保证血液制品的安全性
随着血液制品在临床上广泛应用，尤其是白蛋白、凝血因子制剂、免疫球蛋白等使用量的大增，如何保证血液制品的安全性、预防和控制经血液途径传播的疾病，已成为世界医药卫生界乃至整个社会普遍关注的焦点。在日前由中国药学会召开的血液制品质量控制暨临床应用研讨会上，上海绿十字生物制品有限公司SeonwookLee博士指出，在血液制品的生产中，应采取各种技术和方法确保其安全性。(7{-2e., 百拇医药
血源管理(7{-2e., 百拇医药
血液制品是以人血浆为原材料，采用蛋白质分离技术经深加工票付桑?br>救死扶伤的重要药品。研究表明，人血或血液制品易携带并传播多种病原体，尤其是感染率高、危害严重的艾滋病病毒、乙肝病毒和丙肝病毒。SeonwookLee博士说，1977～1984年，美国有3万受血者感染HIV；1985年在法国，3000名血液病病人中有1200名感染了HIV。据WHO报告，5%AIDS是由于使用血液制品引起的，而我国的第1例AIDS也是由于使用血液制品导致的。(7{-2e., 百拇医药
由于血液制品的原材料来源于人体血浆，因而要加强对原料血浆的质控，包括保证原料血浆来源于合法采浆站的机采血浆、对献血员要有严格的筛选、对所采血浆要有严格的抽查和复查制度。采血员应对献血者询问病史、查病史档案，排除不宜献血者，特别是排除高危人群、各类肝炎及艾滋病患者；并进行临床检查和化验，指定检测系统和项目，在高发区还要应用敏感的检测方法。考虑到病毒感染窗口期的问题，应将原料血浆放置一段时间后再行检测，病毒检测为阳性的血浆应予销毁，高危险人群的血浆也应销毁。(7{-2e., 百拇医药
病毒的检测、灭活和去除(7{-2e., 百拇医药
◆病毒检测(7{-2e., 百拇医药
血液制品传播的病毒有许多种，主要包括HBV(引起乙肝)、HDV(引起丁肝)、HCV(引起丙肝)、HIV-Ⅰ和HIV-Ⅱ(引起艾滋病)、HTLV-1和HTLV-2(引起成人T淋巴细胞白血病)。多数国家将HIV-Ⅰ、HIV-Ⅱ、HBV、HCV、HTLV-1作为血液制品中病毒检测的必检项目；我国规定，将HIV-Ⅰ、HIV-Ⅱ、HBV、HCV作为必检项目。(7{-2e., 百拇医药
对HBsAg、Anti-HCV、Anti-HIV，可采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测；对HIV-Ⅰ、HIV-Ⅱ、HBV、HCV，可采用PCR/NAT(核酸扩增试验)进行检测。
◆病毒灭活.lz, 百拇医药
对于病毒的灭活，SeonwookLee博士介绍，常用的方法包括巴氏消毒法、有机溶剂结合表面活性剂(S/D)法、干热法、β-丙内酯/UV等。.lz, 百拇医药
巴氏消毒法(60℃、10小时)对脂包膜和非脂包膜病毒均可灭活。临床使用记录显示：巴氏消毒法是病毒灭活最可靠的方法。S/D法是利用有机溶剂使病毒表面类脂脱落、结构破坏，从而使病毒丧失感染活性。S/D法对脂包膜病毒灭活效果较好，可使HBV、HCV滴度下降大于4log，但对非脂包膜病毒无灭活作用。干热法仅用于冻干制剂。以人凝血因子Ⅷ为例，临床试验表明，80℃、72小时干热处理，能有效灭活HBV、HCV、HIV。β-丙内酯对HIV和HCV有显著的灭活效果，再经紫外线照射，可明显增加对HIV、HCV、HBV和HAV的灭活效果。.lz, 百拇医药
Seon wook Lee博士随之比较了几种方法的优劣：巴氏消毒法可灭活脂包膜病毒和非脂包膜病毒，但对耐热病毒灭活效果不理想；S/D法有利于保持血浆蛋白的完整性，但对非脂包膜病毒灭活效果不理想；干热法经济，但只用于冻干制剂。.lz, 百拇医药
◆病毒去除.lz, 百拇医药
膜过滤法、层析法、纳米膜过滤法是病毒去除的几种主要方法。.lz, 百拇医药
膜过滤法中使用的滤膜由高分子聚合物制成，一般孔径为0.22微米。层析法是指利用各种组分与固定相亲和力或相互作用方面的差异，来实现各种组分的分离。而对一些表面直径较小的病毒如HAV和细小病毒B19等，利用纳米膜过滤是最有效的去除方法。但其存在的问题是：由于制品粘度高，膜孔径不宜过小，限制了对HCV的清除；膜孔径大小控制的稳定性会影响去除的效果；小于病毒颗粒直径的膜孔径被堵塞时，会降低产品流速，影响产量。.lz, 百拇医药
SeonwookLee博士指出，加强血液制品安全性问题是血液制品永恒的主题，通过病毒的灭活和去除程序，则可在一定程度上保证血液制品的安全性。随着先进技术的发展托碌牟《镜姆⑾郑褐破飞ノ挥Σ欢系匮芯啃碌牟《久鸹?br>和去除方法。目前，研发中的新方法还包括流体静力学高压法、亚甲蓝处理法、光化学法、超热灭活-微波技术等。.lz, 百拇医药
纯度和生物活性.lz, 百拇医药
保证血液制品的安全性，不仅在于要控制原料血浆及进行病毒的检测、灭活和去除，还要考虑其纯度和生物活性。SeonwookLee博士谈到，其分离纯化技术主要有低温乙醇法、亲和层析技术、Gradiflow技术、离子交换层析技术、PEG技术等。.lz, 百拇医药
低温乙醇法系根据血浆蛋白理化性质的差别，加入不同浓度的盐或有机溶剂，通过改变影响蛋白质稳定性的条件，分别沉淀进行提取的方法。其优点是：产量高，适宜规模生产；可保持蛋白质的天然性质；有抑菌作用，可增加制品的安全性；可同时分离多种血浆成分，适于血浆综合利用。亲和层析技术系利用生物高分子可特异、可逆地结合配基的生物学特性，专一地分离纯化生物高分子的方法。其优点是可浓缩、纯化血浆中的目的蛋白；能提取血浆中含量极低的微量蛋白。Gradiflow技术是一种线性规模制备电泳系统，主要利用血浆各种蛋白质所带电荷和分子大小的不同而达到分离的目的。离子交换层析技术则是利用带电荷的不同来分离蛋白质。其优点是分离制品纯度高；聚合体含量低。PEG技术以PEG为沉淀剂，直接进行分段沉淀，或在羟乙基淀粉的保护下进行沉淀。其优点是未经任何酶处理及化学修饰，保持了分子的完整性；提高了蛋白的纯度。.lz, 百拇医药
以人血白蛋白为例，国外多采用低温乙醇沉淀法、压滤技术制备。静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG)，一般采用PEG技术、亲和层析技术分离纯化。人凝血因子Ⅷ(AHF-Ⅷ)，不同的厂家分别采用亲和层析技术和离子交换层析技术制备。.lz, 百拇医药
Seon wook Lee博士还特别强调，现代生物学技术如重组技术在血液制品生产中的应用日益广泛。重组融合蛋白技术是将治疗蛋白和多肽的基因序列与白蛋白的基因序列融合，通过在酵母中的高效表达，来获得融合蛋白的技术。用全新的生产技术从原料血浆生产血液制品可大幅度提高血液制品的产量和纯度。(白毅 )
血源管理(7{-2e., 百拇医药
血液制品是以人血浆为原材料，采用蛋白质分离技术经深加工票付桑?br>救死扶伤的重要药品。研究表明，人血或血液制品易携带并传播多种病原体，尤其是感染率高、危害严重的艾滋病病毒、乙肝病毒和丙肝病毒。SeonwookLee博士说，1977～1984年，美国有3万受血者感染HIV；1985年在法国，3000名血液病病人中有1200名感染了HIV。据WHO报告，5%AIDS是由于使用血液制品引起的，而我国的第1例AIDS也是由于使用血液制品导致的。(7{-2e., 百拇医药
由于血液制品的原材料来源于人体血浆，因而要加强对原料血浆的质控，包括保证原料血浆来源于合法采浆站的机采血浆、对献血员要有严格的筛选、对所采血浆要有严格的抽查和复查制度。采血员应对献血者询问病史、查病史档案，排除不宜献血者，特别是排除高危人群、各类肝炎及艾滋病患者；并进行临床检查和化验，指定检测系统和项目，在高发区还要应用敏感的检测方法。考虑到病毒感染窗口期的问题，应将原料血浆放置一段时间后再行检测，病毒检测为阳性的血浆应予销毁，高危险人群的血浆也应销毁。(7{-2e., 百拇医药
病毒的检测、灭活和去除(7{-2e., 百拇医药
◆病毒检测(7{-2e., 百拇医药
血液制品传播的病毒有许多种，主要包括HBV(引起乙肝)、HDV(引起丁肝)、HCV(引起丙肝)、HIV-Ⅰ和HIV-Ⅱ(引起艾滋病)、HTLV-1和HTLV-2(引起成人T淋巴细胞白血病)。多数国家将HIV-Ⅰ、HIV-Ⅱ、HBV、HCV、HTLV-1作为血液制品中病毒检测的必检项目；我国规定，将HIV-Ⅰ、HIV-Ⅱ、HBV、HCV作为必检项目。(7{-2e., 百拇医药
对HBsAg、Anti-HCV、Anti-HIV，可采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测；对HIV-Ⅰ、HIV-Ⅱ、HBV、HCV，可采用PCR/NAT(核酸扩增试验)进行检测。
◆病毒灭活.lz, 百拇医药
对于病毒的灭活，SeonwookLee博士介绍，常用的方法包括巴氏消毒法、有机溶剂结合表面活性剂(S/D)法、干热法、β-丙内酯/UV等。.lz, 百拇医药
巴氏消毒法(60℃、10小时)对脂包膜和非脂包膜病毒均可灭活。临床使用记录显示：巴氏消毒法是病毒灭活最可靠的方法。S/D法是利用有机溶剂使病毒表面类脂脱落、结构破坏，从而使病毒丧失感染活性。S/D法对脂包膜病毒灭活效果较好，可使HBV、HCV滴度下降大于4log，但对非脂包膜病毒无灭活作用。干热法仅用于冻干制剂。以人凝血因子Ⅷ为例，临床试验表明，80℃、72小时干热处理，能有效灭活HBV、HCV、HIV。β-丙内酯对HIV和HCV有显著的灭活效果，再经紫外线照射，可明显增加对HIV、HCV、HBV和HAV的灭活效果。.lz, 百拇医药
Seon wook Lee博士随之比较了几种方法的优劣：巴氏消毒法可灭活脂包膜病毒和非脂包膜病毒，但对耐热病毒灭活效果不理想；S/D法有利于保持血浆蛋白的完整性，但对非脂包膜病毒灭活效果不理想；干热法经济，但只用于冻干制剂。.lz, 百拇医药
◆病毒去除.lz, 百拇医药
膜过滤法、层析法、纳米膜过滤法是病毒去除的几种主要方法。.lz, 百拇医药
膜过滤法中使用的滤膜由高分子聚合物制成，一般孔径为0.22微米。层析法是指利用各种组分与固定相亲和力或相互作用方面的差异，来实现各种组分的分离。而对一些表面直径较小的病毒如HAV和细小病毒B19等，利用纳米膜过滤是最有效的去除方法。但其存在的问题是：由于制品粘度高，膜孔径不宜过小，限制了对HCV的清除；膜孔径大小控制的稳定性会影响去除的效果；小于病毒颗粒直径的膜孔径被堵塞时，会降低产品流速，影响产量。.lz, 百拇医药
SeonwookLee博士指出，加强血液制品安全性问题是血液制品永恒的主题，通过病毒的灭活和去除程序，则可在一定程度上保证血液制品的安全性。随着先进技术的发展托碌牟《镜姆⑾郑褐破飞ノ挥Σ欢系匮芯啃碌牟《久鸹?br>和去除方法。目前，研发中的新方法还包括流体静力学高压法、亚甲蓝处理法、光化学法、超热灭活-微波技术等。.lz, 百拇医药
纯度和生物活性.lz, 百拇医药
保证血液制品的安全性，不仅在于要控制原料血浆及进行病毒的检测、灭活和去除，还要考虑其纯度和生物活性。SeonwookLee博士谈到，其分离纯化技术主要有低温乙醇法、亲和层析技术、Gradiflow技术、离子交换层析技术、PEG技术等。.lz, 百拇医药
低温乙醇法系根据血浆蛋白理化性质的差别，加入不同浓度的盐或有机溶剂，通过改变影响蛋白质稳定性的条件，分别沉淀进行提取的方法。其优点是：产量高，适宜规模生产；可保持蛋白质的天然性质；有抑菌作用，可增加制品的安全性；可同时分离多种血浆成分，适于血浆综合利用。亲和层析技术系利用生物高分子可特异、可逆地结合配基的生物学特性，专一地分离纯化生物高分子的方法。其优点是可浓缩、纯化血浆中的目的蛋白；能提取血浆中含量极低的微量蛋白。Gradiflow技术是一种线性规模制备电泳系统，主要利用血浆各种蛋白质所带电荷和分子大小的不同而达到分离的目的。离子交换层析技术则是利用带电荷的不同来分离蛋白质。其优点是分离制品纯度高；聚合体含量低。PEG技术以PEG为沉淀剂，直接进行分段沉淀，或在羟乙基淀粉的保护下进行沉淀。其优点是未经任何酶处理及化学修饰，保持了分子的完整性；提高了蛋白的纯度。.lz, 百拇医药
以人血白蛋白为例，国外多采用低温乙醇沉淀法、压滤技术制备。静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG)，一般采用PEG技术、亲和层析技术分离纯化。人凝血因子Ⅷ(AHF-Ⅷ)，不同的厂家分别采用亲和层析技术和离子交换层析技术制备。.lz, 百拇医药
Seon wook Lee博士还特别强调，现代生物学技术如重组技术在血液制品生产中的应用日益广泛。重组融合蛋白技术是将治疗蛋白和多肽的基因序列与白蛋白的基因序列融合，通过在酵母中的高效表达，来获得融合蛋白的技术。用全新的生产技术从原料血浆生产血液制品可大幅度提高血液制品的产量和纯度。(白毅 )