反相高效液相色谱法测定果汁中11 种有机酸条件的优化
反相高效液相色谱法测定果汁中11 种有机酸条件的优化
高海燕1 廖小军1 王善广2 胡小松3 1
1 (中国农业大学食品科学与营养工程学院, 北京100083) 2 (国家农产品保鲜工程技术研究中心,天津300112)
摘 要 提出了一种利用高效液相色谱同时分析果汁中11 种有机酸的优化的方法。在Prontosil 1202102C18H
(10μm ,4. 6 mm i. d. ×250 mm) 色谱柱上,3 % CH3OH20. 01 mol/ L K2HPO4 (pH 2. 55) 溶液做流动相,流速为0. 5
mL/ min ,柱温为30 ℃,紫外检测波长为210 nm时,可以较好地分离和测定果汁中常见的11 种有机酸。该方法
相对标准偏差0. 31 %～1. 59 % ,回收率96. 8 %～102. 0 % ,各种酸的线性相关系数r > 0. 9996 ,具有较高的准确
度和精确度,方法简便,可应用于果汁中有机酸的检测。
关键词 反相高效液相色谱,有机酸,果汁
2003210208 收稿;2004203229 接受
本文系国家“十五”科技攻关课题基金资助项目(No. 2001BA501A07)
1 引 言
有机酸是果汁酸味的主要成分,其种类和含量高低与果汁的品质和风味有极密切的关系1 ,2 。原果汁
营养丰富,但由于生产成本较高,果汁的掺假行为经常发生,对天然果汁的真伪鉴定是当今国内外检验的
一个热点3 。不同种类的天然果汁中,有机酸的种类和含量差别很大。在一定条件下,可以通过测定各种
有机酸的含量来鉴别果汁饮料掺假与否4 。因此,果汁中多种有机酸的分析测定具有重要的意义。
反相高效液相色谱法是近几年来发展较快的方法,然而现有的报道仅限于6～7 种有机酸的分
离2 ,5 ～7 。本研究通过优化反相C18柱的色谱条件,可同时分离测定果汁中的11 种有机酸,便捷、快速、准确。
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
高效液相色谱系统: K21001 型输液泵、K21500 溶剂混合器、K22501 型可变波长紫外检测器(德国
Knauer 公司) ; AT2150 型柱温箱(奥德赛斯公司) ;酸度计(奥立龙868) 。色谱纯草酸、酒石酸、奎宁酸、苹
果酸、莽草酸、抗坏血酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸(Sigma 公司) ;色谱纯甲醇(天津康科德科技
公司) ;分析纯磷酸、磷酸氢二钾(北京新工化学试剂厂) 。
2. 2 色谱条件
色谱柱:Prontosil 1202102C18H (10μm ,4. 6 mm i . d. ×250 mm) ;流速:0. 5 mL/ min ;进样体积:20μL ;检
测波长:210 nm;柱温:30 ℃;流动相:用二次蒸馏水配制不同浓度及pH 值的K2HPO4 溶液。
2. 3 有机酸标准溶液
准确称取酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、抗坏血酸、奎宁酸和莽草酸各125 mg ,富马酸25 mg ,草酸
50 mg ,琥珀酸375 mg ,柠檬酸250 mg ,用流动相溶解并定容至50 mL 容量瓶中。上述溶液配制成不同浓
度的混标,用0. 45μm 的滤膜过滤后,上机绘制各种有机酸的标准曲线。
3 结果与讨论
3. 1 检测波长的确定
用200～350 nm(紫外) 光对11 种有机酸的标准溶液进行扫描,结果表明11 种有机酸均在210 nm附近
有较大的吸收,重复性好,不受流动相中其他物质的干扰,故以下实验均采用210 nm波长进行检测。
3. 2 流动相浓度的选择
第32 卷
2004 年12 月
分析化学(FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第12 期
1645～1648
将流动相分别配成0、0. 03 、0. 06 、0. 09 、0. 12、0. 15、0. 18 和0. 21 mol/ L 的K2HPO4 溶液(用H3PO4 调
pH值为2. 65) ,对标准溶液中的各有机酸进行分离。结果表明:当流动相中不含有磷酸盐时,各有机酸
分离效果不好;逐步增加流动相中磷酸盐的浓度,有机酸均能得到分离,且不影响分离效果。由于高浓
度的盐会对泵和柱子的寿命产生影响,所以本实验选用0. 01 mol/ L 的K2HPO4 作为流动相。
3. 3 流动相pH值的选择
以不同pH 值(用H3PO4 调节) 的0. 01 mol/ L 的K2HPO4 溶液作流动相,测定各有机酸的保留时间,结果显示流动相pH 值对有机酸的分离影响很大(见图1) 。当pH 值为2. 0 时,琥珀酸和富马酸完全不
图1 流动相pH对保留时间的影响
Fig. 1 Effect on retention time of organic acid by
pH value of mobile phase
1. 草酸(oxilic acid) ; 2. 酒石酸(tartaric acid) ; 3. 奎宁
酸(quinic acid) ; 4. 苹果酸(malic acid) ; 5. 莽草酸
(shikimic acid) ; 6. 抗坏血酸(ascorbic acid) ; 7. 乳酸
(lactic acid ) ; 8. 乙酸( acetic acid ) ; 9. 柠檬酸
(citric acid) ; 10. 富马酸(fumaric acid) ; 11. 琥珀酸
(succinic acid) 。
能分开;逐步提高pH 值, 11 种有机酸逐渐得到分离,但柠
檬酸和富马酸、酒石酸和奎宁酸的分离度却逐渐减小;当
pH值为3. 0 时,柠檬酸和富马酸、酒石酸和奎宁酸不能有
效分离;当pH 值为3. 2 时,部分有机酸的出峰顺序发生变
化。由于pH 值小于2. 5 的溶液会影响色谱柱的寿命,经综
合考虑,最后选择pH 值为2. 6 磷酸盐缓冲溶液。
3. 4 流动相中甲醇含量的选择
在流动相中加入少量甲醇,能有效的改善峰形。以
0101 mol/ L 的K2HPO4 (pH 2. 6) 溶液作流动相,对不同的甲
醇含量(0、1 %、2 %、3 %、4 %、5 %) 对色谱分离的影响进行
了比较,结果表明,随着流动相中甲醇含量的增加,有机酸
的疏水端基与固定相的相互作用减弱,保留时间下降,3 %
的甲醇2缓冲溶液( V/ V) 分离度和峰形较好。
3. 5 其它条件选择
以3 %CH3OH2K2HPO4 (pH 2. 6) 溶液作流动相比较了柱
温、流速对保留时间的影响。结果发现:流速1. 0 mL/ min
时,分离度降低,柱压升高,不利于色谱柱的保护和长期使用,而柱温增高则会加快传质过程,缩小分离
度。因此,选择在室温(30 ℃) 及0. 5 mL/ min 流速下进行测定。
3. 6 分离条件的优化
以4 因素3 水平的正交试验(流动相pH 值、甲醇含量、流速和柱温) 对分离条件进行优化,以卢佩章
等8 提出的HCRF 为优化指标,最终得到优化的条件: (1) 流速0. 5 mL/ min ; (2) 流动相3 % CH3OH20. 01
mol/L K2HPO4 (pH 2. 55) ; (3) 柱温30 ℃。图2a 为该条件下测定的有机酸的标准色谱图,11 种有机酸均
得到有效分离。
图2 有机酸标样(a) 和苹果汁(b) 的色谱图
Fig. 2 Chromatogram of organic acid standards mixtures (a) and apple juice (b)
1. 草酸(oxilic acid) ; 2. 酒石酸(tartaric acid) ; 3. 奎宁酸(quinic acid) ; 4. 苹果酸(malic acid) ; 5.
莽草酸(shikimic acid) ; 6. 抗坏血酸(ascorbic acid) ; 7. 乳酸( lactic acid) ; 8. 乙酸( acetic acid) ;
9. 柠檬酸(citric acid) ; 10. 富马酸(fumaric acid) ; 11. 琥珀酸( succinic acid) 。
6 4 6 1 分析化学第32 卷
3. 7 标准曲线、检出限、精密度及回收率
取同一苹果汁样品2 份,其中一份作本底(苹果汁样品色谱图见图2b) ,另一份添加一定量的11 种
有机酸标品溶液后测定各成分含量,每份样品进行5 次平行测定,考察方法的回收率和精密度,以峰高
A (mV) 对质量浓度C(mg/ L) 求得线性回归方程,以3 倍信噪比( S/ N) 计算最小检出限量,结果见表1。
可见该方法定量准确灵敏、重现性好、回收率高。
表1 回归分析和检出限
Table 1 Regression analysis and detection limit
有机酸
Organic acid
回归方程
Regression equation
相关系数
Correlation
coefficient
检出限
Detection limit
(mg/ L)
RSD
( %)
回收率
Recovery
( %)
草酸Oxilic acid C = - 0. 0891 + 1. 846 ×10 - 5A 0. 9999 0. 04 0. 97 102. 0
酒石酸Tartaric acid C = - 0. 0879 + 1. 14 ×10 - 4A 0. 9996 0. 09 1. 43 98. 8
奎宁酸Quinic acid C = 0. 0568 + 4. 07 ×10 - 4A 1. 0000 0. 30 0. 87 99. 4
苹果酸Malic acid C = - 0. 2998 + 2. 983 ×10 - 4A 0. 9999 0. 50 0. 31 100. 1
莽草酸Shikimic acid C = - 0. 0036 + 5. 469 ×10 - 6A 1. 0000 0. 01 0. 89 100. 1
抗坏血酸Ascorbic acid C = - 0. 0019 + 2. 464 ×10 - 5A 0. 9998 0. 03 1. 59 96. 8
乳酸Lactic acid C = 0. 3574 + 6. 898 ×10 - 4A 1. 0000 0. 54 1. 16 98. 2
醋酸Acetic acid C = - 0. 0345 + 4. 915 ×10 - 4A 1. 0000 0. 73 1. 10 97. 9
柠檬酸Citric acid C = 0. 0158 + 4. 936 ×10 - 4A 0. 9999 0. 50 0. 96 99. 5
富马酸Fumaric acid C = - 0. 0007 + 4. 164 ×10 - 6A 0. 9999 0. 02 0. 79 99. 2
琥珀酸Succinic acid C = 0. 225 + 1. 05 ×10 - 3A 1. 0000 2. 00 1. 53 99. 6
3. 8 果汁样品中有机酸的定量分析结果
实验选用了苹果、梨、脐橙进行了有机酸的测定,原料经一定的制汁工序处理后,用流动相进行适当
的稀释定容,经0. 45μm 膜过滤后测定。结果表明:天然水果原汁中各种有机酸的含量和种类差别很
大,在一定条件下,可以用此方法来鉴别果汁饮料的质量(表2) 。
表2 果汁中有机酸含量(mg/ L)
Table 2 Contents of organic acid in fruit juices (mg/ L)
果汁样品
Sample
草酸
Oxilic acid
酒石酸
Tartaric acid
奎宁酸
Quinic
苹果酸
Malic acid
莽草酸
Shikimic acid
抗坏血酸
Ascorbic acid
鲜榨脐橙汁Orange juice 34. 25 - 728. 75 865. 00 - 552. 25
鸭梨清汁Ya pear juice - 44. 18 226. 90 1020. 75 76. 88 -
黄元帅苹果清汁
Golden delicious apple juice - 57. 55 200. 38 4085. 00 7. 53 -
果汁样品
Sample
乳酸
Lactic acid
乙酸
Acetic acid
柠檬酸
Citric acid
富马酸
Fumaric acid
琥珀酸
Succinic acid
鲜榨脐橙汁Orange juice - - 5657. 5 4. 27 83. 7
鸭梨清汁Ya pear juice 11. 39 - 1048 8. 00 11. 38
黄元帅苹果清汁
Golden delicious apple juice 53. 25 3. 59 105. 3 0. 27 10. 75
- 表示未检出(undetected)
4 结 论
经多次实验结果证明: 采用Prontosil 1202102C18 H(10 μm ,4. 6 mm i . d. ×250 mm) 色谱柱,以3 %
CH3OH20. 01 mol/ L K2HPO4 (pH 2. 55) 溶液做流动相,流速为0. 5 mL/ min ,在210 nm 波长下,可以较好地
分离和定量果汁中常见的11 种有机酸。该方法具有前处理简单、灵敏度高、测试组分多、速度快等优
点,对于鉴别果汁真假、控制果汁质量具有重要的意义。
References
1 Wang Yujun(王玉君) . Chinese Journal of Chromatography (色谱) , 1991 , 9 (4) : 271～272
2 Cui Yulin(崔雨林) , Dai Yunqing(戴蕴青) ,Han Yashan(韩雅珊) . Acta China Agriculture University (中国农业大学学报) ,1995 , 21 (1) : 39～43
7 4 6 1 第12 期高海燕等:反相高效液相色谱法测定果汁中11 种有机酸条件的优化
3 Guo Dehua (郭德华) ,Xu Sujun(徐素君) ,Wang Sufen(王素芬) . Chinese Journal of Chromatography (色谱) , 2001 , 19 (5) : 276
～278
4 Du Peng(杜 朋) . Technology of Fruit and Vegetable Juices (果蔬汁饮料工艺学) . Beijing(北京) : Agriculture Press (农业出
版社) , 1992 : 529～535
5 Li Jinxu(李金旭) , Shi Jing (石 晶) . Chinese J . Anal . Chem. (分析化学) , 1993 , 21 (8) : 878～881
6 Bi Lijun(毕丽君) , Zhang Li (张 骊) ,Zhang Hongfa (张鸿发) . Chinese J . Anal . Chem. (分析化学) , 2000 , 28 (11) : 1391
～1394
7 Li Youyuan(李友元) , Chen Changhua (陈长华) , Tao Ping(陶 萍) . Chinese Journal of Chromatography (色谱) , 2002 , 20
(1) : 46～48
8 Huang Hongxin (黄红心) , Zhang Yukui (张玉奎) , Lin Congjing(林从敬) , Lu Peizhang(卢佩章) . Chinese Journal of Chro2
matography (色谱) , 1992 , 10 (3) : 125～128
Simultaneous Determination of Eleven Organic Acids in Fruit Juice
by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography
Gao Haiyan1 , Liao Xiaojun1 , Wang Shanguang2 , Hu Xiaosong
3 1
1 ( College of Food Science and Nutritional Engineering , China Agricultural University , Beijing 100083)
2 ( National Engineering and Technology Research Center for Agricultural Products Freshness Protection , Tianjin 300112)
Abstract A method for simultaneous determination of 11 organic acids in fruit juices by reverse phase high perfor2
mance liquid chromatography was developed. Prontosil 1202102C18H column (10μm ,4. 6 mm i . d. ×250 mm) was
used at 30 ℃and mobile phase was 3 %CH3OH20. 01 mol/ L K2HPO4 (pH 2. 55) with flow rate of o. 5 mL/ min.
Detection wavelength was at 210 nm. The relative standard deviations were 0. 3 %～1. 6 % and the recoveries were
96. 8 %～102. 0 %. The correlation coefficients for the linear equations were 0. 9996～1. 0000. The results men2
tioned above indicated that the method was simple , rapid and accurate. It has been applied to the determination of
organic acids in fruit juices.
Keywords Reversed phase high performance liquid chromatography , organic acid , fruit juice
(Received 8 October 2003 ; accepted 29 March 2004)
《分析试验室》征订启事
国内统一刊号:CN1122017/ TF
国际CODEN 码:FENSE4
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《分析试验室》是中文核心期刊,月刊,国内外公开发行。1982 年创刊,目前已成为我国著名的分析化学专业刊物。
影响遍及冶金、地质、石油化工、环保、药物、食品、农业、商品检验和海关等社会各行业及各学科领域。《分析试验室》以
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电话:010 - 82013328 ,E2mail :analysislab @263. net
8 4 6 1 分析化学第32 卷, 百拇医药(高海燕1 廖小军1 王善广2 胡小松3 1)
高海燕1 廖小军1 王善广2 胡小松3 1
1 (中国农业大学食品科学与营养工程学院, 北京100083) 2 (国家农产品保鲜工程技术研究中心,天津300112)
摘 要 提出了一种利用高效液相色谱同时分析果汁中11 种有机酸的优化的方法。在Prontosil 1202102C18H
(10μm ,4. 6 mm i. d. ×250 mm) 色谱柱上,3 % CH3OH20. 01 mol/ L K2HPO4 (pH 2. 55) 溶液做流动相,流速为0. 5
mL/ min ,柱温为30 ℃,紫外检测波长为210 nm时,可以较好地分离和测定果汁中常见的11 种有机酸。该方法
相对标准偏差0. 31 %～1. 59 % ,回收率96. 8 %～102. 0 % ,各种酸的线性相关系数r > 0. 9996 ,具有较高的准确
度和精确度,方法简便,可应用于果汁中有机酸的检测。
关键词 反相高效液相色谱,有机酸,果汁
2003210208 收稿;2004203229 接受
本文系国家“十五”科技攻关课题基金资助项目(No. 2001BA501A07)
1 引 言
有机酸是果汁酸味的主要成分,其种类和含量高低与果汁的品质和风味有极密切的关系1 ,2 。原果汁
营养丰富,但由于生产成本较高,果汁的掺假行为经常发生,对天然果汁的真伪鉴定是当今国内外检验的
一个热点3 。不同种类的天然果汁中,有机酸的种类和含量差别很大。在一定条件下,可以通过测定各种
有机酸的含量来鉴别果汁饮料掺假与否4 。因此,果汁中多种有机酸的分析测定具有重要的意义。
反相高效液相色谱法是近几年来发展较快的方法,然而现有的报道仅限于6～7 种有机酸的分
离2 ,5 ～7 。本研究通过优化反相C18柱的色谱条件,可同时分离测定果汁中的11 种有机酸,便捷、快速、准确。
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
高效液相色谱系统: K21001 型输液泵、K21500 溶剂混合器、K22501 型可变波长紫外检测器(德国
Knauer 公司) ; AT2150 型柱温箱(奥德赛斯公司) ;酸度计(奥立龙868) 。色谱纯草酸、酒石酸、奎宁酸、苹
果酸、莽草酸、抗坏血酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸(Sigma 公司) ;色谱纯甲醇(天津康科德科技
公司) ;分析纯磷酸、磷酸氢二钾(北京新工化学试剂厂) 。
2. 2 色谱条件
色谱柱:Prontosil 1202102C18H (10μm ,4. 6 mm i . d. ×250 mm) ;流速:0. 5 mL/ min ;进样体积:20μL ;检
测波长:210 nm;柱温:30 ℃;流动相:用二次蒸馏水配制不同浓度及pH 值的K2HPO4 溶液。
2. 3 有机酸标准溶液
准确称取酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、抗坏血酸、奎宁酸和莽草酸各125 mg ,富马酸25 mg ,草酸
50 mg ,琥珀酸375 mg ,柠檬酸250 mg ,用流动相溶解并定容至50 mL 容量瓶中。上述溶液配制成不同浓
度的混标,用0. 45μm 的滤膜过滤后,上机绘制各种有机酸的标准曲线。
3 结果与讨论
3. 1 检测波长的确定
用200～350 nm(紫外) 光对11 种有机酸的标准溶液进行扫描,结果表明11 种有机酸均在210 nm附近
有较大的吸收,重复性好,不受流动相中其他物质的干扰,故以下实验均采用210 nm波长进行检测。
3. 2 流动相浓度的选择
第32 卷
2004 年12 月
分析化学(FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第12 期
1645～1648
将流动相分别配成0、0. 03 、0. 06 、0. 09 、0. 12、0. 15、0. 18 和0. 21 mol/ L 的K2HPO4 溶液(用H3PO4 调
pH值为2. 65) ,对标准溶液中的各有机酸进行分离。结果表明:当流动相中不含有磷酸盐时,各有机酸
分离效果不好;逐步增加流动相中磷酸盐的浓度,有机酸均能得到分离,且不影响分离效果。由于高浓
度的盐会对泵和柱子的寿命产生影响,所以本实验选用0. 01 mol/ L 的K2HPO4 作为流动相。
3. 3 流动相pH值的选择
以不同pH 值(用H3PO4 调节) 的0. 01 mol/ L 的K2HPO4 溶液作流动相,测定各有机酸的保留时间,结果显示流动相pH 值对有机酸的分离影响很大(见图1) 。当pH 值为2. 0 时,琥珀酸和富马酸完全不
图1 流动相pH对保留时间的影响
Fig. 1 Effect on retention time of organic acid by
pH value of mobile phase
1. 草酸(oxilic acid) ; 2. 酒石酸(tartaric acid) ; 3. 奎宁
酸(quinic acid) ; 4. 苹果酸(malic acid) ; 5. 莽草酸
(shikimic acid) ; 6. 抗坏血酸(ascorbic acid) ; 7. 乳酸
(lactic acid ) ; 8. 乙酸( acetic acid ) ; 9. 柠檬酸
(citric acid) ; 10. 富马酸(fumaric acid) ; 11. 琥珀酸
(succinic acid) 。
能分开;逐步提高pH 值, 11 种有机酸逐渐得到分离,但柠
檬酸和富马酸、酒石酸和奎宁酸的分离度却逐渐减小;当
pH值为3. 0 时,柠檬酸和富马酸、酒石酸和奎宁酸不能有
效分离;当pH 值为3. 2 时,部分有机酸的出峰顺序发生变
化。由于pH 值小于2. 5 的溶液会影响色谱柱的寿命,经综
合考虑,最后选择pH 值为2. 6 磷酸盐缓冲溶液。
3. 4 流动相中甲醇含量的选择
在流动相中加入少量甲醇,能有效的改善峰形。以
0101 mol/ L 的K2HPO4 (pH 2. 6) 溶液作流动相,对不同的甲
醇含量(0、1 %、2 %、3 %、4 %、5 %) 对色谱分离的影响进行
了比较,结果表明,随着流动相中甲醇含量的增加,有机酸
的疏水端基与固定相的相互作用减弱,保留时间下降,3 %
的甲醇2缓冲溶液( V/ V) 分离度和峰形较好。
3. 5 其它条件选择
以3 %CH3OH2K2HPO4 (pH 2. 6) 溶液作流动相比较了柱
温、流速对保留时间的影响。结果发现:流速1. 0 mL/ min
时,分离度降低,柱压升高,不利于色谱柱的保护和长期使用,而柱温增高则会加快传质过程,缩小分离
度。因此,选择在室温(30 ℃) 及0. 5 mL/ min 流速下进行测定。
3. 6 分离条件的优化
以4 因素3 水平的正交试验(流动相pH 值、甲醇含量、流速和柱温) 对分离条件进行优化,以卢佩章
等8 提出的HCRF 为优化指标,最终得到优化的条件: (1) 流速0. 5 mL/ min ; (2) 流动相3 % CH3OH20. 01
mol/L K2HPO4 (pH 2. 55) ; (3) 柱温30 ℃。图2a 为该条件下测定的有机酸的标准色谱图,11 种有机酸均
得到有效分离。
图2 有机酸标样(a) 和苹果汁(b) 的色谱图
Fig. 2 Chromatogram of organic acid standards mixtures (a) and apple juice (b)
1. 草酸(oxilic acid) ; 2. 酒石酸(tartaric acid) ; 3. 奎宁酸(quinic acid) ; 4. 苹果酸(malic acid) ; 5.
莽草酸(shikimic acid) ; 6. 抗坏血酸(ascorbic acid) ; 7. 乳酸( lactic acid) ; 8. 乙酸( acetic acid) ;
9. 柠檬酸(citric acid) ; 10. 富马酸(fumaric acid) ; 11. 琥珀酸( succinic acid) 。
6 4 6 1 分析化学第32 卷
3. 7 标准曲线、检出限、精密度及回收率
取同一苹果汁样品2 份,其中一份作本底(苹果汁样品色谱图见图2b) ,另一份添加一定量的11 种
有机酸标品溶液后测定各成分含量,每份样品进行5 次平行测定,考察方法的回收率和精密度,以峰高
A (mV) 对质量浓度C(mg/ L) 求得线性回归方程,以3 倍信噪比( S/ N) 计算最小检出限量,结果见表1。
可见该方法定量准确灵敏、重现性好、回收率高。
表1 回归分析和检出限
Table 1 Regression analysis and detection limit
有机酸
Organic acid
回归方程
Regression equation
相关系数
Correlation
coefficient
检出限
Detection limit
(mg/ L)
RSD
( %)
回收率
Recovery
( %)
草酸Oxilic acid C = - 0. 0891 + 1. 846 ×10 - 5A 0. 9999 0. 04 0. 97 102. 0
酒石酸Tartaric acid C = - 0. 0879 + 1. 14 ×10 - 4A 0. 9996 0. 09 1. 43 98. 8
奎宁酸Quinic acid C = 0. 0568 + 4. 07 ×10 - 4A 1. 0000 0. 30 0. 87 99. 4
苹果酸Malic acid C = - 0. 2998 + 2. 983 ×10 - 4A 0. 9999 0. 50 0. 31 100. 1
莽草酸Shikimic acid C = - 0. 0036 + 5. 469 ×10 - 6A 1. 0000 0. 01 0. 89 100. 1
抗坏血酸Ascorbic acid C = - 0. 0019 + 2. 464 ×10 - 5A 0. 9998 0. 03 1. 59 96. 8
乳酸Lactic acid C = 0. 3574 + 6. 898 ×10 - 4A 1. 0000 0. 54 1. 16 98. 2
醋酸Acetic acid C = - 0. 0345 + 4. 915 ×10 - 4A 1. 0000 0. 73 1. 10 97. 9
柠檬酸Citric acid C = 0. 0158 + 4. 936 ×10 - 4A 0. 9999 0. 50 0. 96 99. 5
富马酸Fumaric acid C = - 0. 0007 + 4. 164 ×10 - 6A 0. 9999 0. 02 0. 79 99. 2
琥珀酸Succinic acid C = 0. 225 + 1. 05 ×10 - 3A 1. 0000 2. 00 1. 53 99. 6
3. 8 果汁样品中有机酸的定量分析结果
实验选用了苹果、梨、脐橙进行了有机酸的测定,原料经一定的制汁工序处理后,用流动相进行适当
的稀释定容,经0. 45μm 膜过滤后测定。结果表明:天然水果原汁中各种有机酸的含量和种类差别很
大,在一定条件下,可以用此方法来鉴别果汁饮料的质量(表2) 。
表2 果汁中有机酸含量(mg/ L)
Table 2 Contents of organic acid in fruit juices (mg/ L)
果汁样品
Sample
草酸
Oxilic acid
酒石酸
Tartaric acid
奎宁酸
Quinic
苹果酸
Malic acid
莽草酸
Shikimic acid
抗坏血酸
Ascorbic acid
鲜榨脐橙汁Orange juice 34. 25 - 728. 75 865. 00 - 552. 25
鸭梨清汁Ya pear juice - 44. 18 226. 90 1020. 75 76. 88 -
黄元帅苹果清汁
Golden delicious apple juice - 57. 55 200. 38 4085. 00 7. 53 -
果汁样品
Sample
乳酸
Lactic acid
乙酸
Acetic acid
柠檬酸
Citric acid
富马酸
Fumaric acid
琥珀酸
Succinic acid
鲜榨脐橙汁Orange juice - - 5657. 5 4. 27 83. 7
鸭梨清汁Ya pear juice 11. 39 - 1048 8. 00 11. 38
黄元帅苹果清汁
Golden delicious apple juice 53. 25 3. 59 105. 3 0. 27 10. 75
- 表示未检出(undetected)
4 结 论
经多次实验结果证明: 采用Prontosil 1202102C18 H(10 μm ,4. 6 mm i . d. ×250 mm) 色谱柱,以3 %
CH3OH20. 01 mol/ L K2HPO4 (pH 2. 55) 溶液做流动相,流速为0. 5 mL/ min ,在210 nm 波长下,可以较好地
分离和定量果汁中常见的11 种有机酸。该方法具有前处理简单、灵敏度高、测试组分多、速度快等优
点,对于鉴别果汁真假、控制果汁质量具有重要的意义。
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Simultaneous Determination of Eleven Organic Acids in Fruit Juice
by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography
Gao Haiyan1 , Liao Xiaojun1 , Wang Shanguang2 , Hu Xiaosong
3 1
1 ( College of Food Science and Nutritional Engineering , China Agricultural University , Beijing 100083)
2 ( National Engineering and Technology Research Center for Agricultural Products Freshness Protection , Tianjin 300112)
Abstract A method for simultaneous determination of 11 organic acids in fruit juices by reverse phase high perfor2
mance liquid chromatography was developed. Prontosil 1202102C18H column (10μm ,4. 6 mm i . d. ×250 mm) was
used at 30 ℃and mobile phase was 3 %CH3OH20. 01 mol/ L K2HPO4 (pH 2. 55) with flow rate of o. 5 mL/ min.
Detection wavelength was at 210 nm. The relative standard deviations were 0. 3 %～1. 6 % and the recoveries were
96. 8 %～102. 0 %. The correlation coefficients for the linear equations were 0. 9996～1. 0000. The results men2
tioned above indicated that the method was simple , rapid and accurate. It has been applied to the determination of
organic acids in fruit juices.
Keywords Reversed phase high performance liquid chromatography , organic acid , fruit juice
(Received 8 October 2003 ; accepted 29 March 2004)
《分析试验室》征订启事
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影响遍及冶金、地质、石油化工、环保、药物、食品、农业、商品检验和海关等社会各行业及各学科领域。《分析试验室》以
突出创新性和实用性为办刊宗旨,作者来自全国各行业的生产、科研第一线;被“CA”等国内外多家检索数据库、文摘收
录,影响因子连续多年列化学类前列。本刊常设“研究报告”、“研究简报”、“仪器装置与设备”等栏目。“定期评述”栏目
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绍影响广泛的分析化学领域国际学术会议。2004 年新设“特邀专家评论”,聚焦当前科研重点、难点、热点。
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8 4 6 1 分析化学第32 卷, 百拇医药(高海燕1 廖小军1 王善广2 胡小松3 1)