【摘要】 目的 建立尿嘧啶DNA糖基化酶在荧光定量PCR技术中应用，以控制PCR技术中可能出现的污染问题。方法 用乙肝病毒HBV DNA核酸扩增荧光定量检测试剂盒构建模拟污染源的U-DNA，经尿嘧啶DNA糖基化酶消化后，用试剂盒检测其抗污染作用。结果 尿嘧啶DNA糖基化酶的应用使检测具有很好的特异性、重复性，检测敏感度达到1×10 3 copies/ml。经过对382例乙肝患者标本测定证实，标志物为HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)的血清检出率分别为100%，标志物为HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)的血清检出率分别为72.0%，临床用血未检出，可以消除实验室内的PCR产物污染。结论 本法快速、简便、特异性好、能排除假阳性。

    关键词 尿嘧啶DNA糖基化酶 HBV DNA荧光定量PCR PCR污染 U-DNA模板

    由于PCR技术高度敏感性，使PCR也特别易受到污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染的DNA可能有三个来源:测试样品之间的DNA污染、实验材料如重组质粒DNA、同一靶序列前一次PCR的扩增产物，其中最后一种最为严重麻烦。为了防止和消除污染，我们构建了尿嘧啶DNA糖基化酶 [3] 及模拟污染源的U-DNA模板 [4] ，并在HBV DNA核酸扩增PCR荧光定量检测试剂盒中应用 [2] ，极大地解决了PCR污染。我们在研究中对该酶的防污染体系进行了优化，使其更适合实验室应用。经过临床验证取得满意结果，报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料 乙肝病毒HBV DNA核酸扩增PCR荧光定量检测试剂盒(华美生物工程公司提供);尿嘧啶DNA糖基化酶(华美生物工程公司);REINcolumn TM 琼脂糖DNA纯化系统(华美生物工程公司);Du-530紫外分光光度计;ABI PRISM TM 7700荧光定量分析仪。

    1.2 标本来源 从上海两家医院收集临床血清或血浆标本382份 ......