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编号:10572296
神经标记物在先天性巨结肠诊断中的意义
http://www.100md.com 《中华现代临床医学杂志》 2004年第10期
     【摘要】 目的 探讨免疫组织化学方法在诊断先天性巨结肠中的作用。方法 对26例

    疑有先天性巨结肠活检标本的的肠管远、近端粘膜下层,通过HE染色筛选,分别采用PGP9.5、Cathepsin D和S-100蛋白,进行免疫组化染色分析。结果 三者均有特征性价值。结论 交叉组合,更能起到优势互补的作用,使其更加完善准确。

    先天性巨结肠(Hirschsprung disease.HD)是儿外科常见的消化道疾病。病理诊断依据为病变肠壁的粘膜下及肌间神经丛内神经节细胞缺如,神经纤维增生。典型的病变HE染色光镜诊断并不困难。但在神经节细胞发育未成熟、结构不典型的情况下,就要求更准确、更科学的评价。为此,笔者应用蛋白基因产物9.5(Protein gene product9.5,PGP9.5)、S-100蛋白和CathepsinD免疫组织化学染色,对26例疑有HD活检标本进行交叉组合检测分析。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集我院2003年9月~2004年7月就诊的26例疑有HD病例。男22例,女4例,年龄最小26天,最大5岁,平均13.65个月。

    1.2 免疫组织化学染色与方法 取材于送检的26例疑有先天性巨结肠活检标本,分别取肠管远端粘膜下层和肠管近端肠壁,常规石蜡包埋,连续切片,HE染色筛选免疫组化对象。采用试剂PGP9.5(1∶40)、Cathepsin D(1∶500)的鼠抗 人单克隆抗体和S100蛋白(1∶200)的兔抗人多克隆抗体。按着试剂说明“二步法”,分别进行免疫组化染色,观察分析。

    1.3 结果判定 PGP9.5、Cathepsin D阳性染色为深褐色颗粒。S100在神经节细胞中不表达,判断价值为特征性的细胞状阴性“空白区”;PGP9.5阳性染色定位于神经节细胞胞浆、胞核和神经纤维;Cathepsin D阳性染色定位于神经节细胞的胞浆中。

    2 结果

    2.1 标志物阳性表达比较 通过标志物对26例疑有先天性巨结肠活检标本的远、近端粘膜下层阳性表达情况比较(见表1)和分析,结合HE染色,结果显示近端结肠粘膜下神经节细胞皆存在;远端结肠粘膜下神经节细胞有24例缺乏,有2例见到神经节细胞,结合临床及HE染色,26例疑有先天性巨结肠活检标本中,有24例诊断为先天性巨结肠,有2例排除先天性巨结肠。

    表1 标志物在26例疑有先天性巨结肠活检标本的远、近端粘膜下层阳性表达情况比较 (略)

    2.2 标志物的定位染色比较 在近端肠管粘膜下层的定位染色比较(见表2),PGP9.5在神经节细胞胞浆、神经节细胞核和神经纤维均表达(见图1),在神经胶质中细胞不表达,特异性好;Cathepsin D在神经节细胞特异性染色,胞浆表达(见图2),胞核阴性,不对任何神经成分染色,除神经元、粘膜及淋巴结的吞噬细胞以外,对任何其他组织均阴性,但在神经节细胞表达阳性率不是100%;S100蛋白在神经节细胞不表达,表现为特征性的细胞状阴影“空白区”(见图3)。

    表2 近端肠管粘膜下层的定位染色作用比较(略)

    3 讨论

    先天性巨结肠是儿外科常见的消化道疾病,病理诊断的最基本方法是HE染色的组织学检查,简便,诊断率也较高。但是随着对先天性巨结肠及其类源病认识的不断深入,治疗手段和诊断方式的不断改进,先天性巨结肠的确诊就要求更准确的评价。在改良经肛脱出术式中,送检肠管病变段大多为缺乏浆肌层的远端粘膜下层;在粘膜活检时,送检标本均为粘膜下层小组织。通常粘膜下神经丛比肌间神经丛稀疏,体积也较小,所含的节细胞较少,粘膜下神经节细胞比肌间神经节细胞体积小。镜检时,神经丛和节细胞常需要与小血管、炎细胞、巨噬细胞、团状平滑肌以及神经丛内的雪旺氏细胞核的横切面相鉴别 [2] 。由于小儿神经节细胞发育有一个逐渐成熟的过程,粘膜下层的神经节细胞在4岁时才完全成熟,尤其在新生儿时期,发育更是不成熟。HE染色对于识别发育未成熟、结构不典型的神经节细胞有

    一定难度。乙酰胆碱酯酶组织化学方法是一种很有价值的检测措施,但阳性率过高,有误诊

    的可能,并受限于冰冻切片 [1] 。随着免疫组织化学的普遍应用,许多方法被应用于先天性巨结肠的诊断。单纯的NSE和Cathepsin D染色都是比较准确的辅助诊断方法,但也有相对不足之处,NSE多克隆抗体表达的特异性相对欠缺,Cathepsin D表达阳性率不够全面。

    本文介绍的免疫组化方法,蛋白基因产物9.5(Protein gene product9.5PGP9.5)是一种对粘膜肌层和固有层中异常胆碱能神经染色的神经元标志物,存在于中枢和外周神经系统的各个水平及神经内分泌细胞中,在胞浆和细胞核中表达;Cathepsin D是一种溶酶体天冬氨酸蛋白酶,染色特异性高,仅限于肠神经节细胞,不显示任何神经纤维,不在内皮细胞、淋巴细胞及支持细胞等与未成熟的神经细胞相似的细胞中反应。S100抗体的染色模式很有用,为它突出了阴性染色的神经节细胞,在神经节细胞不表达则表现为特征的细胞状阴影“空白区”。三种标记物单一使用,在某些情况下,仍有不完善之处。Cathepsin D是粘膜下神经节细胞较好的标记物,但表达阳性率不全,配合神经节细胞表达全面的PGP9.5可形成互补;在神经丛内节细胞不成熟情况下,应用PGP9.5也难以辨认时,配合S100抗体,利用其特征的细胞状阴影“空白区”来判定。以上三种标记物交叉组合使用,可起到优势互补的效果。(本文图片见封三)

    参考文献

    1 王怡平.直肠粘膜吸引活检免疫组化法诊断先天性巨结肠.中华小儿外科杂志,1991,12(4):208-209.

    2 武忠弼,杨光华.中华外科病理学.北京:人民卫生出版社,2002,3132-3138.

    (收稿日期:2004-08-10) (编辑夏 继)

    作者单位:130061吉林省长春市儿童医院病理科, 百拇医药(徐建华)