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编号:10669680
小肠移植急性排斥反应期移植肠白细胞介素2受体和细胞间粘附分子1的表达
http://www.100md.com 《中华实验外科杂志》 1999年第5期
小肠移植急性排斥反应期移植肠白细胞介素2受体和细胞间粘附分子1的表达

李元新 李宁 吴波 黎介寿 李元新 李宁 黎介寿 (210002 南京军区南京总医院普通外科研究所);吴波 (病理科) 中华实验外科杂志 1999 0 16 5
关键词:小肠移植;排斥反应;白细胞介素2受体;细胞间粘附分子1 期刊 zhsywkzz 0 论著 fur -->

【摘要】 目的 探讨移植肠白细胞介素2受体(IL-2R)和细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达在小肠移植排斥反应中的意义及诊断价值。方法 选用近交系大鼠F344/N和Wistar/A进行全小肠异位移植,实验分4组,第1组:Wistar;第2组:Wistar→Wistar;第3组:F344→Wistar;第4组:F344→Wistar+环孢霉素A(6mg. kg-1. d-1 )。术后第3、5、7天取各组动物移植肠标本进行病理学检查,应用免疫组化技术(SP法)检测移植肠IL-2R和ICAM-1的表达。结果 病理学检查显示第3组大鼠在术后第3、5、7天分别符合轻、中、重度排斥,第2、4组无明显排斥征象。第3组IL-2R表达在术后均非常显著高于其他3个对照组;第3组ICAM-1表达在术后第3、5天较相似,尤其在上皮细胞表现为强阳性,并显著高于第1组。但第2、4对照组ICAM-1表达也较高,第3组仅在术后第3天ICAM-1评分显著高于第2组。结论 IL-2R和ICAM-1阳性细胞在小肠移植排斥反应过程中发挥重要作用。应用单克隆抗体阻断IL-2R、ICAM-1表达可能能达到抑制排斥或诱导免疫耐受的目的。

Intragraft expression of IL-2R and ICAM-1 during small intestinal allograft rejection episode

LI Yuanxin ,LI Ning ,WU Bo ,et al .
(Research Institute of General Surgery ,Nanjing Military Command General Hospital ,Nanjing 210002)

【Abstract】 Objective Toinvestigate intragraft expression of IL-2R and ICAM-1 during small intestinal allograftrejection episode.Methods Heterotopic small intestinal transplantationwas performed on inbred rats F344/N (RT11 ) and inbred rats Wistar/A (RT1-Ak ,RT1-Ed ). All recipients were divided into four group:group Ⅰ, Wistar; groupⅡ, Wistar→Wistar; group Ⅲ, F344→Wistar; group Ⅳ, F344→Wistar+Cyclosporine A (6mg. kg-1. d-1 ). The grafts were harvested onthe postoperative day (POD) 3,5,7. Streptavidin-peroxidase (SP) immunohistochemistrytechnique was used to detect the intragraft expression of IL-2R and ICAM-1.Results The histology showed that mild acute rejection occurred on POD 3 in group Ⅲ, moderateacute rejection on POD 5, severe acute rejection on POD 7, while none of group Ⅱ hadhistologic evidence of acute rejection, and the histologic evidence of group Ⅳ indicatedthat Cyclosporine A could effectively control small intestinal acute allograft rejection.Immunohistochemistry showed intragraft IL-2R expression of allografts was significantlyhigher in group Ⅲ than the other three control groups. The intragraft ICAM-1 expressionof allografts was similar on POD 3 and on POD 5, the epithelial cells of grafts werestained strongly positive, and their expression level was significanly higher thannonoperative control group. The level of ICAM-1 expression in group Ⅱ and group Ⅳ wasalso high, only on POD3 the level of ICAM-1 expression of allografts was significantlyhigher than isografts. Conclusion IL-2R and ICAM-1 positive cells play animportant role in small intestinal allograft rejection. Anti-rejection therapy orinduction of immune tolerance could be achieved by applying monoclonal antibody of IL-2Rand ICAM-1.
【Key words】 Small intestine transplantation Graft rejectionInterleukin-2 receptor Intercellular adhesion molecular-1

我们应用免疫组化的链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)染色技术检测移植肠白细胞介素2受体(IL-2R)和细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达,研究其在大鼠小肠移植排斥反应中的变化,结果报道如下。

材料与方法
1. 动物模型与实验分组 选用近交系大鼠F344/N(RT11 )和Wistar/A(RT1-Ak ,RT1-Ed )进行全小肠异位移植,每组移植大鼠数均为6只:第1组,非手术基本对照组(Wistar);第2组,同基因移植对照组(Wistar→Wistar);第3组,异基因移植排斥反应组(F344→Wistar);第4组,环孢霉素A治疗对照组[F344→Wistar+CsA(6mg/kg)]每日一次肌注。分别于术后第3、5、7天取各组动物移植肠标本用10%中性福马林固定备病理及免疫组化检查。
2. 组织病理学检查 参照文献[1,2],制定排斥反应的病理学诊断标准。
3. 免疫组化检测IL-2R、ICAM-1表达 石蜡切片厚度4μm,应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化染色试剂盒(福州迈新生物技术公司)进行染色,实验步骤按试剂盒说明书进行。第一抗体分别选用美国SantaCruz Biotechnology生产的兔抗鼠IL-2R α多抗和羊抗鼠ICAM-1多抗,IL-2R和ICAM-1工作浓度分别为1∶200和1∶50,应用新鲜配制DAB进行显色。每次染色时均设立阳性对照和阴性空白对照,IL-2R阳性对照片选用正常大鼠的脾脏组织切片,ICAM-1阳性对照片选用正常大鼠的小肠组织切片。IL-2R的阳性染色标准为细胞膜被染成棕黄色的细胞体积偏大胞浆丰富的淋巴细胞。每张切片记录30~40个高倍视野(400倍)下的阳性细胞数,计算出平均每个视野阳性细胞数。ICAM-1的阳性染色标准为上皮细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞的细胞膜被染成棕黄色。将染色结果半定量地分为0、1、2、3四级并进行评分。
4. 统计学处理 结果以均数±标准误(±s) 表示,IL-2R数据采用统计软件STATISTICA5.0版本进行方差(ANOVA)分析;ICAM-1数据采用统计软件STATISTICA5.0版本进行非参数Mann-WhiteU检验。

结 果
1. 病理学检查 第3组大鼠移植肠在术后第3天发生轻度排斥反应,第5天中度排斥反应,第7天重度排斥反应。第2组无排斥反应病理征象,第4组部分标本在术后第5、7天轻度排斥反应。
2. 移植肠IL-2R、ICAM-1表达 第3组IL-2R表达在术后第3、5、7天均非常显著高于其他3个对照组。ICAM-1在第1组正常小肠血管内皮细胞、间质中的淋巴细胞散在阳性,粘膜上皮弱阳性。第3组ICAM-1评分在术后第3、5天显著高于第1组(P<0.05),尤其是在上皮细胞上表现强阳性,同时在第3天显著高于第2组,至术后第7天由于移植肠上皮全部坏死脱落,染色结果已无法进行记录。第2、4对照组ICAM-1表达也较强,尤其是第4组在术后第5天也显著高于第1组。

讨 论
我们选择排斥过程中活化、分化、增殖的T细胞的标记——IL-2R作为观察排斥反应的指标,应用免疫组化技术观察ICAM-1在小肠移植排斥反应中的表达的变化。实验结果表明第3组IL-2R表达在术后均非常显著高于其他3个对照组。而第3组ICAM-1表达在术后第3、5天显著高于第1组,尤其在上皮细胞表现为强阳性,同时在术后第3天显著高于第2组。我们发现上皮细胞的ICAM-1表达更具有研究意义,因为排斥反应期上皮细胞ICAM-1表达的变化比淋巴细胞和内皮细胞更为明显。第2、4组IL-2R、ICAM-1表达要高于第1组,其原因在术后第3天可能与移植肠缺血再灌注损伤有关,而在术后第5、7天可能与移植肠异位移植于腹腔,缺少肠腔内的食物刺激而发生肠粘膜萎缩和细菌易位有关。本研究表明IL-2R阳性细胞在小肠移植排斥反应过程中发挥重要作用,而在排斥早期ICAM-1也发挥了重要作用;移植肠ICAM-1的表达,尤其是IL-2R的表达可能成为小肠移植排斥反应的标记物,为小肠移植排斥反应早期确定性的诊断提供辅助手段。应用单克隆抗体通过干扰IL-2R和ICAM-1阳性细胞可能达到小肠移植抗排斥或诱导免疫耐受的目的。

本课题为全军医药卫生科研基金资助项目(No.96M021)

参考文献
1 Schmid T, Oberhuber G, Korozsi G, et al. Histological pattem ofsmall bowel allograft rejection in the rat. Mucosal biopsies do not provide sufficientinformation. Gastroenterology, 1989, 96:1529-1532.
2 Rosemurgy AS, Schraut WH. Small bowel allografts: sequence of histologic changes inacute and chronic rejection. Am J Surg, 1986, 151:470-472.

(收稿:1998-12-31) , 百拇医药