乙肝标志物中HBsAg假阴性分析
乙肝标志物(HBVM)五项指标(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)是临床常用的检测项目，我们在实际工作中用酶联免疫(ELISA)一步法发现HBeAg及抗-HBc阳性血清而HBsAg呈阴性反应;用传统的反向间接血凝二步法(R-PHA)检测呈不同滴度的阳性反应，对此我们分析了1465份血清，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 血清标本 本院门诊及住院病人，均为空腹采血，当日分离血清，当日检测完成。
1.2 材料 初检ELISA试剂板购自上海华泰公司，复检R-PHA用血球和稀释液产自上海生物制品研究所。
1.3 检测方法 ELISA一步法严格按说明书进行操作，凡初检发现HBeAg、抗-HBc呈阳性反应，但HBsAg呈阴性反应者，用生理盐水按1:30和1:300稀释血清重新检测;复检用R-PHA法，按操作规程检测。
2 结果
1465份血清HBVM呈不同项目阳性标本(抗-HBs阳性除外)，其中有78份呈现HBeAg和抗-HBc同时阳性，但HBsAg用一步法不显色或显色过浅，血清经稀释后重显阳性反应;同时用R-PHA法检测呈现阳性反应结果见表1。
表1 78份血清标本R-PHA法检测结果
3 讨论
本文78例HBsAg用酶联免疫吸附法出现假阴性反应，与ELISA双位点一步法有关。检测时过量的HBsAg分别与固相载体和酶标抗体结合，不再形成夹心复合物而呈现钩状反应 [1] 。ELISA一步法操作简便，但由于使用单克隆抗体，由此也可能出现假阴性结果，所以不能把显色板的显色深浅与病毒含量或HBsAg量等同，两者不成正比关系，显色深者只表示包被的抗体与受检抗原最大限度地形成了夹心、复合物;而显色浅者一部分除量低外，还有一部分是过量的标本，血清经稀释后呈不同程度阳性说明这一点。同时用R-PHA法结果可以看出在出现假阴性结果的标本中，HBsAg滴度高者其出现假阴性的比率较大。
乙肝病毒标志物中同时出现HBsAg、HBeAg和抗-HBc呈阳性反应，说明病人体内HBV复制活跃，传染性强，是临床最重要的乙肝传播者，在传染病学中有重要意义。特别是对献血员，孕妇、外科手术患者，更应引起足够重视。HBV病毒自身存在变异，急、慢性肝炎及重型肝炎出现前C区变异;HBV的S区变异常出现HBsAg阴性的HBV感染者 [2] ，所以不能单纯以HBsAg结果而判定乙肝病毒的存在。在实际工作中检测HBVM时我们应注意以下几点:(1)用经典的R-PHA检测HBsAg比对ELISA法，可减少假阴性结果的报告，特别是对HBeAg和抗-HBc呈阳性的血清标本应引起足够重视。(2)以检测五项为佳，尽可能地不单独检测HBsAg而以此判断病情。(3)有条件时应同时检测HBV-DNA，以有效防止乙肝病毒血清的错检或漏检。
总之，在检测乙肝病毒标志物时要注意假阴性结果的出现，以有利于患者的早发现、早诊断、早治疗，采取必要的防护措施，降低我们的乙肝感染率。
参考文献
1 陶义训.免疫学和免疫学检测，第2版.北京:人民出版社，1997，144.
2 孔德立.医学新进展，北京:中国科学出版社，2000，335-336.
作者单位:271100山东省莱芜市中医医院
(收稿日期:2004-03-30)
(编辑黄 杰), 百拇医药(朱应文)
1 材料与方法
1.1 血清标本 本院门诊及住院病人，均为空腹采血，当日分离血清，当日检测完成。
1.2 材料 初检ELISA试剂板购自上海华泰公司，复检R-PHA用血球和稀释液产自上海生物制品研究所。
1.3 检测方法 ELISA一步法严格按说明书进行操作，凡初检发现HBeAg、抗-HBc呈阳性反应，但HBsAg呈阴性反应者，用生理盐水按1:30和1:300稀释血清重新检测;复检用R-PHA法，按操作规程检测。
2 结果
1465份血清HBVM呈不同项目阳性标本(抗-HBs阳性除外)，其中有78份呈现HBeAg和抗-HBc同时阳性，但HBsAg用一步法不显色或显色过浅，血清经稀释后重显阳性反应;同时用R-PHA法检测呈现阳性反应结果见表1。
表1 78份血清标本R-PHA法检测结果
3 讨论
本文78例HBsAg用酶联免疫吸附法出现假阴性反应，与ELISA双位点一步法有关。检测时过量的HBsAg分别与固相载体和酶标抗体结合，不再形成夹心复合物而呈现钩状反应 [1] 。ELISA一步法操作简便，但由于使用单克隆抗体，由此也可能出现假阴性结果，所以不能把显色板的显色深浅与病毒含量或HBsAg量等同，两者不成正比关系，显色深者只表示包被的抗体与受检抗原最大限度地形成了夹心、复合物;而显色浅者一部分除量低外，还有一部分是过量的标本，血清经稀释后呈不同程度阳性说明这一点。同时用R-PHA法结果可以看出在出现假阴性结果的标本中，HBsAg滴度高者其出现假阴性的比率较大。
乙肝病毒标志物中同时出现HBsAg、HBeAg和抗-HBc呈阳性反应，说明病人体内HBV复制活跃，传染性强，是临床最重要的乙肝传播者，在传染病学中有重要意义。特别是对献血员，孕妇、外科手术患者，更应引起足够重视。HBV病毒自身存在变异，急、慢性肝炎及重型肝炎出现前C区变异;HBV的S区变异常出现HBsAg阴性的HBV感染者 [2] ，所以不能单纯以HBsAg结果而判定乙肝病毒的存在。在实际工作中检测HBVM时我们应注意以下几点:(1)用经典的R-PHA检测HBsAg比对ELISA法，可减少假阴性结果的报告，特别是对HBeAg和抗-HBc呈阳性的血清标本应引起足够重视。(2)以检测五项为佳，尽可能地不单独检测HBsAg而以此判断病情。(3)有条件时应同时检测HBV-DNA，以有效防止乙肝病毒血清的错检或漏检。
总之，在检测乙肝病毒标志物时要注意假阴性结果的出现，以有利于患者的早发现、早诊断、早治疗，采取必要的防护措施，降低我们的乙肝感染率。
参考文献
1 陶义训.免疫学和免疫学检测，第2版.北京:人民出版社，1997，144.
2 孔德立.医学新进展，北京:中国科学出版社，2000，335-336.
作者单位:271100山东省莱芜市中医医院
(收稿日期:2004-03-30)
(编辑黄 杰), 百拇医药(朱应文)