基体辅助激光解吸/ 电离飞行时间质谱在

    脱氧核糖核酸分析中的样品制备与纯化方法及进展

    周丽华 邓慧敏

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    邓芹英 赵善楷

    (中山大学测试中心,广州510275)

    摘 要 样品的制备与纯化是基体辅助激光解吸/ 电离飞行时间质谱(MALDI2TOF2MS) 能成功用于脱氧核糖

    核酸(DNA) 分析的关键所在。近年来对DNA 样品制备与纯化方法的探讨和改进已取得了一些新的进展。本

    文就此作一简要概述。

    关键词 基体辅助激光解吸/ 电离飞行时间质谱, 脱氧核糖核酸,样品制备与纯化,评述

    2003201229 收稿;2003210228 接受

    本文系广东省自然科学基金资助项目(No. 990209)

    1 引 言

    随着分子生物学和生物技术的迅速发展,以及DNA 在生命科学研究中的重要地位,有关DNA 的分

    子生物学研究已经成为当前生命化学、分子生物学及医学领域最具有活力的研究方向之一。近年来,DNA、特别是一些化学合成的或化学修饰的寡聚核苷酸在基因治疗以及基因诊断方面显示出良好的应

    用前景。因此,建立和发展一种更有效、灵敏、快速和精确的DNA 各种性质的分析方法具有重要意义。

    在20 世纪80 年代末,Tanaka , Karas 和Hillenkamp 等提出基体辅助激光解吸/ 电离技术,并与飞行时间质

    谱相结合,产生了“软”电离的基体辅助激光解吸/ 电离飞行时间质谱(MALDI2TOF2MS) ,在生命科学和高

    分子聚合物的研究中有广阔的应用前景。目前,MALDI2TOF2MS 已被广泛地应用于多肽、蛋白质、糖、核

    酸等生物大分子以及合成聚合物的分析中1 ～3 。但对DNA 的分析还远未达到与蛋白质同样的分析水

    平和广泛应用的程度,原因主要有以下3 个方面4 ～7 : (1) 核酸分子中N2戊糖键的碱基易断裂,使分子离

    子峰不稳定; (2) 基体或痕量碱金属离子导致加合物的生成; (3) 分析的灵敏度和分辨率低。DNA 样品

    制备与纯化对于解决上述三方面的问题有其突出的贡献,本文就近年来DNA 样品的制备与纯化方法及

    进展作一简要的概述。

    2 样品制备方法

    2. 1 石蜡膜液滴干燥法

    MALDI2TOF2MS 分析DNA 时,样品制备最常采用的是液滴干燥法4 。其过程是将样品移至C18滤筒

    中,分别用去离子水和50 %乙腈水溶液淋洗,洗脱液流经NH+ ......