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编号:10794156
以变色酸2R为底物测定辣根过氧化物酶的研究
http://www.100md.com 《分析化学》 2004年第5期
变色酸2R,,变色酸2R,辣根过氧化物酶,酶联免疫分析,伏安法
     第32 卷

    2004 年5 月

    分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第5 期

    593~597

    以变色酸2R为底物测定辣根过氧化物酶的研究

    焦 奎3 徐 静 孙 伟 江 宏

    (青岛科技大学化学与分子工程学院, 青岛266042)

    摘 要 变色酸2R(CT2R) 是一种具有电化学活性的物质,在碱性条件下,该物质在滴汞电极上- 660 mV

    ( vs. SCE) 左右产生还原波,加入H2O2 和辣根过氧化物酶(HRP) 后,该物质被氧化生成具有非电化学活性的

    物质,导致溶液中游离的CT2R 浓度降低,相应还原波波高降低,HRP 在一定含量范围内与伏安峰的降低值

    具有良好的线性关系。通过测定波高的降低值可测定HRP ,测定游离HRP 的线性范围是4. 0 ×10 - 5~ 4. 0

    ×10 - 3 g/ L 。对酶促反应的动力学进行了研究,反应的米氏常数Km = 1. 38 mmol/ L , 最大反应速率V max =

    53. 9 nA/ min。

    关键词 变色酸2R ,辣根过氧化物酶,酶联免疫分析,伏安法

    2003207229 收稿;2004202212 接受

    本文系国家自然科学基金资助项目(No. 20075013)

    1 引 言

    本课题组曾报道了一系列联苯胺及其衍生物1 ~3 、苯二胺及其衍生物4 ,5 和氨基酚类6 ,7 物质为底

    物的伏安酶联免疫分析法。辣根过氧化物酶8 ,9 对H2O2 氧化这些有机化合物的反应有很强的催化作

    用。酶促反应的产物分别为偶氮联苯化合物、吩嗪类或亚胺类化合物、酮或含羰基的化合物。这些产物

    均可在汞电极上还原产生良好的伏安峰,测定酶促反应产物的伏安峰便可测定HRP 的活性,从而建立

    起以HRP 为标记酶的伏安酶联免疫分析法。这些体系的基本原理大都是在未加入HRP 和H2O2 时,在底物有机化合物的伏安曲线上没有伏安峰或只有很小的空白伏安峰,加入HRP 和H2O2 后,产生良

    好的伏安还原峰,HRP 在一定含量范围内与伏安峰高具有良好的线性关系。本实验提出以CT2R 为底

    物的伏安酶联免疫分析新体系。本体系则是在未加入HRP 和H2O2 时,CT2R 具有一良好的伏安还原

    峰,加入HRP 和H2O2 后,伏安还原峰减小,HRP 在一定含量范围内与伏安峰的降低具有良好的线性关 ......

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