酶联免疫分析法探测Cry1Ab蛋白在不同介质中的构象变化

    邬建敏1 奚凤娜1 叶庆富

    3 2 刘维屏3

    1 (浙江大学理学院化学系,杭州310027) 2 (浙江大学原子核农业科学研究所,杭州310029)

    3 (浙江大学环境科学研究所,杭州310029)

    摘 要 采用酶联免疫分析( EL ISA)方法,根据构象变化后的蛋白与抗体结合能力下降从而导致EL ISA测定

    值降低的原理,探测了转cry1Ab基因水稻表达的Cry1Ab蛋白在不同溶液介质中的热致构象变化行为,以及

    不同有机溶剂及溶液pH值对该蛋白构象变化的影响程度。实验表明, CrylAb蛋白在不同条件下的构象变化

    程度可以灵敏地通过EL ISA方法检测。在不同的介质中, Cry1Ab蛋白的热致构象变化程度不同。在Na2 SO4

    介质中,该蛋白具有较高的热稳定性; SDS的存在,可以促进该蛋白的构象变化。常温下, 25% (V /V )的有机

    溶剂乙腈、异丙醇、甲醇、乙醇均能使该蛋白的构象发生转变,其中以乙腈最为显著。醇类溶剂对Cry1Ab蛋白

    的构象影响程度随疏水性增大而增大;溶液pH值也对该蛋白的构象变化产生影响。pH在8～10之间,该蛋

    白构象能保持稳定;酸或过碱性的溶液均能使蛋白构象偏离原始状态,从而引起EL ISA测定值的降低。另

    外,腐殖酸能在一定时间内保持Cry1Ab蛋白构象的稳定性。

    关键词 酶联免疫分析, Cry1Ab蛋白,构象,转基因植物

    2004208226收稿; 2005201224接受

    本文系国家自然科学基金资助项目(No. 20277031和No. 20177021)

    1 引 言

    cry1Ab基因是从苏云金杆菌(B acillus thu ringiesnis, Bt)中分离出来的一种能够表达Cry1Ab杀虫蛋

    白的B t基因。转基因植物释放的外源基因及其表达产物对环境的影响备受关注[ 1, 2 ] 。外源基因表达的

    活性蛋白在离开植物体后会进入不同的环境介质中, 致使该蛋白暴露于与其原来所存在的植物体内完

    全不同的环境中。大量文献报道表明,蛋白质在介质条件改变时,会引起其构象的改变而影响其生物活

    性[ 3, 4 ] 。Cry1Ab蛋白在生物体外的活性保持情况,也与其在相应的介质环 中构象的变化、降解等因素

    有关。目前蛋白质在溶液状态下的构象变化研究手段主要采用荧光光谱法[ 5 ] 、圆二色谱(CD)法[ 6 ]和 ......