胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL的基因转录与表达
齐明,周世庆,汪素文, 真岩波,张淑红, 山东大学临床医学院, 济南市中心医院消化内科 山东省济南市 250013
项目负责人:周世庆, 250013,山东省济南市解放路105号, 济南市中心医院消化内科
电话: 0531-5695061
收稿日期: 2004-11-01 接受日期: 2004-11-22
摘要
目的:探讨胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因转录与表达情况，为胃癌与Fas及FasL基因的相关研究提供帮助.
方法:利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因mRNA转录情况.采用免疫细胞化学染色鉴定胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因有无蛋白表达及其表达程度.
, 百拇医药
结果:从提取的胃癌细胞总RNA中分别扩增出Fas及FasL的DNA片段，免疫细胞化学染色亦显示胃腺癌细胞株SGC7901中存在Fas及FasL蛋白表达产物.
结论:中国人胃腺癌细胞株SGC7901中存在Fas及FasL基因的mRNA转录及蛋白的表达.
齐明, 周世庆, 汪素文, 真岩波, 张淑红. 胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL的基因转录与表达. 世界华人消化杂志 2005;13(4):565-566
(PDF) 胃癌细胞株SGC7901细胞中Fas、FasL基因mRNA的表达. M:DNA Marker; 1: b-actin; 2: Fas; 3: FasL.
2.2 免疫组织化学染色显示胃癌细胞株SGC7901细胞中有Fas、FasL蛋白的表达，两种蛋白主要分布在细胞质中，呈棕黄色(图2)，其阳性表达率分别为42.8%和74.3%.
, 百拇医药
图2 胃癌细胞株SGC7901细胞染色. A:Fas; B:FasL.
3 讨论Fas为I型跨膜蛋白，属肿瘤坏死因子受体(TNFR)及神经生长因子受体(NGFR)家族成员，Fas广泛存在于多种类型的细胞膜上;FasL为Ⅱ型跨膜糖蛋白，属TNF家族成员，FasL主要表达于活性T淋巴细胞[2]、NK细胞及LAK细胞等免疫细胞的细胞膜上，此外在免疫豁免组织(脑、睾丸、眼)的细胞膜上也有FasL的天然表达[3].FasL是一种细胞凋亡因子，为Fas的配体，当其与细胞表面的Fas结合后可激活细胞内凋亡信号，引起Fas阳性细胞的凋亡[4].
活性T细胞及NK 细胞通过利用Fas/FasL系统介导的细胞凋亡作用，清除体内的病毒感染细胞、异体移植物、衰老的单核细胞、中性粒细胞以及部分激活的T、B细胞来发挥细胞免疫、维持免疫平衡及调节免疫反应等重要作用.在免疫豁免组织中，由于这些组织的细胞膜上FasL表达，可导致邻近的活性T淋巴细胞凋亡，使这些部位免受炎症侵害，从而起到免疫豁免作用.由此可见，通过Fas/FasL系统介导Fas阳性的细胞凋亡不仅可由活性T细胞引起，而且表达FasL的细胞同样可以引起Fas阳性的活性T细胞凋亡，以达到免疫下调作用.研究发现，许多恶性肿瘤细胞膜上Fas表达明显下调，而FasL表达增高[5]，这与免疫豁免组织中表现一致，认为这些恶性肿瘤在机体内类似于免疫豁免组织，使机体对肿瘤的免疫作用下调，从而逃避了机体对肿瘤细胞的免疫清除.亦有学者认为在肿瘤的免疫逃避过程中起关键性作用的是FasL表达增高而不是Fas表达下调[2，5].
, 百拇医药
胃癌细胞株SGC7901是国内学者利用国人胃癌组织自行建株的细胞系，也是国内研究胃癌病因及治疗中最常用的人胃腺癌细胞株[6]，确定其有无Fas和FasL的基因转录和蛋白的表达，将对利用Fas和FasL基因进行胃癌的治疗等相关研究提供极大帮助.Li et al[7]研究发现，Fas蛋白在胃癌组织中的表达为19.0%，在正常胃黏膜中为64.2%;FasL蛋白在胃癌组织中的表达为63.8%，在正常胃黏膜中为45.3%.我们通过RT-PCR和免疫细胞化学染色对SGC7901细胞株中Fas和FasL基因表达情况进行了检测，发现此种细胞株均存在Fas和FasL基因的mRNA转录及较强的蛋白表达，结果与Li et al的结果相符.本研究不仅为以后科研人员利用这种胃癌细胞株进行Fas和FasL基因的相关研究提供了极大的方便，同时也提示中国人胃腺癌细胞也存在Fas和FasL基因的表达，且FasL的表达明显高于Fas的表达.提示在胃癌的发生、发展过程中存在免疫逃逸机制，上调Fas的表达或阻断FasL的表达，将有助于对胃癌的治疗.
, 百拇医药
4 参考文献1 Martin JH, Potthoff A, Ledig S, Cornberg M, Jandl O, Manns MP, Kubicka S, Flemming P, Athmann C, Beil W, Wagner S.
Effect of H pylori on the expression of TRAIL, FasL and their receptor subtypes in human gastric epithelial cells and
their role in apoptosis. Helicobacter 2004;9:371-386
2 Hahne M, Rimoldi D, Schroter M, Romero P, Schreier M, French LE, Schneider P, Bornand T, Fontana A, Lienard D,Cerottini J, Tschopp J. Melanoma cell expression of Fas(Apo-1/CD95)ligand:implications for tumor immune escape.
, 百拇医药
Science 1996;274:1363-1366
3 Medvedev AE, Johnsen AC, Haux J, Steinkjer B, Egeberg K, Lynch DH, Sundan A, Espevik T. Regulation of Fas and Fas
ligand expression in NK cell by cytokine and the involvement of Fas-ligand in NK/LAK cell-mediated cytotoxicity.
Cytokine 1997;9:394-404
4 Dechant MJ, Fellenberg J, Scheuerpflug CG, Ewerbeck V, Debatin KM. Mutation analysis of the apoptotic "death-receptors"
, http://www.100md.com
and the adaptorsTRADD and FADD/MORT-1 in osteosarcoma tumor samples and osteosarcoma celllines.
Int J Cancer 2004;109:661-667
5 Cui H, Sherr DH, el-Khatib M, Matsui K, Panka DJ, Marshak-RothsteinA, Ju ST. Regulation of T-cell death genes:
selective inhibitionof FasL but not Fas mediated function. Cell Immunol 1996;167:276-284
6 富志民, 刘亚伦, 唐国基. 人体胃癌细胞株SGC7901培养及其特性. 肿瘤临床 1984;3:57-60
7 Li Z, Wang Z,Zhao Z, Zhang Y, Ke Y. Expression of Fas, FasL and IFN-gamma in gastriccancer.
Beijing DaxueXuebao 2003;35:386-389
编辑 张海宁, 百拇医药( 齐 明,周世庆,汪素文, 真岩波,张淑红)
项目负责人:周世庆, 250013,山东省济南市解放路105号, 济南市中心医院消化内科
电话: 0531-5695061
收稿日期: 2004-11-01 接受日期: 2004-11-22
摘要
目的:探讨胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因转录与表达情况，为胃癌与Fas及FasL基因的相关研究提供帮助.
方法:利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因mRNA转录情况.采用免疫细胞化学染色鉴定胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL基因有无蛋白表达及其表达程度.
, 百拇医药
结果:从提取的胃癌细胞总RNA中分别扩增出Fas及FasL的DNA片段，免疫细胞化学染色亦显示胃腺癌细胞株SGC7901中存在Fas及FasL蛋白表达产物.
结论:中国人胃腺癌细胞株SGC7901中存在Fas及FasL基因的mRNA转录及蛋白的表达.
齐明, 周世庆, 汪素文, 真岩波, 张淑红. 胃腺癌细胞株SGC7901中Fas及FasL的基因转录与表达. 世界华人消化杂志 2005;13(4):565-566
(PDF) 胃癌细胞株SGC7901细胞中Fas、FasL基因mRNA的表达. M:DNA Marker; 1: b-actin; 2: Fas; 3: FasL.
2.2 免疫组织化学染色显示胃癌细胞株SGC7901细胞中有Fas、FasL蛋白的表达，两种蛋白主要分布在细胞质中，呈棕黄色(图2)，其阳性表达率分别为42.8%和74.3%.
, 百拇医药
图2 胃癌细胞株SGC7901细胞染色. A:Fas; B:FasL.
3 讨论Fas为I型跨膜蛋白，属肿瘤坏死因子受体(TNFR)及神经生长因子受体(NGFR)家族成员，Fas广泛存在于多种类型的细胞膜上;FasL为Ⅱ型跨膜糖蛋白，属TNF家族成员，FasL主要表达于活性T淋巴细胞[2]、NK细胞及LAK细胞等免疫细胞的细胞膜上，此外在免疫豁免组织(脑、睾丸、眼)的细胞膜上也有FasL的天然表达[3].FasL是一种细胞凋亡因子，为Fas的配体，当其与细胞表面的Fas结合后可激活细胞内凋亡信号，引起Fas阳性细胞的凋亡[4].
活性T细胞及NK 细胞通过利用Fas/FasL系统介导的细胞凋亡作用，清除体内的病毒感染细胞、异体移植物、衰老的单核细胞、中性粒细胞以及部分激活的T、B细胞来发挥细胞免疫、维持免疫平衡及调节免疫反应等重要作用.在免疫豁免组织中，由于这些组织的细胞膜上FasL表达，可导致邻近的活性T淋巴细胞凋亡，使这些部位免受炎症侵害，从而起到免疫豁免作用.由此可见，通过Fas/FasL系统介导Fas阳性的细胞凋亡不仅可由活性T细胞引起，而且表达FasL的细胞同样可以引起Fas阳性的活性T细胞凋亡，以达到免疫下调作用.研究发现，许多恶性肿瘤细胞膜上Fas表达明显下调，而FasL表达增高[5]，这与免疫豁免组织中表现一致，认为这些恶性肿瘤在机体内类似于免疫豁免组织，使机体对肿瘤的免疫作用下调，从而逃避了机体对肿瘤细胞的免疫清除.亦有学者认为在肿瘤的免疫逃避过程中起关键性作用的是FasL表达增高而不是Fas表达下调[2，5].
, 百拇医药
胃癌细胞株SGC7901是国内学者利用国人胃癌组织自行建株的细胞系，也是国内研究胃癌病因及治疗中最常用的人胃腺癌细胞株[6]，确定其有无Fas和FasL的基因转录和蛋白的表达，将对利用Fas和FasL基因进行胃癌的治疗等相关研究提供极大帮助.Li et al[7]研究发现，Fas蛋白在胃癌组织中的表达为19.0%，在正常胃黏膜中为64.2%;FasL蛋白在胃癌组织中的表达为63.8%，在正常胃黏膜中为45.3%.我们通过RT-PCR和免疫细胞化学染色对SGC7901细胞株中Fas和FasL基因表达情况进行了检测，发现此种细胞株均存在Fas和FasL基因的mRNA转录及较强的蛋白表达，结果与Li et al的结果相符.本研究不仅为以后科研人员利用这种胃癌细胞株进行Fas和FasL基因的相关研究提供了极大的方便，同时也提示中国人胃腺癌细胞也存在Fas和FasL基因的表达，且FasL的表达明显高于Fas的表达.提示在胃癌的发生、发展过程中存在免疫逃逸机制，上调Fas的表达或阻断FasL的表达，将有助于对胃癌的治疗.
, 百拇医药
4 参考文献1 Martin JH, Potthoff A, Ledig S, Cornberg M, Jandl O, Manns MP, Kubicka S, Flemming P, Athmann C, Beil W, Wagner S.
Effect of H pylori on the expression of TRAIL, FasL and their receptor subtypes in human gastric epithelial cells and
their role in apoptosis. Helicobacter 2004;9:371-386
2 Hahne M, Rimoldi D, Schroter M, Romero P, Schreier M, French LE, Schneider P, Bornand T, Fontana A, Lienard D,Cerottini J, Tschopp J. Melanoma cell expression of Fas(Apo-1/CD95)ligand:implications for tumor immune escape.
, 百拇医药
Science 1996;274:1363-1366
3 Medvedev AE, Johnsen AC, Haux J, Steinkjer B, Egeberg K, Lynch DH, Sundan A, Espevik T. Regulation of Fas and Fas
ligand expression in NK cell by cytokine and the involvement of Fas-ligand in NK/LAK cell-mediated cytotoxicity.
Cytokine 1997;9:394-404
4 Dechant MJ, Fellenberg J, Scheuerpflug CG, Ewerbeck V, Debatin KM. Mutation analysis of the apoptotic "death-receptors"
, http://www.100md.com
and the adaptorsTRADD and FADD/MORT-1 in osteosarcoma tumor samples and osteosarcoma celllines.
Int J Cancer 2004;109:661-667
5 Cui H, Sherr DH, el-Khatib M, Matsui K, Panka DJ, Marshak-RothsteinA, Ju ST. Regulation of T-cell death genes:
selective inhibitionof FasL but not Fas mediated function. Cell Immunol 1996;167:276-284
6 富志民, 刘亚伦, 唐国基. 人体胃癌细胞株SGC7901培养及其特性. 肿瘤临床 1984;3:57-60
7 Li Z, Wang Z,Zhao Z, Zhang Y, Ke Y. Expression of Fas, FasL and IFN-gamma in gastriccancer.
Beijing DaxueXuebao 2003;35:386-389
编辑 张海宁, 百拇医药( 齐 明,周世庆,汪素文, 真岩波,张淑红)
