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编号:10666376
小鼠精子畸形试验方法的改进*
http://www.100md.com 《蚌埠医学院学报》 1999年第4期
周纯先 肖 棣 王帮霞 王允滋 233003 蚌埠医学院卫生学教研室 蚌埠医学院学报 1999 0 24 4
关键词:精子计数;小鼠 期刊 bbyxyxb 0 基础医学 fur -->

摘要 目的 :改进检测小鼠精子畸形的试验方法。方法 :采用改进的小鼠精子畸形试验方法进行观察,并与有关试验方法作对比研究。结果 :两种不同量 0.9%生理盐水制备的小鼠精子玻片镜检显示,环磷酰胺阳性组和生理盐水对照组,其观察结果均以用 1 ml 0.9%生理盐水作稀释液制备的玻片镜检满意,符合小鼠精子畸形分析的试验要求。结论 :本法具有操作简便、镜检满意和结果可靠等优点。
中国图书资料分类法分类号
R 321.1

Improvement in method of sperm aberration test in mice

Zhou Chunxian,Xiao Di,Wang Bangxia,Wang Yunzi
(Department of Hygiology,Bengbu Medical College,Anhui 233003)

Abstract Objective:To improve the method of sperm aberration test in mice.Methods:The improved method for sperm aberration test was used in mice to compare with other methods.Results:Tests taken from cyclophosphamide mice and normal saline treated mice were used to make sperm suspension in 2 different volume(1 and 3 ml) of 0.9% saline for smear examination of abnormal sperm under microscope.The result showed that sperm suspended in 1 ml saline was satisfactory.Conclusions:This method has many adventages;it is easy to perform,the amount of sperm obtained is satisfactory for examination and the results are reliable.
Key words sperm count;mice

精子畸形试验常用于观察精子头部和尾部的形态异常,是研究外来化学毒物诱发人或动物精细胞突变和判断有无生殖毒性作用的常用方法之一。目前用于检测小鼠精子畸形的试验方法有多种〔1,2〕 ,但其操作过程过于复杂,有的试验结果甚至不够理想。本文目的是对有关试验方法进行改进,简化操作步骤,建立本实验室条件下的小鼠精子畸形试验方法,现作报道。

1 材料与方法

1.1 动物 选用本院实验动物科提供的昆明种雄性小鼠,体重 2528 g
1.2 试剂 环磷酰胺 (上海产 )0.9%生理盐水; 1%伊红溶液。
1.3 实验方法 试验分 2组,每组 4只。Ⅰ组为环磷酰胺阳性组,按 40 mg/kg体重腹腔注射;Ⅱ组为 0.9%生理盐水阴性对照组,按 0.1 ml/10 g体重腹腔注射。各试剂物均每天 1次,共 5 d。两组小鼠均于末次处理后 1周全部处死作精子畸形分析。
1.4 精子悬液制备及制片 用颈椎脱臼法处死小鼠,摘取双侧附睾分别置于盛有 1 ml3 ml 0.9%生理盐水的平皿中 (每组小鼠各作两份 ),用小剪刀将附睾组织剪碎后用小滴管轻轻吹打 34次,并将组织碎片尽量取出,按 1 ml精子悬液加入 1%伊红溶液 0.1 ml混匀染色 1 min后,取 1滴于清洁的玻片上,均匀推片,空气自然干燥后作镜检。每鼠制片 2张,观察 1000个精子并计数精子畸形数。

2 结果

两种不同量 0.9%生理盐水制备的小鼠精子玻片镜检显示,不论是环磷酰胺阳性组,还是生理盐水阴性对照组,观察结果均以用 1 ml 0.9%生理盐水作稀释液制备的玻片镜检满意,符合精子畸形分析的试验要求 (见图 14)


1和图 2 阴性组小鼠正常精子,分别用 0.9%生理盐水 3 ml1 ml稀释附睾精子后制片镜检,图 1中精子数少,图 2中精子数较多,易于计数,伊红染色 ×200;图 3和图 4 阳性组小鼠精子,分别用 0.9%生理盐水 3 ml1 ml稀释附睾精子后制片镜检,图 3示小头畸形精子,图 4中有畸形精子 (头部异常伴双尾 )和正常精子,伊红染色 ×200

3 讨论

小鼠精子畸形试验的成功与否,除试验设计符合要求外,其关键是精子悬液的制备和制片,它可直接影响镜检时有无足够的精子计数及试验结果的取得。有方法介绍〔1〕 小鼠精子头部异常检测时,精子悬液用 0.9%生理盐水溶液 3 ml作稀释液,并用 80 μ m丝网过滤去除附睾组织碎片,制片时一张玻片要重复推片 3次等操作过程。笔者曾直接采用上法作小鼠精子畸形分析研究,但所制玻片镜检时精子数量较少,每鼠计数 1 000个精子耗时较长,有时甚至难以满足结果分析的要求。分析其原因认为主要是稀释液用量过多所致。经试验改进后,减少 0.9%生理盐水为 1 ml,并简化其操作过程,使试验结果达到满意要求,镜下视野中精子数量充分,背景清晰,容易计数结果分析所需精子数〔3~5〕 。另外,笔者也曾采用另一精子畸形试验方法〔2〕 进行操作,在其方法中,采用 1 ml磷酸盐缓冲液生理盐水作精子稀释液,直接制片后用无水乙醇固定 5 min,空气干燥后直接镜检,或无水乙醇固定后再用 2%伊红溶液染色后镜检 (在染色缸内进行 )。本文对此试验方法进行了改进,直接用 0.9%生理盐水 1 ml作精子稀释液, 1%伊红溶液直接加入精子悬液中染色、制玻片及镜检,省去了磷酸盐缓冲液生理盐水的配制、无水乙醇固定和伊红溶液用染色缸染色等操作程序,而且不影响试验结果的观察。
本文采用改进的小鼠精子畸形试验方法作了对比研究,结果显示本法具有简便、易行、省时、镜检效果满意及不影响试验结果分析研究等优点,值得推广使用。

* 安徽省教育委员会资助课题

参考文献

1 布鲁西克著 .吕 群,强义国,江绍慧译 .遗传毒理学原理 .上海:复旦大学出版社, 1987.244247
2 刘毓谷 .卫生毒理学基础 .2.北京:人民卫生出版社, 1998.215217
3 周纯先,王帮霞,肖 棣 .维生素 A和亚硒酸钠对菜油烟冷凝物致小鼠毒性作用的影响 .癌变. 畸变 . 突变, 199810(4)230
4 周纯先,肖 棣,王帮霞,等 .氯化汞对小鼠毒性作用的研究 .蚌埠医学院学报, 199924(1)1
5 周纯先,王帮霞,肖 棣 .维生素 E对色拉油烟冷凝物致小鼠毒性作用的影响 .癌变 . 畸变 . 突变, 199911(2)89

〔收稿日期 1999-05-17 , 百拇医药