摘要：目的：研究旱莲草乙酸乙酯总提物(TAEEP)对正常及免疫抑制小鼠T淋巴细胞亚群的作用。方法：采用正常及腹腔注射环磷酰胺(60mg/kg)所致免疫功能低下小鼠模型，给予大、小剂量的TAEEP，用流式细胞仪测定小鼠血T淋巴细胞CD₄ ⁺ 、CD₈ ⁺ 亚群的比例。结果：大、小剂量TAEEP均显著降低正常小鼠CD₄ ⁺ 亚群的比例(P<0.01)，并可显著提高免疫低下小鼠CD₄ ⁺ 亚群比例，对于正常小鼠CD₈ ⁺ 亚群的比例，TAEEP的小剂量可显著降低其比例(P<0.05)，而大剂量则显著提高其比例。结论：旱莲草乙酸乙酯总提物对小鼠外周血T淋巴细胞亚群具有调节作用。
中图分类号：R285.5 文献标识码：
文章编号：1000-2219(2000)06-0052-02

中药旱莲草为菊科鳢肠植物鳢肠(Eclipta prostrata)的干燥地上部分，具有滋肝补血、凉血止血之功能，用于牙齿松动、须发早白、眩晕耳鸣、腰膝酸软、阴虚血热、吐衄、尿血等症^[1] 。近年药理实验表明，旱莲草水煎剂有较强免疫调节作用^[2～4] 。为进一步探讨这方面的作用机制及寻找其有效成分，本研究采用正常及免疫功能低下的小鼠模型，观察TAEEP对小鼠外周血T淋巴细胞亚群的作用。
1 材料与方法
1.1 旱莲草乙酸乙酯总提物(Tethyl acetate Extract of Eclipta prostrata,TAEEP) 由第四军大学西京医院植化室提供，每克相当于原生药120g。主要成分为皂甙类物质。研为细末，过200目筛，用时以蒸馏水配制成适宜浓度。
1.2 动物及分组 昆明种雄性小鼠，体质量(18±2)g，二级动物，本校动物中心提供。小鼠随机分为生理盐水(NS)组、环磷酰胺(CY)组、低剂量TAEEP(TAEEPL)组；高剂量TAEEP(TAEEPH)组、CY+TAEEPL组、CY+TAEEPH组。
1.3 小鼠T细胞单克隆抗体及第二荧光抗体 抗小鼠CD₄ 、CD₈ 单克隆抗体为大鼠抗小鼠IgG(Coulter-immunotechChina)，FITC标记抗体为兔抗大鼠IgG(湖北省武汉博士德公司)。
1.4 其他试剂配制 ①血细胞缓冲液：RPMI-1640，20ml/L胎牛血清，0.4ml/LNaN₃ ，调整至pH7.2。②红细胞溶解缓冲液：NH₄ Cl 8.3g，KHCO₃ 1g，EDTA-Na₂ 37mg加水至1 000ml，20ml/L胎牛血清。③染色固定液：250ml/L戊二醛用1ml/LPBS稀释至8ml/L。
1.5 染色过程 小鼠摘眼球取血，用肝素抗凝(50u/ml)。分为2管，每管0.1ml，分别加入抗CD₄ 、抗CD₈ McAb，充分混匀，温育45min，用细胞洗液洗2次，离心(1 000r/min)，2min弃上清，加红细胞溶解液3ml，充分摆动2～3min，待红细胞完全溶解后，离心(1000r/min)2min，弃上清，再用细胞洗液洗1次，离心弃上清，余约0.5ml细胞悬液，加固定液50μl。以上操作在室温(12～15℃)下进行。标本用台盼蓝染色，死细胞率<5%^[5] 。
1.6 流式细胞仪分析 流式细胞仪Epics Profile Ⅱ型(Coulter Ltd)。激光功率300mW,激光波长488nm。绿荧光CV<3%。记录分析LGFL单参数256道直方图，数据磁盘贮存。部分数据在计算机上用Coulter应用软件IMMUNO分析处理。每个标本计数淋巴细胞3000个。从取血采样到分析在8h内完成。
1.7 统计学处理 采用Excel软件进行t检验。
2 结果
与NS组比较，大、小剂量TAEEP及CY均显著降低小鼠CD₄ ⁺ 亚群的比例，而对于CD₈ ⁺ 亚群的比例，大、小剂量TAEEP呈现不同的作用，TAEEP大剂量能显著提高CD₈ ⁺ 亚群的比例，降低CD₄ ⁺ /CD₈ ⁺ ，其小剂量能降低CD⁺ ₈ ，但CD⁺ ₄ /CD⁺ ₈ 升高不明显，CY则对CD₈ ⁺ 亚群无明显影响；与CY组比较，TAEEP两个剂量均能显著提高CY所致的CD₄ ⁺ 亚群比例的下降。见表1。

3 讨论
正常免疫应答过程有赖于各种免疫细胞，特别是T细胞亚群之间的相互协作或相互制约，以形成适度的免疫应答，使之既能清除抗原性异物，又不损伤机体自身组织。T细胞按其表型及功能的不同可分为4个主要的亚群，CD₄ ⁺ 和CD₈ ⁺ 分别存在于Ti/T_H 和T_S /T_C 表面。由CD⁺ ₄ T细胞介导的细胞免疫与临床传染性变态反应、接触性皮炎、移植排斥反应及一些AIDS的组织损伤有关。CD₈ ⁺ T细胞能杀伤表达特异抗原的靶细胞，它在抗病毒感染、急性同种异型移植物排斥和对肿瘤细胞的杀伤作用是重要的效应细胞^[6] 。
TAEEP显著降低小鼠CD₄ ⁺ 亚群的比例，而对于CD₈ ⁺ 亚群，大、小剂量TAEEP组表现出不同的作用，小剂量对其比例有所降低，而大剂量组则显著提高其比例，提示TAEEP可能具有免疫双向调节作用。TAEEP显著拮抗CY引起的CD₄ ⁺ 亚群比例的下降，提示TAEEP能改善机体的免疫功能低下状态。TAEEP为皂甙类物质，其对T细胞亚群的作用，可能由于其含有不同作用的单体成分，因此需进一步研究其单体的免疫作用，以期发现选择性强的免疫抑制剂。

EFFECT OFTETHYL ACETATE EXTRACT OF ECLIPTA PROSTRATA
ON PERIPHERAL T LYMPHOCYTE SUBSETS IN MICE

KANG Wen-hong,WANGQin-wei,GAO Xiang,CHENG Jian-feng
(Pharmaceutical Department,Tangdu Hospital,the 4th Military MedicalUniversity,ShaanxiXi'an 710038,China)

Abstract：Objective：Toexplore the effect of Tethyl acetate Extract of Eclipta prostrata(TAEEP) on T lymphocytesubsets in normal and immunosuppressive mice.Method:By flow cytometer to determine theproportion of peripheral blood T lymphocyte subsets of normal and immunosuppressive micetreated with TAEEP.Result:Large and small dose of TAEEP can decrese drastically theproportion of CD⁺ ₄ subsets of normal mice and increase theproportion of CD⁺ ₄ subsets of immunosuppressive mice.Compared withthe normal groups,the proportion of CD⁺ ₈ subsets can be increasedsignificantly by the large dose of TAEEP,while be decreased by the small dose ofTAEEP.Conclusion:TAEEP possess regulatory effects on peripheral T lymphocyte subsets ofmice.
Key words：Eclipta prostrata;T lymphocyte subsets;Cellularimmunity

作者简介：康文红(1962-)，女，药师。

参考文献

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典[M].广州：广东科学技术出版社，1995.330.
[2]胡慧娟，杭秉茜，刘勇.旱莲草对免疫系统的影响[J].中国药科大学学报，1992，23(1)：55～57.
[3]熊晓玲，李文.部分扶正固本中药对小鼠脾细胞IL-2产生的双向调节作用[J].中国实验临床免疫学杂志，1991，3(4)：37.
[4]冯明功，欧芹，白晶，等.旱莲草对老年小鼠免疫功能的影响[J].佳木斯医学院学报，1997，20(3)：9.
[5]张均田.现代药理实验方法[M].北京：北京医科大学-中国协和医科大学联合出版社，1998.680.
[6]龙振洲.医学免疫学[M].第2版，北京：人民卫生出版社，1996.86.

收稿日期：2000-06-13 , 百拇医药