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编号:10692508
直肠癌旁移行黏膜中Survivin基因表达的意义
http://www.100md.com 2004年9月15日 《世界华人消化杂志》 2004年第9期
     苏 琪,吴硕东, 殷红专,韩霞, 陈春生,冯勇, 刘恩卿,中国医科大学第二临床学院普外四科 辽宁省沈阳市 110004

    辽宁省自然科学基金资助项目:No. 972255

    项目负责人:苏琪, 110004, 辽宁省沈阳市和平区三好街36号,中国医科大学第二临床学院普外四科.suqi100@hotmail.com

    电话:024-83955072

    收稿日期:2004-05-07 接受日期:2004-06-17

    摘要
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    目的
:探讨凋亡抑制基因survivin在直肠癌旁移行黏膜中的表达情况,为保肛手术的选择提供理论依据.

    方法:应用黏液组化方法确定各种组织类型直肠癌旁移行黏膜的分布规律,应用免疫组织化学方法检测凋亡抑制基因survivin在直肠癌旁移行黏膜中的表达情况.

    结果:直肠癌旁移行黏膜范围,在黏液癌(平均7.83cm)明显大于乳头状癌及管状腺癌(P<0.01),在DukesC期(平均5.61cm)明显大于DukesA、B期(P<0.05). 正常黏膜(NM)、移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中均有survival基因产物表达,由正常直肠黏膜到癌组织表达率逐渐增加,四组间差别有显著意义(P<0.05).

, 百拇医药     结论:在移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中就存在survivin基因表达上调;在黏液癌及DukesC期直肠癌旁移行黏膜范围明显增宽,提示对低位黏液癌及DukesC期直肠癌保肛手术应慎重.

    苏琪,吴硕东,殷红专, 韩霞,陈春生, 冯勇,刘恩卿. 直肠癌旁移行黏膜中Survivin基因表达的意义. 世界华人消化杂志 2004;12(9):2201-2202

    0 引言Survivin 是凋亡抑制基因(inhibitorof apoptosis protein,IAP)家族的新成员.近年来,对survivin的分子生物学,凋亡抑制机制及其与肿瘤发展关系的研究已取得一定进展.随着保肛手术逐渐增加,特别是腹腔镜等微创技术在直肠癌中的应用,根治术后2a内局部复发有逐年增加的趋势,其中吻合口复发者占5-15%.所以癌旁移行黏膜(tansitionalmucosa,TM)的研究更加受到重视[1-2].我们率先将凋亡抑制基因survivin应用于直肠癌旁TM的研究,并与正常黏膜及癌组织进行对照如下.
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    1 材料和方法

    1.1 材料
2000/2003年手术切除的直肠癌标本 73例,男41例,女32例;年龄53.0±12.3岁.乳头状腺癌32例,管状腺癌23例,黏液腺癌16例,未分化癌2例.Survivin羊抗人多克隆抗体(sc-8806)为SantaCruz公司产品、survivin一抗工作浓度为1:50,SP试剂盒为Zymed公司产品,高铁双胺奥蓝(HID-AB)试剂盒购于上海虹桥医用试剂研究所.

    1.2 方法 标本经40g/L的中性甲醛固定后,沿肠管纵向自癌肿向两端每0.5 cm等长取材,近端平均距癌瘤20cm,远端4.5cm,石蜡包埋,制成5mm厚切片.每例切片均作HID-AB黏液染色,免疫组化染色,用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照,用已知阳性切片作为阳性对照.直肠癌标本均由手术病例证实.临床病理分期按Dukes分期,组织学分类、分期参照全国大肠癌协会统一标准,有两名病理学教授分别阅片.HID-AB黏液染色采用Filipe标准[1],正常黏膜腺管杯状细胞内出现黑色的硫酸粘蛋白,而TM则腺体中超过50%杯状细胞中出现蓝色唾液酸粘蛋白染色.免疫组化S-P染色:凡染色强度明显高于背景者为阳性表达,将阳性细胞按数量及染色强度分为3级:表达弱阳性(+),即阳性细胞数小于10%;表达强阳性(+++),即阳性细胞数占60%以上;中强度阳性(++),即阳性细胞数介于以上二者之间;染色强度与背景一致者为阴性.
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    统计学处理计量资料采用t检验;计数资料采用x2分析.

    2 结果

    2.1 黏液组化染色结果
73例直肠癌中有70例检出了癌旁移行黏膜,检出率95.8%,癌旁TM分布范围0-12.3(平均3.14)cm, 其中52例(71%)局限在癌旁3cm范围内. 黏液腺癌旁TM分布最广,平均7.83±1.36cm,明显大于乳头状腺癌(1.08±1.36)及管状腺癌(2.13±1.91cm P <0.01). Dukes分期越晚,其相应癌旁TM分布越广,DukesC期(5.61±4.52cm)明显大于DukesA、B期(1.05±0.84和2.70±2.60cm P <0.01,P<0.05).

    2.2 免疫组化染色结果 正常黏膜(NM)、移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中均有survival基因产物表达,由正常直肠黏膜到癌组织表达率逐渐增加,4组间差别有显著意义(P<0.05). 在癌组织及癌旁组织,survival基因产物均位于细胞质,未见细胞核及细胞膜阳性,阳性细胞成弥漫性、局灶性或散在性分布.60例survivin阳性的直肠癌病例中,TM平均范围3.8cm,13例survivin阴性的直肠癌病例中TM平均范围1.2cm,二者间差异有显著意义(P <0.05)(表1).
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    表1Survivin基因产物在直肠癌及癌前状态的表达
上皮类型n阴性弱阳性阳性强阳性阳性率%
正常粘膜32292109.38
移行粘膜7047128332.86
非典增生211243242.86
731520182079.45


    x2检验x20.05(3)=10.23 P <0.05.
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    3 讨论Survivin 是凋亡抑制基因(inhibitorof apoptosis protein ,IAP)家族的新成员.Survivin 的结构较为独特,他仅含有单一的BIR功能区,没有指环结构,是一个142个氨基酸的蛋白.Survivin 和EPR-1位于染色体(17q25)的同一基因组,长度范围在75-130kb,他们分别由不同的mRNA(1.9kb和1.3 kb)所编码.Survivin表达于人与鼠的胚胎发育组织,但在正常成人组织很少表达[3-5].研究表明survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子[5].Caspase 是细胞凋亡的核心机制,其级联式激活并溶解蛋白质,决定了凋亡形态的变化[7].Survivin直接作用于Caspase,主要抑制Caspase-3,Caspase-7的活性,阻断细胞的凋亡过程.另外survivin也可以通过p21间接抑制Caspase,其机制是survivin与细胞周期调控因子CDK4形成survivin-CDK4复合体,使得p21从CDK4的复合体中释放出来,p21进一步与线粒体Caspase3结和,抑制其活性,阻止细胞凋亡[3-5].
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    近几年来,对survivin的分子生物学,凋亡抑制机制及其与肿瘤发展,血管形成,细胞周期关系的研究正引起国外学者的广泛关注.但目前尚未见到将其用于癌旁移行黏膜的研究.我们应用黏液组织化学方法观察了直肠癌旁TM的分布情况.应用免疫组织化学的方法研究人原发性直肠癌旁TM中survivin基因产物的表达,此方法具有简便、快速等特点且能够观察survivin基因产物在良恶性细胞中的定位.结果显示在癌旁正常黏膜survivin基因产物阳性表达最低(9.38%),在移行黏膜、非典型增生、癌组织(79.45%)逐渐增高,4组间差异有显著意义(P<0.05). 提示该基因对直肠癌的发生发展起重要作用,survivin基因有望成为直肠癌基因治疗的新靶点.

    在survivin基因产物表达阳性的直肠癌病例中,TM范围大于survivin阴性的病例(P <0.05),表明survivin基因的增加可能是导致癌旁移行性变化的因素之一.在直肠癌的发生过程中,从TM开始就有survivin基因产物的表达上凋,表明survivin基因增加与直肠癌的发生有关,可作为判断肿瘤发生可能性的有用标志物,并提示TM具有一定的恶性潜能.为此,在直肠癌微创及保肛门手术时,应该彻底切除癌旁TM,以减少局部复发率,提高生活质量.直肠癌survivin基因产物表达上调与TM的范围之间存在一定相关性,其具体机制有待分子生物学深入研究.
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    4 参考文献1 苏琪, 王宇令,刘恩卿, 陈春生,冯勇, 王伟,李冠群, 彭春辉.直肠癌旁移行粘膜变化规律及其临床意义.中国肛肠病杂志

    2000;20:3-5

    2 谢正勇, 卿三华.国人青年结直肠癌解剖部位分布及临床病理特点.世界华人消化杂志 2003;11:1511-1514

    3 Ambrosini G, Adida C, Sirugo G, Altieri DC. Induction of apoptosisand inhibition of cell proliferation by survivin gene

    targeting. J Biol Chen 1998;273:11177-11182
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    4 Adida C, Crotty PL, Mograth J, Berrebi D, Diebold J, Altieri DC.Developmentally regulated expression of the novel cancer

    anti-apoptosis gene survivin in human andmouse differentiation. Am J Pathol 1998;152:43-49

    5 Suzuki A, Ito T, Kawano H, Hayashida M, Hayasaki Y, Tsutomi Y,Akahane K, Nakano T, Miura M, Shiraki K. Survivin

    initiates procaspase 3/P21 complexformation as a result of interaction with Cdk4 to resist Fas-mediatedcell

    death. Ncogene 2000;19:1346-1353, 百拇医药( 苏 琪, 吴硕东, 殷红专, 韩 霞, 陈春生, 冯 勇, 刘恩卿)
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