 | n | 抗-CP9 | 抗-CP10 | 抗-C100 | 抗-5-1-1 | HCV RNA | ALT(x±s，U/L) |
| 轻度 | 31 | 19a | 21a | 17b | 25 | 21 | 56±16 |
| 中度 | 23 | 16b | 20 | 11b | 21 | 15 | 93±53 |
| 重度 | 17 | 16ab | 17a | 16b | 15 | 16 | 117±66 |
| 肝硬变 | 4 | 4 | 3 | 2 | 3 | 3 | 58±19 |
| 总计 | 75 | 55 | 61 | 46 | 64 | 55 | 80±51 |
| % | 73.3 | 81.3 | 61.8 | 85.3 | 73.3 |
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aP<0.05，bP<0.01，vs .
表3 不同编码区抗体联合检测结果及其与HCV RNA，ALT的关系
| 检出抗体 | n | HCV RNA | ALT(x±s，U/L) |
| 抗-CP9 抗-CP10 抗-C100 抗-5-1-1 (+) | 53 | 47b | 102±49ab |
| 抗-CP9 抗-CP10 抗-C100 (+) | 7 | 5 | 126±88 |
| 抗-CP9 抗-CP10 抗-5-1-1 (+) | 30 | 18b | 73±35ab |
| 抗-CP9 抗-CP10 (+) | 23 | 17 | 130±73b |
| 抗-C100 抗-5-1-1 (+) | 14 | 4b | 53±19b |
| 抗-CP9 抗-CP10 抗-C100抗-5-1-1 (-) | 1 | 1 | 74 |
| 128 | 92 | 96±58 |
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01.
3 讨论
丙型肝炎病毒不同编码区抗体的出现与病毒的复制、病情活动程度、病程及预后密切相关. 本结果显示，急性丙型肝炎发病后1wk～2wk抗-CP9，抗-CP10，抗-C100，抗-5-1-1均可检出，但发病早期以抗-CP9，抗-CP10检出率为高，于8wk～12wk达78.6%，85.7%，仅约15.2%于12wk～20wk阴转，同时出现抗-C100及/或抗-5-1-1，患者可逐渐康复. 对13例患者随访8mo～2a，其中10例抗-CP9，抗-CP10持续或间断阳性或伴抗-5-1-1阳性者HCV RNA及ALT反复异常，病情趋于慢性化. 与文献报告相近[2]，表明抗-CP9，抗-CP10，抗-C100持续或反复阳性的慢性丙型肝炎患者病情重、预后差. 而抗-5-1-1阳性只能说明HCV慢性感染，不能说明感染后的病情及病期.
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HCV核心区基因具有高度的保守性，应用核心区合成肽CP9，CP10检测其相应抗体，其特异性及敏感性均较非结构区抗体明显提高. 抗-CP9，抗-CP10于HCV感染后出现早，检出率高，伴随ALT高峰其检出率最高[3]，在急性自限性肝炎随病情的好转检出率逐渐降低；若持续或反复阳性则病情慢性化. 5-1-1为NS4区抗原，将5-1-1与之重叠的3个克隆联结起来即构成了C100抗原，其相应抗体于HCV感染后出现时间变化较大，仅1/3患者可于早期出现，多数患者于发病后，4wk～32wk出现，平均15wk，最长可达1a以上，出现后可持续1a～2a或更长. 而在慢性丙型肝炎可持续或间断阳性，并与病情轻重有关，病情重则检出率高，本研究中以慢性肝炎重度检出率最高，达94.1%. 通过对四种抗体联合检测的结果和其与HCV RNA，ALT关系的综合分析发现：①抗-CP9，抗-CP10或伴抗-C100，抗-5-1-1阳性提示急性HCV感染或慢性HCV感染病毒复制及病情活动；②仅抗-C100及(或)抗-5-1-1阳性提示急性丙型肝炎康复或慢性丙型肝炎病情缓解[2]. 我们还发现约18.1%的患者血清中经随访观察未出现抗-C100，但可检出抗-CP9，抗-CP10，抗-5-1-1，故不同编码区抗体的联合检测可提高丙型肝炎的确诊率，有助于指导临床治疗[1].
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4 参考文献
1 病毒性肝炎防治方案(试行). 中华传染病杂志，1995；13：241
2 Nagayama R, Miyake K, Tsuda F. IgM antibody to a hepatitis C virus core peptide(C14) for monitoring activity of liver disease in
patients with acute or chronic hepatitis C. J Med Virol, 1994;43:311
3 郝飞，李梦东. 输血后丙型肝炎早期抗体应答规律的观察. 中华内科杂志，1994；33：593, http://www.100md.com(南月敏1 张进贵2 谢永富2 刘金星1 李兵顺1 王麟士1)