人内皮型一氧化氮合酶cDNA在COS-7细胞中的表达
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曾琼；赵祝香；李冰；冉丕鑫；陈顺存
参见附件(57kb)。
曾琼；赵祝香；李冰；冉丕鑫；陈顺存 广州医学院实验医学中心 广州510182；广州医学院第一医院广州呼吸疾病研究所 广州510120 基础医学与临床 2003 5
关键词：内皮型一氧化氮合酶；克隆
本研究从人脐静脉血管内皮细胞中提取总RNA ,采用逆转录PCR(RT PCR)方法,扩增出人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)cDNA ,总长度为3731bp。将其克隆入pUCm T载体质粒,序列分析表明,克隆所得片段含有完整开放阅读框架,与GenBank中heNOScDNA序列同源性达99 93% ,在此基础上发现有若干核酸多态性。将该基因片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3 0上,用脂质体转染法将pcDNA3 0 heNOS转染到COS 7细胞株,RT PCR、Westernblot分别检测到外源性eNOS基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达,分析表明所表达的heNOS蛋白质分子量为14 5ku ;L 1 4C 精氨酸掺入同位素法检测证实所表达.
关键词：内皮型一氧化氮合酶；克隆
本研究从人脐静脉血管内皮细胞中提取总RNA ,采用逆转录PCR(RT PCR)方法,扩增出人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)cDNA ,总长度为3731bp。将其克隆入pUCm T载体质粒,序列分析表明,克隆所得片段含有完整开放阅读框架,与GenBank中heNOScDNA序列同源性达99 93% ,在此基础上发现有若干核酸多态性。将该基因片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3 0上,用脂质体转染法将pcDNA3 0 heNOS转染到COS 7细胞株,RT PCR、Westernblot分别检测到外源性eNOS基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达,分析表明所表达的heNOS蛋白质分子量为14 5ku ;L 1 4C 精氨酸掺入同位素法检测证实所表达.
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