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编号:10619617
含前S基因的重组乙肝病毒表面抗原表达质粒的构建并在CHO细胞中表达
http://www.100md.com 《中华医药杂志》 2004年第8期
乙肝病毒,乙型肝炎病毒表面抗原,前S基因,CHO,dhfr-细胞,1材料及方法,1.1质粒、菌株及细胞,1.2酶和试剂,1.3扩增preS和S基因及重组基因的构建,1.3.1基因的扩增,1.3.2基因的连接,1.4重组质粒的构建,1.5转染CHO细胞,1
     【摘要】 目的 构建表达带pre S的乙肝表面抗原的质粒,并在真核细胞CHO中表达该抗原。方法 通过PCR方法分别扩增乙肝病毒表面抗原S和前S1及S2基因,利用引物的柔性短肽连接头,经第二次PCR扩增,获得可完整表达乙肝病毒表面抗原的融合基因。分别以pcDNA3和p SV2载体构建真核细胞表达质粒,共转染CHO细胞,表达产物用特定抗原酶联免疫检测和反向被动血凝实验检测。结果 表明表达物具有完整乙肝病毒表面抗原特性。结论 成功地构建了含前S基因的重组乙肝病毒表面抗原表达质粒,并在CHO细胞中表达。

    关键词 乙型肝炎病毒表面抗原 前S基因 CHO/dhfr-细胞

    Construction of vectors expressing recombinant hepatitis B virus surface antigen including preS and expression in CHO cell

    Yan Hua,Chen Kejin,Quan Jiawu,et al.

    Wuhan Institute of Biological Products,Hubi430060.

    【Abstract】 Objective To construct eukaryotic vectors that express recombinant HBV S antigen carrying preS and to detect their expression in CHO cells.Methods To construct S and preS fusion gene by overlapping-PCR.These genes were inserted into different eukaryotic expression vectors respectively.These vectors were co-transfected into CHO/dhfr-cell.The supernatant of cultured cell was assayed by ELISA and RHHA.Results The supernatant exhibited S and preS antigenicity.Con ......

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