关键词：氨基胍；内毒素
摘要 目的：观察比较iNOS抑制药AG对鼠离体主动脉和肺动脉环张力的影响。方法：测定血管对NE的量-效反应，在LPS(300ng/ml)中孵育4小时后。分为L-NAME(300μmol/L)或AG(100μmol/L)孵育60或20分钟共8组。结果：LPS孵育后动脉环对NE的反应明显降低，给予L-NAME或AG后均升高以10-6 mol/L NE作比较，L-NAME组主动脉20分钟时反应性明显高于AG组。L-NAME组肺动脉较AG组明显升高(P <0.01)。AG60分钟组主动脉升高的幅度明显大于肺动脉组(P <0.01)。L-NAME引起的血管收缩高峰时间较AG组出现的早，且峰值高。结论：L-NAME和AG都可增加已降低的对NE的反应性；但AG仅使主动脉环的敏感性明显增加。
Effects of aminoguanidine on endotoxin-treated rat aorta and
pulmonary artery in vitro
Wang Junke，Song Bingbing，Sheng
Zhuoren，et al.Department of Anesthesiology，First Affiliated
Hospital，China Medical University，Shenyang 110001
Abstract Objective：To investigate the effects of selective NOS inhibitor aminoguanidine (AG)on endotoxin-treated rat aorta (AO)and pulmonary artery (PA)in vitro.Method：The reaction to noradrenaline(NE)(10-9 -10-4 mmol/L)was measured in the vessels with complete endothelium，then the vessels were divided into 8 groups after incubated in LPS(300ng/ml)for 4 hours.Each group was
incubated with AG(100μmol/L)or L-NAME (300μmol/L)for 20，or 60 min，respectively.Result：Both AO and PA showed hyporeactivity to NE after incubated in LPS，and the reactivity of AO and PA to L-NAME and AG increased significantly after incubated in them for 60min or 20min.The sensitivities of AO to AG，AO and PA to L-NAME increased greatly.AO had a higher reactivity to AG in 60min than in 20min.L-NAME caused earlier and greater contraction than AG in both 60 min and 20 min groups.Conclusion：L-NAME and AG can both increase the decreased reactivities
of AO and PA to NE.AG only increases the AO sensitivity.
Key words Aminoguanidine Endotoxin
在感染性休克的治疗中，非选择性一氧化氮(NO)合酶(NOS)抑制药L-N-位硝基精氨甲酯(L-NAME)可同时明显收缩外周血管和肺动脉，使离体主动脉和肺动脉对血管收缩药的敏感性增加。目前尚不清楚选择性诱导性NOS(iNOS)抑制药氨基胍(AG)对外周血管和肺动脉的影响是否存在差异。本研究的目的就是通过用L-NAME和AG孵育内毒素处理的主动脉环和肺动脉环对去甲肾上腺素的反应性，研究L-NAME和AG对不同部位血管作用的差异。
资料与方法
试剂 去甲肾上腺素(NE，Fluka Chemie AG，瑞士，1克/支，纯度99%)，乙酰胆碱(Ach，上海试剂公司进口分装，1克/支，纯度99%)，L-NAME(Sigma，5克/瓶，纯度99%)、AG(Sigma，50克/瓶，纯度99%)、内毒素(LPS，北京邦定公司，1毫克/支)。
实验方法 雄性Wistar大鼠(190～250g)，断头处死后速取主肺动脉及胸主动脉环悬挂于麦氏水浴管内，加入Krebs Buffer液10ml，通混合气体(95% O2 ，5% CO2 )，调节温度37.0℃±0.5℃，给予静止肌张力1.0g(1g＝25mm)后检测血管内皮细胞的完整性，即用10-6 mol/L NE使血管环收缩达最大且平衡后，加入10-5 mol/L的Ach，若出现50%以上的舒张反应，为内皮细胞完整，将内皮细胞完整的血管环冲洗后加入累积剂量的NE(10-9 ～10-4 mol/L)，测定量-效反应曲线，然后将主动脉和肺动脉环置含有LPS(300ng/ml)的组织培养液中，置37℃ CO2 孵育箱中孵育4小时，测定量-效反应曲线。冲洗后随机分为L-NAME(300μ mol/L)孵育60及20分钟的主动脉(n ＝8只)和肺动脉(n ＝6只)或AG(100 μmol/L)孵育60及20分钟的主动脉(n ＝8只)和肺动脉(n ＝6只)共8组，分别在孵育60和20分钟后观察量-效反应曲线。
统计学处理 实验数据以平均值
±s(mm/g)表示。组内行单因素方差分析和q检验。组间行团体t检验。P <0.05有统计学差异。
结果
对NE的量-效反应曲线 给予LPS后所有动脉环对NE的反应性均降低；给予L-NAME或AG后，对高浓度NE的反应性均明显增加。以对10-6 mol/L的NE的反应性比较，给LPS前主动脉较肺动脉的反应性稍高(P >0.05)。给予L-NAME或AG后各组反应性均有升高，60分钟时L-NAME组主动脉较AG组稍高(P >0.05)，而20分钟时明显高于AG组(P <0.05)。肺动脉各时段较AG组明显升高(P <0.05)。L-NAME组主动脉环和肺动脉环的升高幅度无明显差异；而60分钟组的反应性均略低于20分钟组(P <0.05)。AG60分钟组主动脉升高的幅度明显大于肺动脉(P <0.05)。而20分钟组两者无明显差异(P >0.05)。说明L-NAME可使主动脉和肺动脉对NE的敏感性增高。AG仅使主动脉的敏感性增加(见图1～2)。
NE浓度〔-Log(mol/L)〕
图1 L-NAME处理60及20分钟主动脉和肺动脉对NE反应曲线
LB为给予LPS前反应值 LA为给予LPS后反应值
AL为给予L-NAME后反应值 x为AL与LA相比有统计学差异，P<0.05
A：60分钟主动脉反应曲线 B：60分钟肺动脉反应曲线
C：20分钟主动脉反应曲线 D：20分钟肺动脉反应曲线
NE浓度〔-Log(mol/L)〕
图2 AG处理60及20分钟主动脉和肺动脉对NE反应曲线
LB为给予LPS前反应值 LA为给予LPS后反应值
AL为给予AG后反应值 x为AL与LA相比有统计学差异，P<0.05
A：60分钟主动脉反应曲线 B：60分钟肺动脉反应曲线
C：20分钟主动脉反应曲线 D：20分钟肺动脉反应曲线
高峰时间和高峰值 从L-NAME或AG本身引起的收缩高峰时间看，L-NAME引起的血管收缩高峰较AG出现的早，AG组肺动脉收缩高峰早于主动脉(P <0.05)。AG组主动脉收缩高峰值明显高于肺动脉，而L-NAME组两者无明显差异，L-NAME引起的肺动脉收缩高峰明显大于AG(P <0.05)。见附表。
附表 L-NAME与AG所引起主动脉和肺动脉收缩高峰值和时间比较(±s)
| L-NAME | AG | ||
| 主动脉 | 高峰时间(min) | 13.81±2.39▲ | 52.38±5.44 |
| 高峰值(mm/g) | 6.17±2.81 | 4.97±1.29☆ | |
| 肺动脉 | 高峰时间(min) | 12.94±2.69▲ | 40.71±4.18☆ |
| 高峰值(mm/g) | 6.09±0.25▲ | 1.58±0☆ |
L-NAME与AG间比较，▲ P<0.05 主动脉与肺动脉间比较，☆ P<0.05
讨论
研究发现在人体血管内皮细胞中有两种NOS，一种为结构性(cNOS)，对维持正常的血管舒缩状态有重要作用，给予LPS后很快即被激活。另一种为诱导性(iNOS)，在正常情况下无活性，给予LPS后3～4小时达最大活性值。LPS所引起的NOS，尤其是iNOS的激活，可引起NO合成明显增加，激活血管平滑肌中的鸟苷酸环化酶，使cGMP浓度增加、血管扩张。同时血管对血管收缩物质，如NE、血管紧张素Ⅱ的反应性下降〔1，2〕 。用LPS100ng/ml孵育无血管内皮细胞的离体动脉环，在6小时后出现明显的血管舒张反应，而血管内皮细胞完整者在4小时即出现血管舒张反应，说明感染性休克中NO的增加是血管内皮细胞依赖性的〔3、4〕 。
L-NAME和AG均可产生剂量依赖性血管收缩反应。Julou-Schaeffer等〔5，6〕 报道用Ach、L-精氨酸和LPS处理后，内皮细胞完整的离体动脉环对NE的反应性均降低，而L-NAME(300μmol/L)可使之逆转，L-NAME还可使对照组动脉环对间羟胺的收缩性增强，说明它对cNOS有抑制作用〔3〕 。AG(100μ mol/L)对对照组间羟胺引起的动脉收缩和Ach引起的舒张无明显影响，而对LPS处理的动脉环的收缩作用与L-NAME相似〔7，8〕 ，并同时增加血管对NE的敏感性，说明它对cNOS无抑制作用，而对iNOS有明显的抑制作用。
从本研究可见，给予处理因素后L-NAME 组主动脉和肺动脉、AG组主动脉对NE的反应性都明显高于基础值，L-NAME组更加明显；而AG组肺动脉与基础值无明显差异。说明L-NAME使主动脉和肺动脉、AG使主动脉对NE的敏感性增加，且L-NAME大于AG；而AG不影响肺动脉对NE的敏感性。从两种抑制药的收缩峰值看也存在着明显的差异：L-NAME使主动脉和肺动脉明显收缩，AG仅明显收缩主动脉，这与我们在另一在体实验中所观察到的L-NAME使MAP和PAP升高，AG仅使MAP升高，且程度小于L-NAME〔9〕 一致。肺循环是一低压循环系统，肺动脉壁的平滑肌层较薄，仅为主动脉壁的1/3，已有研究发现主动脉和肺动脉对某些静脉麻醉药的反应性不同，但目前尚不清楚肺动脉与主动脉内皮细胞中iNOS及血管平滑肌细胞中鸟苷酸环化酶的活性是否存在差异。结构和功能上的差异可能造成了主动脉和肺动脉对选择性NOS抑制药反应性的不同。
本实验中处理因素本身引起的高峰时间L-NAME明显快于AG组，肺动脉组略快于主动脉组。这可能与L-NAME抑制cNOS，导致较快的血管收缩有关。AG为特异iNOS抑制药，iNOS被激活的过程慢，需3～4小时，其作用被抑制的过程也可能相对较慢。AG组20分钟时主动脉与肺动脉对NE的反应值无明显差异，可能与肺动脉反应性出现快，接近达到高峰值，而主动脉尚未达到有关。60分钟时L-NAME组主动脉和肺动脉对10-6 mol/L NE的反应性小于20分钟时，说明L-NAME对cNOS的作用强于iNOS。
由此可见，AG对体循环和肺循环血管的作用有很明显的差异，使用AG选择性地抑制感染性休克体循环中iNOS的激活，升高血压而不影响肺循环，可能对感染性休克的治疗有重要意义。
本研究为1996年卫生部科学基金资助项目
参考文献
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9 宋冰冰，王俊科，盛卓人，等.诱导性一氧化氮合酶抑制药对感染性休克治疗作用的研究.中华麻醉学杂志，1998，18：90-92.
(收稿：1997-11-18 修回：1998-07-10)
, http://www.100md.com