【摘要】 目的 建立糖尿病部分基因检测方法。方法 高盐沉淀提取人白细胞糖尿病基因模板，用PCR两步法扩增片段，检测其碱基顺序排列技术。结果 所检测的正常人基因片段包括3243A●G和3316●A点突变与S.Anderson，A.T.Bankier，B.C.Barrell等人报道的人糖尿病基因编排序列一致。结论 本法与酚提取法、克隆序列检测等方法相比，时间缩短数成本降低。对糖尿病部分基因点突变研究和诊断提供了简便有效的检测方法。

    关键词 糖尿病 基因 两步法 扩增 测序

    对糖尿病病因和发病机制的研究中发现，部分糖尿病患者线粒体转运核糖核酸亮氨酸(即tRNA Leu(UUR) )3243A●G和3316G●A点突变[1，2]。目前用于糖尿病基因检测主要是酶切方法。该法所用酶受点突变的严格限制，一种酶只能用于一种点突变。为此我们采用基因测序方法，建立了用蛋白酶K消化有核细胞，异丙醇提取，两步法扩增后直接测序的方法。经1年多的应用，结果满意，现报告如下。

    1 材料和方法

    1.1 样本

    白细胞样本取自本院门诊及住院糖尿病患者，对照组为血糖正常人。EDTA抗凝，样品在抽血后1h内分离白细胞，贮-20℃备用。

    1.2 引物

    上游为5′-TTCACAAAGCGCCTTCCCCC-3′ ......