柱层析分光光度法测定咳立宁片中黄芩甙的含量
http://www.100md.com
蒙大平
咳立宁片为一纯中药制剂，处方主要由黄芩、荆芥、百部、甘草、知母等九味中药组成，其有疏风清热，宣肺化痰止咳之功效，被广泛用于治疗风热犯肺之咳嗽、急性支气管炎等症，由于其疗效确切，深受患者好评。为更好地确定该产品的内在质量，我们对其中的主药之一黄芩进行了质量控制指标研究，并探索了其中抗菌消炎主要成分黄芩甙的含量测定方法，现报道如下。
1 实验方法、结果与分析
1.1 仪器与试剂：岛津UV-265分光光度计；电子天平(德国沙多利斯)。黄芩甙对照品(中国药品生物制品检定所提供)；乙醇、甲醇、聚酰胺(均为AR级)。
1.2 提取溶剂及方法的确定：黄芩甙可溶于甲醇、乙醇、水等溶剂中，经比较不同的提取溶剂及方法，其中以70%乙醇超声处理30min为好。由于方中其它成分对黄芩甙测定干扰较大，故采用先将提取液浓缩至小体积，并过一聚酰胺小柱的办法来逐步消除干扰物质的影响，以提高分析的准确度。
, 百拇医药
1.3 测定波长的选择：取黄芩甙对照品适量，以70%乙醇溶解并制成适当浓度的对照品溶液，在200～400nm波长范围内扫描，测定吸收光谱。同法作样品及阴性空白的谱图。图谱显示，黄芩甙和样品在278nm均有最大吸收峰，而在此附近，阴性空白的干扰约为0.002左右，基本能满足定量测定的要求。
1.4 线性关系考察：精密称取黄芩甙对照品25mg于50ml容量瓶中，以70%乙醇溶解并稀释至刻度，从中精密吸取0.2、0.4……1.6ml于25ml容量瓶中，以相同溶剂稀释至刻度，按上述所选定的条件下，在(278±1)nm处测定吸收度，并以吸收度A对浓度C(ug/ml)进行回归分析，得回归方程：C=38.54A+0.0012,r=0.999，表明黄芩甙浓度在0～20ug/ml范围内线性关系良好，并且直线通过原点，可以用单点法测定并计算。
1.5 方法精密度试验：分别吸取上述对照品溶液，在选定测定条件下，依法重复操作测定，计算黄芩甙对照品吸收度的相对标准偏差，结果RSD=0.71%，表明方法精密度较好。
, 百拇医药
1.6 方法稳定性试验：取上述对照品溶液及样品溶液各一份，分别在放置0、2、4、6h时，依法操作，测定吸收度，计算含量及相对标准偏差，结果对照品RSD=0.45%，样品RSD=0.53%，表明方法稳定性较好。
1.7 方法重复性试验：准确量取样品5片共5份，按样品测定项下进行操作测定，计算黄芩甙的含量及相对标准偏差，结果RSD=1.08%，表明方法重复性较好。
1.8 加样回收率试验：精密量取已知含量的样品6份，再分别精密加入一定量的黄芩甙对照品，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率，结果平均回收率98.48%，RSD=0.97%，表明方法回收率较好(见表1)。
表1 加样回收率试验
No 原有量
(mg) 加入量
, http://www.100md.com
(mg) 测得量*
(mg) 回收率
(%) RSD
(%)
1 5.611 4.50 10.010 97.76
2 5.611 4.50 10.012 97.77
3 5.810 4.50 10.290 99.56 98.48 0.97
4 5.810 5.00 10.700 97.80
5 5.263 5.00 10.178 98.30
6 5.263 5.00 10.248 99.70
, http://www.100md.com
*n=3
1.9 样品测定：取本品5片，研细，加70%的乙醇50ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至小体积，定量转移到聚酰胺小柱上(80目，10×25mm)，先用水洗脱至无色，再用70%的乙醇洗脱，准确收集洗脱液25ml，摇匀。按照分光光度法，在278nm的波长处测定吸收度，以回归方程计算样品中黄芩甙的含量，结果(见表2)。
表2 样品测定
批号 含量(mg/片) X RSD(%)
990112 5.85 5.76 5.77 5.79 1.58
990118 5.30 5.32 5.35 5.32 0.58
990125 6.14 6.18 6.05 6.12 1.30
, http://www.100md.com
2 讨论
2.1 黄芩甙含量测定的方法很多，有紫外分光光度法、薄层扫描法、导数光谱法、高效液相色谱法等(1，2)。但在咳立宁片中黄芩甙的含量测定方法尚未见报道。从线性关系、精密度、稳定性、重复性试验以及加样回收率试验等方法学考察上看，本方法对测定咳立宁片黄芩含量可靠。
2.2 根据实验，三批样品含量符合有关规定。
作者单位：广西区人民医院药剂科
参考文献
1 邵礼铮，周干南，於洪建等.中药复方制剂抗毒灵注射液中黄芩甙的含量测定.中草药 1990；21(7)：18
2 杨 桦，陈馥馨，刘雪峰等.双波长分光光度法测定小儿肺热咳喘口服液中黄芩的含量.中国中药杂志 1991；12(8)：474
广西医学
GUANGXI MEDICAL JOURNAL
1999年 第21卷 第6期 No.6 Vol.21 1999, 百拇医药
咳立宁片为一纯中药制剂，处方主要由黄芩、荆芥、百部、甘草、知母等九味中药组成，其有疏风清热，宣肺化痰止咳之功效，被广泛用于治疗风热犯肺之咳嗽、急性支气管炎等症，由于其疗效确切，深受患者好评。为更好地确定该产品的内在质量，我们对其中的主药之一黄芩进行了质量控制指标研究，并探索了其中抗菌消炎主要成分黄芩甙的含量测定方法，现报道如下。
1 实验方法、结果与分析
1.1 仪器与试剂：岛津UV-265分光光度计；电子天平(德国沙多利斯)。黄芩甙对照品(中国药品生物制品检定所提供)；乙醇、甲醇、聚酰胺(均为AR级)。
1.2 提取溶剂及方法的确定：黄芩甙可溶于甲醇、乙醇、水等溶剂中，经比较不同的提取溶剂及方法，其中以70%乙醇超声处理30min为好。由于方中其它成分对黄芩甙测定干扰较大，故采用先将提取液浓缩至小体积，并过一聚酰胺小柱的办法来逐步消除干扰物质的影响，以提高分析的准确度。
, 百拇医药
1.3 测定波长的选择：取黄芩甙对照品适量，以70%乙醇溶解并制成适当浓度的对照品溶液，在200～400nm波长范围内扫描，测定吸收光谱。同法作样品及阴性空白的谱图。图谱显示，黄芩甙和样品在278nm均有最大吸收峰，而在此附近，阴性空白的干扰约为0.002左右，基本能满足定量测定的要求。
1.4 线性关系考察：精密称取黄芩甙对照品25mg于50ml容量瓶中，以70%乙醇溶解并稀释至刻度，从中精密吸取0.2、0.4……1.6ml于25ml容量瓶中，以相同溶剂稀释至刻度，按上述所选定的条件下，在(278±1)nm处测定吸收度，并以吸收度A对浓度C(ug/ml)进行回归分析，得回归方程：C=38.54A+0.0012,r=0.999，表明黄芩甙浓度在0～20ug/ml范围内线性关系良好，并且直线通过原点，可以用单点法测定并计算。
1.5 方法精密度试验：分别吸取上述对照品溶液，在选定测定条件下，依法重复操作测定，计算黄芩甙对照品吸收度的相对标准偏差，结果RSD=0.71%，表明方法精密度较好。
, 百拇医药
1.6 方法稳定性试验：取上述对照品溶液及样品溶液各一份，分别在放置0、2、4、6h时，依法操作，测定吸收度，计算含量及相对标准偏差，结果对照品RSD=0.45%，样品RSD=0.53%，表明方法稳定性较好。
1.7 方法重复性试验：准确量取样品5片共5份，按样品测定项下进行操作测定，计算黄芩甙的含量及相对标准偏差，结果RSD=1.08%，表明方法重复性较好。
1.8 加样回收率试验：精密量取已知含量的样品6份，再分别精密加入一定量的黄芩甙对照品，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率，结果平均回收率98.48%，RSD=0.97%，表明方法回收率较好(见表1)。
表1 加样回收率试验
No 原有量
(mg) 加入量
, http://www.100md.com
(mg) 测得量*
(mg) 回收率
(%) RSD
(%)
1 5.611 4.50 10.010 97.76
2 5.611 4.50 10.012 97.77
3 5.810 4.50 10.290 99.56 98.48 0.97
4 5.810 5.00 10.700 97.80
5 5.263 5.00 10.178 98.30
6 5.263 5.00 10.248 99.70
, http://www.100md.com
*n=3
1.9 样品测定：取本品5片，研细，加70%的乙醇50ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至小体积，定量转移到聚酰胺小柱上(80目，10×25mm)，先用水洗脱至无色，再用70%的乙醇洗脱，准确收集洗脱液25ml，摇匀。按照分光光度法，在278nm的波长处测定吸收度，以回归方程计算样品中黄芩甙的含量，结果(见表2)。
表2 样品测定
批号 含量(mg/片) X RSD(%)
990112 5.85 5.76 5.77 5.79 1.58
990118 5.30 5.32 5.35 5.32 0.58
990125 6.14 6.18 6.05 6.12 1.30
, http://www.100md.com
2 讨论
2.1 黄芩甙含量测定的方法很多，有紫外分光光度法、薄层扫描法、导数光谱法、高效液相色谱法等(1，2)。但在咳立宁片中黄芩甙的含量测定方法尚未见报道。从线性关系、精密度、稳定性、重复性试验以及加样回收率试验等方法学考察上看，本方法对测定咳立宁片黄芩含量可靠。
2.2 根据实验，三批样品含量符合有关规定。
作者单位：广西区人民医院药剂科
参考文献
1 邵礼铮，周干南，於洪建等.中药复方制剂抗毒灵注射液中黄芩甙的含量测定.中草药 1990；21(7)：18
2 杨 桦，陈馥馨，刘雪峰等.双波长分光光度法测定小儿肺热咳喘口服液中黄芩的含量.中国中药杂志 1991；12(8)：474
广西医学
GUANGXI MEDICAL JOURNAL
1999年 第21卷 第6期 No.6 Vol.21 1999, 百拇医药