邵清,成军, 王琳,张健, 梁耀东,刘敏, 李强,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市 100039

    白雪帆,中国人民解放军第四军医大学唐都医院传染科陕西省西安市 710039

    卢成哲,中国人民解放军解放军第206医院CT室吉林省通化市 134001

    国家自然科学基金攻关项目,No. C03011402, No. C30070689

    军队“九、五”科技攻关项目,No. 98D063

    军队回国留学人员启动基金项目,No. 98H038

    军队“十、五”科技攻关青年基金项目,No. 01Q138

    军队“十、五”科技攻关面上项目,No. 01MB135

    项目负责人:成军, 100039, 北京市西四环中路100号，中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn

    电话:010-66933391 传真:010-63801283

    收稿日期:2004-03-15 接受日期:2004-05-11

    摘要

    目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式调节靶基因编码产物NS3TP6蛋白结合蛋白的基因.

    方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCVNS3TP6蛋白基因，连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落，增菌后提取质粒，转化入大肠杆菌，提取质粒并测序，进行生物信息学分析.

    结果:成功克隆出HCVNS3TP6蛋白基因并在酵母细胞中表达，配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X-a-半乳糖(X-a-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共7个，其中3个人类白细胞CD14抗原，1个人类免疫球蛋白λ轻链，3个人类推定蛋白基因(AC124014，AC097504，AC023785).

    结论:成功克隆出NS3TP6蛋白的结合蛋白 ......