我们根据急性移植物抗宿主病(GVHD)的发病机制，选取肿瘤坏死因子α(TNF-α)作为早期激活及效应期的标志，γ干扰素(IFN-γ)代表Th1细胞因子，白细胞介素4(IL-4)代表Th2细胞因子，以酶联免疫分析(ELISA)为检测手段，观察照射、植物血凝素(PHA)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(G-CSF)、甲基泼尼龙(MP)等对外周血单个核细胞(PBMNC)培养上清液中TNF-α、IFN-γ、IL-4生成的影响，为开展防治GVHD的动物实验及临床实验提供依据。

材料和方法

    1 细胞来源 健康成人外周血4～6ml，肝素抗凝，分离单个核细胞。

    2 体外PBMNC培养 PHA对PBMNC的刺激反应：采用不同浓度PHA-P刺激同一个体PBMNC。单向混合淋巴细胞反应(MLR)：以照射细胞(¹³⁷ Cr,40 Gy)作为刺激细胞，以未照射的异基因PBMNC作为反应细胞；双向MLR：两个无关个体PBMNC互为刺激细胞及反应细胞，加入不同浓度G-CSF(日本麒麟公司产品)或MP，接种于96孔板，细胞终浓度为1×10⁶ /ml，刺激细胞与反应细胞之比为1∶1，终体积200μl/孔，37 ℃，体积分数为5%的CO₂ 孵箱中培养1～8天，不同时间取细胞培养上清，-20℃冻存。

    3 ELISA法测定细胞因子 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 ......